1950 MHz射频电磁场对SRA01/04细胞周期和凋亡的影响

目的：研究显示射频电磁场与白内障的发生关系密切,为了评价晶状体上皮细胞在射频电磁场诱导的白内障发生中的作 用,本实验探讨了1950 MHz射频电磁场暴露对人眼晶状体上皮细胞株（SRA01/04）细胞周期与凋亡的影响。方法：将处于对数生 长期的SRA01/04 细胞暴露或假暴露于频率为1950 MHz,比吸收率（SAR）为2.79 W/kg 的射频电磁场中,每天暴露1 h,每周暴露 5 天,连续暴露4 周。暴露结束后立即收集细胞,显微镜下观察细胞形态变化,噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活力,流式细胞仪 （FCM）检测细胞周期与凋亡。结果：与假辐照组相比,暴露组细胞形态未见明显变化;细胞存活力、细胞周期分布及细胞凋亡率亦 无显著改变（P>0.05）。结论：1950 MHz射频电磁场暴露4 周对SRA01/04 细胞的形态、活力、周期以及凋亡均无明显影响,提示在 本实验条件下1950 MHz 射频电磁场不会诱发白内障的发生。     

1950MHz射频电磁场对SRA01／04细胞周期和凋亡的影响

目的：研究显示射频电磁场与白内障的发生关系密切,为了评价晶状体上皮细胞在射频电磁场诱导的白内障发生中的作用,本实验探讨了1950MHz射频电磁场暴露对人眼晶状体上皮细胞株（SRA01／04）细胞周期与凋亡的影响。方法：将处于对数生长期的SRA01／04细胞暴露或假暴露于频率为1950MHz,比吸收率（SAR）为2．79W／kg的射频电磁场中,每天暴露1h,每周暴露5天,连续暴露4周。暴露结束后立即收集细胞,显微镜下观察细胞形态变化,噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活力,流式细胞仪（FCM）检测细胞周期与凋亡。结果：与假辐照组相比,暴露组细胞形态未见明显变化;细胞存活力、细胞周期分布及细胞凋亡率亦无显著改变（P〉0．05）。结论：1950MHz射频电磁场暴露4周对SRA01／04细胞的形态、活力、周期以及凋亡均无明显影响,提示在本实验条件下1950MHz射频电磁场不会诱发白内障的发生。     

破壁灵芝孢子粉诱导MCF-7细胞凋亡的机理研究

目的：研究破壁灵芝孢子粉对人乳腺癌细胞系MCF-7的诱导凋亡作用。方法：在体外设定不同浓度的孢子粉处理MCF-7细胞系的实验组,细胞培养24h后,用MTT法测定其细胞活力;碘化丙啶（vI）染色后流式细胞仪检测其凋亡情况;罗丹明123（Rodamine123）标记后于酶标仪530nIn处测定其荧光强度值以检测线粒体膜电位情况。结果：与对照组相比,随孢子粉浓度的上升,MCF-7细胞活力和增殖呈剂量依赖型的下降;流式细胞仪检测PI染色显示,各处理组的MCF-7细胞凋亡率随作用浓度的上升而增强,最高浓度组尤为明显;在高浓度组,罗丹明123荧光强度明显降低。这些结果表明孢子粉能抑制MCF-7细胞的活力扣增殖;诱导其凋亡;罗丹明荧光强度的减少,说明MCF-7线粒体膜电位有倒塌扣去极化的情况发生,提示MCF-7细胞的凋亡与线粒体有关。结论：破壁灵芝孢子粉可明显促进MCF-7细胞的凋亡。     

