60Coγ射线诱变褐色高温单孢菌及其在粪便发酵中的应用研究

本试验以褐色高温单孢菌(Therm om onospora fusca)为出发菌株,通过60Coγ射线诱变孢子悬液,采用透明圈法初筛和摇瓶培养复筛的方法,获得了一株纤维素酶高产菌株AV5,与出发菌株相比,其产酶能力提高1.8倍。接种牛粪发酵后,牛粪中粗纤维含量降低率为32.95%,是接种出发菌株相对降解率的1.7倍。     

产几丁质酶褐色喜热裂孢菌的分离鉴定及产酶特性初步研究

采用选择性培养基从土壤中分离到1株产几丁质酶的微生物菌株YX,经形态和分子鉴定为褐色喜热裂孢菌(Thermobifida fusca)。进一步在摇瓶中比较了T.fusca YX在纤维二糖、几丁质、或羧甲基纤维素钠为碳源的培养基中的产酶特性,YX菌株在5 L发酵罐中以几丁质为碳源的培养基发酵到22 h左右时发酵液几丁质酶活即可达到1.7 U/m L。本文首次报道褐色喜热裂孢菌能够产生几丁质酶,具有潜在的应用价值。     

高温单孢菌属分类研究进展

自从Henssen于1957年建立高温单孢菌属至今,高温单孢菌属各菌种的分类地位一直处于不断的变化之中。近年来,随着该属一些种的重新分类以及新种的发现,高温单孢菌属的分类发生了很大的变化。这主要是由于分类手段已由传统的形态学分类方法向现代的多相分类方法过渡。介绍了自高温单孢菌属建立以来,该属分类的研究现状,认为高温单孢菌属在系统分类上尚需进一步的研究。     

黄孢原毛平革菌抗营养阻遏产漆酶诱变育种及其产酶特性

【目的】筛选能抗营养阻遏产漆酶的黄孢原毛平革菌,论证其产漆酶的确定性及抗营养阻遏产木质素酶的可行性,为白腐菌产酶代谢调控、木质素降解机理的研究奠定基础。【方法】利用重复紫外诱变法,以愈创木酚富氮鉴别培养基筛选目标菌株;比较不同营养条件下菌体生长与产酶动力学差异研究产酶营养调控机理;通过热处理、排除锰离子和加入过氧化氢酶等不同措施论证黄孢原平毛平革菌能否产生漆酶。【结果】3种不同方法均证实选育到的pcR5305和pcR5324菌株在限氮与富氮条件下均能产生漆酶,pcR5305和pcR5324在限氮条件下产漆酶分别达到203.5、187.6 U/L;在富氮条件下为220.6、183.9 U/L,而原菌株pc530在两种条件下都基本不产生漆酶。二菌株产漆酶调控方式不同,pcR5305漆酶产生与菌体生长同步,而pcR5324漆酶产生却受营养氮阻遏。二菌株同时具有抗营养阻遏高产木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)(分别为LiP 1343.2、MnP 252.2 U/L;LiP 1169.5、MnP 172.4 U/L)的能力。【结论】筛选到的黄孢原毛平革菌变异菌株能产漆酶,同时表现了抗营养阻遏产漆酶、木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶的能力,具有重要的生产应用与理论研究价值,为白腐菌产酶代谢调控机理研究提供了原始菌株并奠定了良好的基础。     

长蠕孢菌产孢条件的研究*

对番茄褐斑病原菌—长蠕孢菌产孢条件进行了研究,结果表明燕麦片琼胶培养基、Czapek培养基和PDA+番茄叶片能促进产孢子,V8汁、PSA和番茄汁培养基抑制产孢;碳源果糖明显促进产孢,甘露醇抑制产孢子;氮源氯化铵促进产孢,蛋白胨和硫酸铵抑制产孢;光照和紫外线照射对长蠕孢菌产孢有明显促进作用,特别是紫外线照射60~80min时产孢量达到最大;偏低温或偏高温以及微碱性环境能促进长蠕孢菌产孢,温度为15℃或30℃,pH8~9时最有利于产孢。     

