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1.
目的:探讨miR-148a在5-aza诱导人骨髓间充质(hMSCs)成心肌样分化中的表达及miR-148a对hMSCs体外成心肌样分化的生物学作用。方法:免疫荧光检测5-aza诱导hMSCs分化后心肌细胞特异性标志物α-MHC表达水平;qRT-PCR和Western blot分别检测miR-148a和DNMT1在hMSCs成肌样分化中的表达水平。利用Lipofectamine TM 2000将miR-148a mimics和miR-148a inhibitor分别瞬时转染hMSCs,Western blot检测心肌细胞特异性标志物α-MHC的蛋白表达水平。利用生物信息学技术预测miR-148a的靶基因结合位点利用双荧光素酶报告基因系统鉴定其对靶基因3'UTR的结合序列。通过DNMT1 shRNA和miR-148a inhibitors共转到hMSCs中,研究miR-148a在hMSCs成心肌样分化中的调控作用。结果:hMSCs经5-aza诱导分化后,心肌细胞特性标志物α-MHC蛋白水平明显上调。miR-148a在hBMSCs成肌样分化中显著性增加(P<0.01),DNMT1表达水平显著降低。过表达miR-148a能提高hBMSC中心肌细胞特异性标志物α-MHC表达水平,而抑制miR-148a则能降低其水平(P<0.01)。DNMT1沉默可以阻断miR-148a对hMSCs的诱导成肌样分化作用。结论:miR-148a在hMCCs成肌样分化中表达上调,通过靶定和调控DNMT1基因的表达,并对hMSCs心肌向分化具有正向调控作用。 相似文献
2.
本研究主要是探讨miRNA-29a通过调控血小板源性生长因子(PDGF)对诱导肺癌细胞中的凋亡作用。PDGF是肺动脉高压(pah)发生和发展的关键因素。本研究进一步探讨miRNA-29a在PDGF诱导的肺癌细胞中的作用及其调控机制。首先,在PDGFbb处理下表征miRNA-29a的表达模式,发现PDGFb信号转导抑制miRNA-29a的表达;然后,进行了细胞流式实验,揭示miRNA-29a在抑制肺癌细胞增殖中的重要作用。流式细胞仪分析提示miRNA-29a通过影响细胞周期从g0/g1期向s期的转变来调控肺癌细胞的增殖。总的来说,本研究提供了miRNA-29a调控的PDGFb诱导肺癌细胞功能障碍的新发现,这意味着miRNA-29a可能作为肺癌疾病的治疗和诊断的候选标志之一。 相似文献
3.
《基因组学与应用生物学》2017,(6)
组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化(H3K27me3)和第9位赖氨酸的二甲基化(H3K9me2)参与很多重要的生物学过程,如与基因转录调控和细胞分化密切相关。H3K27me3和H3K9me2分别由赖氨酸甲基转移酶(KMTs)Ezh2和G9a催化形成。在基因转录调控和细胞分化调控过程中Ezh2和G9a之间是否存在协同,目前还不清楚。我们的前期研究表明,在成肌细胞中,同源异型框蛋白(homeoprotein)Msx1可分别招募Ezh2和G9a到其抑制靶标基因,通过影响其靶标基因的H3K27me3和H3K9me2的状态来抑制靶基因的表达,从而抑制肌肉细胞的分化。为了进一步探究Ezh2和G9a在Msx1介导的抑制成肌细胞分化过程中是否具有协同作用,我们对比了同时敲低Ezh2和G9a与分别敲低Ezh2或G9a对Msx1抑制成肌细胞分化、结合并抑制靶标基因能力的影响,研究显示双敲的影响更大。我们的研究表明,在Msx1抑制成肌细胞分化的过程中,Ezh2和G9a具有协同作用。另外,我们的研究为基因转录调控和细胞分化提供了新的分子机制。 相似文献
4.