灵芝子实体和孢子粉三萜含量的测定及体外抗肿瘤活性的评价

目的测定灵芝子实体和破壁灵芝孢子粉中的三萜含量,并评价其醇提物的体外抗肿瘤活性。方法采用高氯酸显色法测定灵芝子实体和破壁灵芝孢子粉中的三萜含量,采用磺酰罗丹明B蛋白染色法(sulforhodamine B,SRB)评价灵芝子实体和破壁灵芝孢子粉醇提物对宫颈癌He La细胞、结肠癌HCT-116细胞和乳腺癌MCF-7-ADM细胞的体外抗肿瘤活性。结果研究的灵芝子实体中三萜质量分数为0.92%,破壁灵芝孢子粉供试品中三萜质量分数实测值为2.95%,但是灵芝孢子粉中脂肪油对高氯酸显色法有极大的干扰,因此破壁灵芝孢子粉三萜的实测值可能远高于实际值。活性评价结果显示,灵芝子实体的醇提物在100μg/m L时,其对人宫颈癌He La细胞和乳腺癌MCF-7-ADM细胞表现出了较强的抑制作用,抑制率分别为94.54%和71.30%;对结肠癌HCT-116细胞表现出较弱的抑制作用,抑制率为20.68%。破壁灵芝孢子粉的醇提物在100μg/m L和10μg/m L时,其对宫颈癌He La细胞表现出了弱的抑制作用,对另外2种细胞系仅在100μg/m L时表现出较弱的抑制作用。结论灵芝子实体的醇提物含有三萜并具有较好的抗肿瘤活性,可以将其开发为辅助治疗癌症的药物或保健品。含有脂肪油的灵芝孢子粉直接采用高氯酸比色法测定会高估其三萜的含量,需要进一步开发准确、可行的测定方法。     

玉米芯抗肿瘤活性研究

采用MTT法检测玉米芯水提物对人结肠癌细胞株SW480、SW620、DLD1以及正常人肝细胞HL-7702的增殖活力的影响;倒置显微镜下观察细胞形态的变化;DAPI染色法检测该水提物对不同细胞株细胞核凋亡的影响.结果表明:不同浓度(1、2、4、6 mg/mL)的玉米芯水提物对人结肠癌细胞株均有抑制能力,且呈明显的量效依赖关系.用该水提物处理正常细胞HL-7702,在低浓度时没有抑制作用,在高浓度时略有抑制作用.该水提物对各细胞株作用24h,半数抑制浓度(IC50)分别为2、3、4、6 mg/mL.显微镜观察表明:经该玉米芯水提物处理后的结肠癌细胞,形态发生明显的改变,细胞形状变圆,贴壁细胞数量明显减少.DAPI染色结果显示:多数细胞核表现出染色质的不均一性,有典型的“梅花”状凋亡小体出现.     

斑褐孔菌石油醚提取物体外抗肿瘤活性研究

探讨斑褐孔菌石油醚提取物(PEFP)体外抗肿瘤活性及其机制。采用磺酰罗丹明染色法(SRB法)考察PEFP对人肝癌细胞SMMC-7721、人胃癌细胞SGC-7901、人喉癌上皮细胞Hep-2增殖的影响。倒置相差显微镜、透射电镜观察PEFP作用SMMC-7721后的细胞形态及超微结构的变化;流式细胞术检测PEFP作用SMMC-7721后细胞周期的改变情况。实验结果显示PEFP对上述三种人恶性肿瘤细胞均表现出明显的抑制效果,且呈剂量效应关系,其半数抑制浓度(IC50)分别为52.72、69.18、58.88μg/mL。取1/2 IC50浓度的PEFP作用于SMMC-7721 48 h后,细胞形态结构及细胞周期发生改变,G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少。PEFP可能通过阻滞SMMC-7721细胞周期于G0/G1期来抑制肿瘤细胞的增殖,具有较明显体外抗肿瘤活性。     

重组腺病毒Ad-GFP-C197的构建及其抗肿瘤活性研究

端粒酶是维持端粒长度的重要组成部分,是肿瘤发生的标志物之一。构建了能表达人端粒酶逆转录酶(h TERT)C端936-1132氨基酸片段(C197)的重组腺病毒Ad-GFP-C197,并观察其对Hela细胞增殖的影响。结果显示,Ad-GFP-C197感染Hela细胞后,采用免疫印迹法检测到C197在细胞内得到高效表达。此外,AdGFP-C197明显抑制Hela细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并且降低Hela细胞中端粒酶活性。上述研究为进一步研究h TERT C末端功能打下基础,并为肿瘤的生物治疗提供新的思路。     