蜜环菌遗传测定的单孢分离和培养方法*

从平板中直接分离担子菌萌发孢子的单孢分离方法,主要利用自制的毛细管和显徽玻璃针等简单工具操作。该法简便快速,抗污染,获得单孢率高。同时报道一种改进型的担子菌互交不育性测定用培养基MEJA,与国内外目前常用的SR和MEA培养基相比,增加一项判断标准,使互交不育性和互交可育性的反应更加清晰可靠。     

小单孢菌叠加诱变与发酵过程的研究

采用庆大霉素产生菌—绛红小单孢菌 (M. purpurea) 在培养36h时添加15μg/ml的青霉素,对培养至48h对数生长期的菌体进行紫外线照射+亚硝基胍复合处理,置培养箱中37℃培养5~8d待长出菌落后再用紫外线照射叠加处理,获得一高产菌株N-14。试管发酵生测效价1913u/ml(对照625u/ml);摇瓶发酵培养120h达2178(u/ml),比对照(1243u/ml)提高75.2%;并进行了5L发酵罐发酵培养,发酵过程中测定了发酵液还原糖、总糖、氨基氮、pH、菌体浓度等代谢参数,探索了适合N-14的培养条件,连续5批次生测效价平均1967u/ml,较对照1171u/ml提高了68%, 效果明显。     

常压室温等离子体快速诱变绿色糖单孢菌筛选 木聚糖酶高产菌株及其酶学性质研究

[目的]利用常压室温等离子体快速诱变绿色糖单孢菌,筛选耐热耐碱木聚糖酶高产菌株,并对其进行酶学性质分析,确保其适用于生物制浆漂白工艺.[方法]采用刚果红平板水解圈法结合摇瓶发酵胞外酶测定法进行菌株筛选,并通过DNS木聚糖酶活性测定等方法对来源于不同突变株的木聚糖酶进行酶学性质分析对比.[结果]筛选出遗传稳定性良好的两株木聚糖酶高产菌株AT24和AT22-2,以麦草浆为诱导底物的粗酶液中,突变株AT24及AT22-2所产的木聚糖酶活性分别为512.74、552.70U/mL,分别为原始菌株S.v的16和17倍的.来源于突变株AT22-2的木聚糖酶的最适反应pH为9.5,最适反应温度为90℃,在50℃-90℃温度范围内具有良好的热稳定性,在100℃条件下处理30 min剩余酶活仍为68％;突变株AT24所产木聚糖酶的最适反应温度为60℃,最适pH为10.0,在60℃-80℃的高温环境下,突变株AT24所产的木聚糖酶具有良好的热稳定性.[结论]突变株AT22-2所产具有耐碱耐高温性质的木聚糖酶,在应用领域尤其在纸浆造纸行业具有较大的潜在应用价值.     

蚧镰孢菌的生长及产孢研究

蚧镰孢菌孢子萌发及产孢的最适温度是 2 8℃ ,菌生长的适温是 2 4℃～ 2 6℃。孢子萌发受 pH值影响较小 ,菌生长以 pH6.5～ 8.5为最适 ,而 pH8.5时产孢最多。菌的生长也可以调节培养液的pH值 ,使其达到最适生长的 pH范围。光照对该菌的生长及产孢也有一定影响。蚧镰孢菌能利用多种碳源和氮源 ,也能以几丁质为唯一碳源和氮源生长 ,但生长很差。Ca2 、Fe2 等金属离子以及硫胺素、核黄素、叶酸等维生素的加入可使产孢量增加 ,而维生素的作用更明显。该菌的产孢高峰期一般在 2 1天左右 ,而且在相同条件下 ,接种量越大 ,产生最大量孢子所需的时间越短。     