胰腺祖细胞在糖尿病治疗中有着巨大的潜能,其增殖分化受到microRNAs等多种机制调控。该文探究了miR-148a水平升高对胰腺祖细胞增殖的影响及可能的机制。结果显示,miR-148a在胰腺祖细胞分化过程中升高,表明其可能参与胰腺的发育进程。光镜观察和免疫染色检测表明,过表达miR-148a可以显著抑制胰腺祖细胞的增殖;流式检测结果显示,miR-148a使细胞停滞在S期;Western blot结果显示,miR-148a不是通过诱导凋亡来抑制细胞增殖,而很可能是通过抑制AKT信号通路来抑制胰腺祖细胞的增殖;q RT-PCR结果表明,过表达miR-148a可以上调PTEN的mRNA表达水平。以上研究表明,过表达miR-148a可能通过上调PTEN来抑制AKT通路,从而实现对胰腺祖细胞增殖的抑制。此研究为今后利用microRNAs抑制剂治疗胰腺疾病提供理论基础,也为利用microRNAs治疗胰腺疾病提供线索。 相似文献
5.
6.
目的:研究胃癌相关miR-148a与胃泌素受体CCKBR的调控关系,并分析其调控结合位点。方法生物信息学预测人CCKBR 3’ UTR上miR-148a 的结合位点;利用 PCR扩增 miR-148a 前体构建真核表达载体;Northern Blot检测miR-148a真核表达载体的表达;构建CCKBR 3’UTR野生型和突变型荧光素酶报告载体,并利用双荧光素酶活性分析检测分析miR-148a对CCKBR基因表达的调控和结合位点;Western Blot检测miR-148a过表达对CCKBR蛋白表达的作用。结果在人CCKBR 3’UTR上找到3个miR-148a的潜在结合位点;miR-148a真核表达载体构建成功,转染胃癌细胞后可显著过表达;miR-148a通过人CCKBR 3’UTR上423bp处的结合位点抑制CCKBR的基因表达;miR-148a过表达显著抑制胃癌细胞中CCKBR的蛋白表达。结论 CCKBR是胃癌相关miR-148a的靶基因,miR-148a通过其3’UTR上的结合位点抑制CCKBR的基因表达和蛋白合成,提示miR-148a可能通过调控CCKBR参与胃癌的发生发展。 相似文献
7.
《生物技术》2014,(2)
目的:观察神经细胞氧化损伤时microRNA-199a(miRNA-199a)和Sirt1表达的变化,探讨miRNA-199a对Sirt1的调控作用。方法:不同浓度双氧水(600μmol/L,1 200μmol/L)刺激体外培养的SH-SY5Y细胞12h造成损伤。MTT检测细胞活力,DCFA-DA探针检测细胞内活性氧水平,Hochest染色分析细胞凋亡,RT-PCR检测miRNA-199a的表达,细胞免疫荧光和Western blot检测Sirt1蛋白水平。结果:600μmol/L和1 200μmol/L双氧水刺激SH-SY5Y后细胞活力显著下降,分别降低27.0%和53.6%;ROS荧光强度细胞凋亡显著上升且具有浓度依赖性;miRNA-199a的表达明显上升,分别上升23.0%和51.0%;Sirt1蛋白表达量下降具有浓度依赖性。结论:双氧水刺激SH-SY5Y神经细胞时miRNA-199a表达升高,Sirt1的表达降低。Sirt1水平降低与miRNA-199a通过调控Sirt1表达参与氧化损伤有关[1]。 相似文献
8.
MicroRNAs (miRNAs) 是一类小非编码RNA,近年研究发现其在骨骼肌发育调控中发挥重要作用.为探明miR-143-3p在C2C12成肌细胞分化中的调控作用,采用 real-time PCR 检测了miR-143-3p在小鼠各组织及C2C12成肌细胞分化过程中的表达;使用miR-143-3p 的模拟物和特异性抑制剂分别处理细胞,采用 real-time PCR 和 Western印迹分别检测成肌因子 MyoG和成肌标志基因 MyHC mRNA和蛋白水平的变化;用免疫荧光染色的方法观察肌管的形成.结果显示,miR-143-3p在小鼠各组织中均有表达,并且随着细胞分化表达量逐渐增加;C2C12成肌细胞过表达 miR-143-3p,与对照组相比,成肌调控因子MyoG和成肌标志基因MyHC 的mRNA和蛋白表达均显著升高,肌管数量明显增多;抑制剂处理结果显示,细胞分化被显著抑制.检测miR-143-3p对MyHC各亚型表达的影响发现,miR-143-3p表达的变化并不直接影响MyHC各亚型的表达.以上结果说明, miR-143-3p在骨骼肌和成肌细胞中均有表达,能够促进C2C12成肌细胞分化,但并不直接调控MyHCs的表达. 相似文献
9.