簇生沿丝伞粗多糖的抗肿瘤活性研究

应用传统多糖提取方法从簇生沿丝伞中获得粗多糖,初步纯化后进行了抗癌活性的体外及体内实验。结果表明,簇生沿丝伞中多糖成分具有很好的抗肿瘤活性,对MCF-7细胞体外细胞增殖抑制率达22.4%,体内抗肝癌抑瘤率达33.79%。     

罗汉果醇抗肿瘤活性及其作用机制研究

罗汉果醇是罗汉果皂苷的苷元,有研究报道罗汉果皂苷V具有防癌抑癌作用。该研究采用噻唑蓝实验( MTT法)检测罗汉果醇对不同肿瘤细胞增殖的抑制情况,以及不同浓度的罗汉果醇对CNE1细胞的增殖抑制率;应用细胞克隆形成实验进一步验证罗汉果醇对CNE1细胞增殖的抑制作用;采用Annexin V/PI 双染法检测罗汉果醇对CNE1细胞凋亡的影响;以实时定量PCR技术检测罗汉果醇对CNE1细胞中Caspase-3、Sur-vivin、Bax和Bcl-2基因的mRNA 表达水平的影响。结果表明：罗汉果醇能显著抑制DU145、HepG2、A549、CNE1、CNE2细胞的增殖,其中对CNE1细胞增殖的抑制作用最为显著,并呈剂量依赖性,其半数抑制浓度IC50为(81.48±4.73)μmol·L-1;通过对CNE1细胞进一步的克隆形成实验,也验证了这一点;Annexin V/PI 双染法可见随着浓度的增加,凋亡比例增加;实时定量PCR技术检测显示罗汉果醇处理后,促凋亡基因Caspase-3、Bax的表达增加,抗凋亡基因Survivin、Bcl-2的表达减少。因此,罗汉果醇可能是通过促进Caspase-3、Bax等促凋亡基因和抑制Survivin、Bcl-2等抗凋亡基因的表达,来诱导肿瘤细胞凋亡,进而发挥抗肿瘤活性。     

肉桂油成分分析及肉桂醛体外抗肿瘤活性研究

目的探讨肉桂醛对不同肿瘤细胞株的生长抑制作用。方法通过水蒸气蒸馏法提取肉桂油,用气相色谱—质谱联用仪进行肉桂油成分分析;采用噻唑蓝（MTT）比色法检测肉桂醛对体外培养的人宫颈癌细胞系HeLa细胞株、人肺癌细胞系A-549细胞株和人肝癌细胞系HepG2细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度（IC50）。结果肉桂油的收率为1.96%,分析了肉桂油中的10种成分,主要为肉桂醛,占总馏出峰面积的93.94%;肉桂醛能抑制人宫颈癌细胞系HeLa细胞、人肺癌细胞系A-549细胞和人肝癌细胞系HepG2细胞增殖,且呈剂量依赖性,IC50值分为0.20、0.36和0.73 mg/mL。结论肉桂醛具有体外抗肿瘤活性。     

灵芝子实体、菌丝体及孢子粉中多糖成分差异比较研究

为探讨灵芝子实体、菌丝体和孢子粉3种材料中多糖成分的差异,分别运用苯酚硫酸法进行多糖含量测定,运用离子色谱分析其酸水解后单糖组成,并运用HPLC分析各多糖图谱及经α-淀粉酶和β-1,3-葡聚糖酶处理后HPLC图谱的变化,结果发现,灵芝菌丝体中多糖含量最高,达到3.81%,孢子粉多糖含量为1.8%,灵芝子实体中多糖含量最低,仅为0.59%;水解后的单糖组成及摩尔比也有差异,子实体的单糖主要为葡萄糖和半乳糖,菌丝体和孢子粉的单糖主要为葡萄糖;HPLC图谱显示3种多糖出峰位置和分子量也不同,酶解效果表明多糖结构也相差较大。各样品多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7释放NO的产量的影响上,菌丝体与子实体多糖都表现出了很好的活性,而孢子粉多糖却呈现出较低活性。实验结果表明灵芝子实体、菌丝体和孢子粉3种材料的多糖成分差异大,在医药保健品使用中应区分使用。     

Mutations specific to spore maturation in the asexual fruiting body of dicytostelium discoideum

Three mutations affecting spore maturation in the asexual fruiting body of Dictyostelium discoideum are assigned to a new locus, sprJ, on linkage group IV. Strains carrying mutations at the sprJ locus do not form mature spores, yet the cell patterning (spore, stalk and disc cell ratios) is apparently normal. These mutations will be useful to delineate branch points between the cell patterning and spore maturation pathways. There are some unusual features of the sprJ-containing mutants. In particular each of the parent strains of the three mutants has incomplete spore maturation as determined by colony-forming ability after heat shocking at 45°C. A mutation allowing growth in the presence of benlate (600 μg/ml), benA351, is mapped to linkage group I.     