庆大霉素产生菌棘孢小单孢菌原生质体形成、再生及融合重组的研究

在含0．3％甘氨酸的液体培养基中培养庆大霉素产生菌——棘孢小单孢菌,其菌丝形态有明显的改变,易被溶菌酶消化细胞壁而释放大量原生质体。菌丝的培养龄影响其相应原生质体的再生活性(即再生成菌落的能力)。以72h为最佳,48及120h菌龄的原生质体再生频率依次相当于72h的40％和10％左右。以PEG4000为融合剂。用直接法检出重组子,重组频率约为10～6,融合重组子中有一些菌株庆大霉素的摇瓶发酵效价在1900u／m1左右,比对照菌株有很大的提高。     

60Co-γ射线诱变选育富硒酵母菌株

本试验以产朊假丝酵母菌(Candida utilis)为出发菌株,通过60Co-γ射线诱变,采用Na2SeO3抗性平板初筛和摇瓶培养复筛的方法,获得了一株高硒和高硒蛋氨酸含量的菌株CU7,与出发菌株相比,生物量达到10.58g/L、总硒提高了2.01倍.硒蛋氨酸的含量提高了2.44倍,硒蛋氨酸与总硒的比值也由49.85...     

纤维素酶的固态发酵及酶学性质的研究

对绿色木霉产纤维素酶的固态发酵条件进行研究,显示其最优产酶条件为:稻草:麸皮=3:2,水分250%,最佳氮源为0.5%(NH4)2SO4,最佳培养时间3天,温度30℃,接种量10%,初始pH6.0～7.0,在此条件下,每克干曲酶活分别高达18.4FPAU/g,56.7CMCU/g。同时对酶解作用条件进行了初步研究,发现pH5.2时对滤纸酶活力最高,pH4.8时对脱脂棉活力最高。降解温度以滤纸55℃,脱脂棉50℃为最佳。实验还发现乙醇对酶的降解有抑制作用。     

草鱼体内产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件的研究

利用刚果红选择平板和以特异性的作用底物作碳源进行液态发酵测定酶活相结合的方法,从草鱼肠道内筛选出了1株能产纤维素酶的细菌菌株,并对筛得菌株的液态发酵产酶条件进行了研究,初步确定菌株产酶的最佳培养条件:以1%(质量与体积比)羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为碳源,以1%(质量与体积比)的蛋白胨为氮源,初始pH值为7,37℃,180 r/min条件下培养48 h。     

Co-operative actions and degradation analysis of purified xylan-degrading enzymes from Thermomonospora fusca BD25 on oat-spelt xylan

AIMS: To determine and quantify the products from the degradation of xylan by a range of purified xylan-degrading enzymes, endoxylanase, beta-xylosidase and alpha-l-arabinofuranosidase produced extracellularly by Thermomonospora fusca BD25. METHODS AND RESULTS: The amounts of reducing sugars released from oat-spelt xylan by the actions of endoxylanase, beta-xylosidase and alpha-l-arabinofuranosidase were equal to 28.1, 4.6 and 7% hydrolysis (as xylose equivalents) of the substrate used, respectively. However, addition of beta-xylosidase and alpha-l-arabinofuranosidase preparation to endoxylanase significantly enhanced (70 and 20% respectively) the action of endoxylanase on the substrate. The combination of purified endoxylanase, beta-xylosidase and alpha-l-arabinofuranosidase preparations produced a greater sugar yield (58.6% hydrolysis) and enhanced the total reducing sugar yield by around 50%. The main xylooligosaccharide products released using the action of endoxylanase alone on oat-spelt xylan were identified as xylobiose and xylopentose. alpha-l-Arabinofuranosidase was able to release arabinose and xylobiose from oat-spelt xylan. In the presence of all three purified enzymes the hydrolysis products of oat-spelt xylan were mainly xylose, arabinose and substituted xylotetrose with lesser amount of substituted xylotriose. CONCLUSIONS: The addition of the beta-xylosidase and alpha-l-arabinofuranosidase enzymes to purified xylanases more than doubled the degradation of xylan from 28 to 58% of the total substrate with xylose and arabinose being the major sugars produced. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: The results highlight the role of xylan de-branching enzymes in the degradation of xylan and suggest that the use of enzyme cocktails may significantly improve the hydrolysis of xylan in industrial processes.     