为了解鸡miR-148a组织表达谱和潜在发育调控功能,采用茎-环定量RT-PCR检测了固始鸡5个发育阶段、15种组织中miR-148a的表达,利用Pictar和TargetScan算法预测了miR-148a的靶基因,并对预测靶基因分别进行了Gene Ontology分析和通路分析. 结果显示,miR-148a的表达具有明显的时序特征,胚胎期各组织中的表达水平明显低于出壳后;miR-148a在出壳后的大脑、小脑、延脑、腺胃、小肠、肝、胰和胸肌等器官组织中的表达水平随着发育进程被显著上调;miR-148a预测靶基因在胚胎器官形态发生、血细胞生成、消化道形态发生、心血管发育、感觉器官发育、肠发育、骨骼系统发育、后脑发育、呼吸系统发育、免疫系统发育、淋巴器官等发育过程显著富集. 总之,鸡miR-148a为广泛性表达miRNA,可能参与鸡诸多器官组织发育过程的调控. 相似文献
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11.
目的:通过检测IgA肾病不同程度肾间质纤维化患者肾组织miRNA-26a、β-catenin、GSK-3β、α-SMA的表达,探究miRNA-26a通过靶向调控GSK-3β参与Wnt/β-catenin信号通路所致肾间质纤维化。方法:根据肾间质纤维化程度将46例IgA患者分为实验组(轻度组、中度组、重度组),对照组为7例肾脏肿瘤远离肿瘤组织的正常肾组织。采用RT-qPCR方法检测各实验组及正常对照组共53例IgA肾病患者肾组织miRNA-26a的表达水平,分析miRNA-26a与IgA肾病肾纤维化的关系。分别采用RT-qPCR技术及免疫组化技术检测各组肾组织β-catenin、GSK-3β、α-SMAmRNA及蛋白的表达水平,各组之间进行比较,并与miRNA-26a进行相关性分析。结果:(1)与正常对照组相比,IgA肾病患者肾活检组织miRNA-26a呈低表达,且随着肾间质病变程度加重,miRNA-26a表达水平显著降低,各组间差异具有统计学意义(P0.05);(2)与正常对照组比较,IgA肾病患者肾组织GSK-3β、β-catenin、α-SMAmRNA和蛋白的表达升高,且表达程度随着肾间质病变程度加重逐渐增强,各组间比较差异具有统计学意义(P0.05);(3)相关性分析:肾组织miRNA-26a与肾间质纤维化程度呈负相关(r=-0.943,P0.05),肾间质及肾小管GSK-3β、β-catenin、α-SMA的表达强度与肾间质纤维化程度正相关(r=0.917,P0.05;r=0.943,P0.05;r=0.926,P0.05),肾间质GSK-3β与β-catenin蛋白表达正相关(r=0.834,P0.05)。结论:miRNA-26a可通过靶向调控GSK-3β参与Wnt/β-catenin信号通路肾间质纤维化。 相似文献
12.
miRNA-30a(miR-30a)在肝癌组织中表达水平显著下调,可能是肝癌发展过程中的肿瘤抑制因子.miR-30a通过调控靶基因的表达参与肝癌细胞的增殖、凋亡、侵袭、转移以及自噬反应等一系列生理病理过程,从而发挥抑癌作用.本文就近年来miR-30a在肝癌中的靶基因及其调控分子机制做一综述. 相似文献
13.
目的:提取轻度认知障碍(MCI)、阿尔茨海默型痴呆(DAT)患者血液标本以及PC-12细胞培养基标本中的外吐小体并检测其中miRNA-135a含量。方法:使用超速离心法分离7例MCI、18例DAT患者、健康对照组的血清和血浆及PC-12细胞培养基中的外吐小体,使用实时定量PCR检测外吐小体中miRNA-135a的含量。结果:在PC-12细胞培养基、血清和血浆标本外吐小体中检出了miRNA-135a。MCI和DAT患者血清、血浆外吐小体miRNA-135a水平显著低于健康对照组(P〈0.05),但MCI患者血清、血浆外吐小体miRNA-135a水平与DAT患者相比无显著性差异(P〉0.05)。MCI、DAT和健康对照三者的血清和血浆标本外吐小体miRNA-135a水平均无相关性(P〉0.05)。结论:本研究证实了血液和脑脊液标本外吐小体中存在miRNA-135a,对将外吐小体miRNA作为AD诊疗潜在标志物提供了证据。 相似文献
14.