基于GC-MS和UPLC-QTOF/MS技术的灵芝孢子粉化学成分分析

采用极性不同的6种溶剂（石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇和水）、按索氏提取法逐级萃取破壁灵芝孢子粉,并同时运用气相色谱-质谱联用（GC/MS）和超高效液相串联四极杆飞行时间质谱（UPLC-QTOF/MS）技术对各萃取物进行化学成分分析与鉴定。结果表明：GC/MS共鉴定出101种化合物,其中酸类10种、酯类40种、醇类7种、酮类6种、酚类2种、烃类18种、甾类9种和杂原子化合物9种;UPLC-Q-TOF/MS共推断出40种化合物,其中倍半萜类1种、二萜类1种、三萜类9种、生物碱类4种、酰胺类7种、有机酸类9种以及其他化合物9种。两种测定方法间共有化合物仅1种,仅存在于5种有机溶剂（石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇和甲醇）萃取物之一的化合物共105种,2种或2种以上萃取物共有的化合物共31种,实验方法较好地实现了样品中化合物组分的充分分离,扩大了可检测化合物的范围。研究结果为灵芝孢子粉中化学成分的系统分析与鉴定、及灵芝孢子粉的化合物谱图库的完善提供了基础资料,为相关药理、药效分析及灵芝的药用模式真菌研究提供参考。     

Anti-tumor activities of the antlered form of Ganoderma lucidum in allogeneic and syngeneic tumor-bearing mice

We investigated the anti-tumor effects of a dry powder preparation of the antlered form of Ganoderma lucidum (G. lucidum AF, rokkaku-reishi in Japanese), a variant type of G. lucidum, not only in allogeneic Sarcoma 180-bearing ddY mice, but also in syngeneic MM 46-bearing C3H/He mice. G. lucidum AF inhibited tumor growth and elongated the life span when orally administered to mice by free-feeding of a 2.5% G. lucidum AF-containing diet. It also showed anti-tumor activity in spite of post-feeding after tumor inoculation. G. lucidum AF significantly countered the depression of splenic CD8+ cells and protected the decrease in interferon-gamma (IFN-gamma) production in regional lymph nodes of MM 46-bearing mice, indicating that the anti-tumor activity of G. lucidum AF might be caused by its immunostimulating action. These results suggest that the ingestion of G. lucidum AF can be useful for the prevention and curing of cancer.     

灵芝子实体中两个新的天然三萜类化学成分的分离、纯化和鉴定

本文采用硅胶和MCI柱层析的方法,从灵芝Ganodermalucidum子实体中分离纯化三萜类化合物。从灵芝子实体的氯仿萃取层中,分离纯化到灵芝属中的2个新天然产物,运用现代NMR技术分析确定了它们的结构,分别为methyl7β-hydroxy-3,11,15,23-tetraoxo-5α-lanost-8-en-26-oate(methylganoderateD)(Ⅰ)和methyl12β-acetoxy-3,7,11,15-tetraoxo-5α-lanost-8-en-24-oate(methyllucidenateD)(Ⅱ)。     

Possible mechanism underlying the antiherpetic activity of a proteoglycan isolated from the mycelia of Ganoderma lucidum in vitro