培养条件对一株木霉产纤维素酶过程影响的研究

采用固态发酵和连续监测正交实验结果的方法,研究了培养温度、初始pH值、液料比和接种量对一株木霉(Trichodermasp.)发酵过程中微晶纤维素酶活、CMC酶活和滤纸酶活的影响及影响程度。指出液料比在整个发酵过程中是对产酶影响最大的因素,温度在发酵初期影响较大,初始pH和接种量的影响均不显著。总体看来,培养温度、初始pH值、液料比和接种量分别为30℃、4、7和5%是比较合适的。     

1株抑制土传病原菌且产纤维素酶芽胞杆菌筛选及产酶条件的研究

通过刚果红染色法和DNS分光光度法对6种芽胞杆菌分泌胞外纤维素酶进行筛选,再通过管碟法测试对5种病原菌的抑菌作用,得到1株芽胞杆菌（菌株编号为X-02）酶活达182.5 U/mL,而且对几种土传病害有抑制作用。并对其产酶发酵培养基碳源、氮源及初始pH、发酵温度、接种量、摇瓶转速和时间进行优化,结果显示该菌株最佳碳源是2%CMC-Na,其次是葡萄糖,二者产酶之差只为21 U/mL。考虑大量生产的成本和方便性（CMC-Na溶解慢）,选择葡萄糖为碳源,氮源为2.0%蛋白胨与酵母膏复合氮源,在pH值为8.0、温度37℃、接种量为2%、转速为180 r/m in、时间48 h条件下酶活达到391.0 U/mL酶液,比优化前提高了2.1倍。     

UV与DES复合诱变选育高产脂肪酶菌株

以产脂肪酶菌株BaciUus sp CS-4为出发菌株,进行了UV与硫酸二乙酯(DES)复合诱变处理.筛选出一株高酶活的目的菌株,命名为Bacillus spDE-8.其酶活为每毫升14.85U,比出发菌株提高48.2%.传代实验证明,其遗传性能稳定.     

细菌产纤维素酶和脂肪酶固体培养基及接种和培养时间的研究

为准确鉴定和筛选产纤维素和脂肪酶细菌，通过平板扩散法测定不同氮源培养基对细菌产纤维素酶和不同碳源培养基对细菌产脂肪酶活性的影响，确定细菌产纤维素酶和脂肪酶的最佳培养基，利用最佳培养基研究不同琼脂含量、海水和淡水溶剂、菌种的培养时间及接种后的培养时间对细菌纤维素酶和脂肪酶活性的影响。结果表明，以蛋白胨为氮源的A培养基为细菌产纤维素酶最佳培养基，以Tween-20为碳源的培养基为细菌产脂肪酶最佳培养基；培养基中琼脂的最佳用量均为13‰；所有菌株在海水培养基上产生的纤维素酶活性比淡水培养基上高，但脂肪酶活性并非如此；鉴定和筛选产纤维素酶和脂肪酶细菌接种菌种的最佳培养时间分别为18 h和24~32 h，测定细菌产纤维素酶和脂肪酶的最佳培养时间分别为48~72 h和120 h。     

纤维素酶降解小麦秸秆最适条件的研究及其动力学分析

以小麦秸秆为原料,通过正交实验对纤维素酶降解秸秆纤维的影响因素进行了研究。结果表明,影响小麦秸秆降解的因素依次为:酶量>酶解时间>料液比>反应温度,其最适条件是:加酶量为40u/g,酶解时间为10h,反应温度为40℃,料液比为1∶3,总糖含量达到43.24%。以米氏方程为基础,建立起最适酶解条件下总纤维素降解的动力学模型。