GLPG (Ganoderma lucidum proteoglycan) was a bioactive fraction obtained by the liquid fermentation of the mycelia of Ganoderma lucidum, EtOH precipitation, and DEAE-cellulose column chromatography.GLPG was a proteoglycan with a carbohydrate: protein ratio of 10.4: 1. Its antiviral activities against herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and type 2 (HSV-2) were investigated using a cytopathic inhibition assay. GLPG inhibited cell death in a dose-dependent manner in HSV-infected cells. In addition, it had no cytotoxic effect even at 2 mg/ml. In order to study the mode of action of the antiviral activity of GLPG, cells were treated with GLPG before, during, and after infection, and viral titer in the supernatant of cell culture 48 h post-infection was determined using a TCID((50)) assay. The antiviral effects of GLPG were more remarkable before viral treatment than after treatment. Although the precise mechanism has yet to be defined, our work suggests that GLPG inhibits viral replication by interfering with the early events of viral adsorption and entry into target cells. Thus, this proteoglycan appears to be a candidate anti-HSV agent.     

药用昆虫蜣螂对灵芝发酵产物体外抗肿瘤活性的影响

采用体外高通量筛选技术检测了补加药用昆虫蜣螂前后灵芝发酵产物的体外抗肿瘤活性。结果表明,补加和不补加蜣螂发酵后所得的胞内和胞外三萜样品对肉瘤细胞L290、肠癌细胞SW620、血癌细胞K562和肝癌细胞BEL7402都有显著的抑制作用(P<0.05)。在补加蜣螂发酵后,灵芝胞内三萜的抑制作用没有得到增强;但胞外三萜样品对BEL7402细胞的抑制作用得到了增强,补加和不补加蜣螂发酵后所得胞外三萜的抑制率分别为41.74%和32.37%(P<0.05)。由于补加蜣螂发酵后,新生成了胞外三萜lucidone C,因而对lucidone C的抗BEL7402肝癌活性进行了试验。结果显示,lucidone C在100μg/mL时,对BEL7402的抑制率为50.37%,提示lucidone C可能增强了补加蜣螂后灵芝胞外总三萜对BEL7402细胞的抑制作用。     

HPLC测定灵芝子实体水提物及相关产品中三萜的含量

灵芝药品大多以灵芝子实体水提物为原料,为快速准确测定灵芝子实体水提物及相关产品中三萜的含量,建立了具有较好分离效果的HPLC分析测定方法。通过优化色谱柱和洗脱条件,优选出Agilent Zorbax SB-Aq C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-乙酸水溶液(0.01%)为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长252 nm,柱温30℃,该条件下灵芝酸A、灵芝酸F等10种灵芝酸得到较好的分离。方法学考察显示该分析方法精密度、重复性、稳定性和加样回收率的RSD值均小于5%,可以用于灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝酸B等10种灵芝酸的定量检测。通过对灵芝子实体原料、水提物和市售灵芝产品中10种三萜类成分分析发现,灵芝子实体水提物中均含有这10种三萜,含量为2.52%–6.83%,较子实体原料大幅提高,市售的灵芝产品中的三萜含量为0.27%–0.84%。该方法的建立为灵芝水提物及其产品质量标准的建立奠定基础。     

Mass separation and in vitro immunological activity of membrane-fractionated polysaccharides from fruiting body and mycelium of Agaricus subrufescens

Membrane technology has been applied to separate polysaccharides from Agaricus subrufescens (ASPs). The membrane-retained fractions and unfractionated preparations have been tested for in vitro immunological activity. Both the microfiltration (MF) and ultrafiltration (UF1) membranes were able to separate high-molecular weight polysaccharides from fruiting body (ASP-FB) and submerge-fermented mycelium (ASP-SmF) extracts. All fractions showed immunostimulatory effects on RAW 264.7 macrophages, measured by TNF-??, iNOs gene expression, and NO production. In contrast, antibody and proliferation levels in B lymphoblastoid SKW 6.4 cells were significantly increased after treatment with ASP-FB, but did not with ASP-SmF preparations. The ASPs- and LPS-induced stimulation could be differentiated by the finding that polymyxin B, a specific inhibitor of LPS, did not significantly affect the immunoactivating response and proliferation activity of ASPs on macrophages and B cells, respectively. Furthermore, the ASP-FB treatment was unable to induce IL-6 production by B cells unlike LPS activation, sustaining distinct signaling pathways for ASP-FB and LPS. The overall results provided additional information about the action of ASPs on the immune system and support the membrane method to separate and concentrate high-molecular weight ASPs for immunopharmacological and biotechnological applications.