初步建立人脉络膜黑色素瘤的miRNA 表达谱, 并探讨相应的miRNA 在该疾病
中的功能, 为阐明脉络膜黑色素瘤发病机制寻求有效的治疗途径提供理论和实验依据.
利用miRNA 微芯片技术检测脉络膜黑色素瘤的has-miRNA 表达谱, 将4 例人脉络膜黑色
素瘤组织总RNA 分别与4 例健康人脉络膜组织对比, 筛选has-miRNA 表达情况. 根据生
物信息学的有关方法处理芯片实验数据, 筛选出共同差异表达的候选has-miRNA. 采用实
时定量PCR 的方法, 验证各候选has-miRNA 的表达情况. 将芯片和RT-PCR 两种方法结
论一致的候选hsa-miRNA确定为有意义的共同差异表达has-miRNA. 运用miRNA芯片技
术, 发现人脉络膜黑色素瘤组织中miRNA-20a, miRNA-106a, miRNA-17, miRNA-21,
miRNA-34a 明显上调表达, miRNA-145 和miRNA-204 明显下调表达. 在4 例脉络膜黑色
素瘤中, miRNA-20a, miRNA-106a, miRNA-17, miRNA-21, miRNA-34a 明显表达上调,
miRNA-145 和miRNA-204 明显表达下调. 脉络膜黑色素瘤有差异表达的miRNA 为研究
肿瘤的发生机制研究提供了诊断和治疗的新思路. 相似文献
15.
高表达FoxO1抑制猪骨骼肌成肌细胞的分化 总被引:1,自引:0,他引:1
FoxO1(Forkhead box O1)是调控肌肉生长、代谢和细胞分化的重要转录因子,但其在成肌细胞分化中的作用还不甚清楚。为了研究FoxO1对哺乳动物成肌细胞分化的影响,以原代培养的长白仔猪成肌细胞作为实验材料,用2%马血清诱导分化,采用实时荧光定量PCR、Western blotting和脂质体转染等方法检测FoxO1及早期和晚期生肌调节因子MyoD和myogenin在猪成肌细胞分化过程中的表达变化。结果显示,在猪成肌细胞分化过程中,FoxO1mRNA表达量显著增加,但总蛋白量变化不显著,其磷酸化水平显著上调。同时,高表达FoxO1的猪成肌细胞中,生肌调节因子MyoD和myogenin mRNA表达受到显著抑制,而MyoD蛋白变化不显著,myogenin却显著下调(P0.05)。以上结果表明,FoxO1能够推迟猪成肌细胞的分化时间并抑制分化;同时推测,FoxO1可能通过抑制生肌调节因子的表达控制骨骼肌纤维类型的终末分化。 相似文献
16.
目的:miRNA遍及生命体的发生、发育、分化和死亡的过程。它在肿瘤、心血管、糖尿病等多种疾病的各个阶段中起到调控癌基因作用。miRNA在垂体腺瘤中异常表达,且影响垂体腺瘤的增殖、侵袭及凋亡情况。本研究通过探讨miRNA家族中的miR-26a在垂体腺瘤组织及血清中的表达变化情况,为垂体瘤的早期诊断及疗效监测提供依据,以便更好的指导临床诊断及治疗工作。方法:收集哈尔滨医科大学附属第四医院微创神经外科手术切除并经病理证实的垂体腺瘤20例,取其组织及采集血清标本:年龄在20-74岁(平均50岁),术前均未进行任何治疗。既往无内分泌疾病的正常死亡人的垂体组织及其血清标本20例作为对照组。采用实时定量聚合酶链式反应(Real-timePCR)方法分别检测垂体腺瘤病人和正常人组织及血清中的miRNA-26a的表达情况。用SPSSl3.0统计分析软件运用Mann—WhitneyU检验方法对数据进行统计学分析。结果:miRNA-26a在垂体腺瘤组织中的表达量为22.30,正常垂体组织中的表达量为23.38,垂体腺瘤患者血清中miRNA-26a的表达表达量为25.04,正常对照组血清中的表达量为24.95,垂体腺瘤组织中的表达较正常垂体组织中的表达明显升高(P〈0.05),垂体腺瘤患者血清与正常人血清中miRNA-26a的表达无明显差异(P〉0.05)。结论:垂体腺瘤组织中miRNA-26a的高表达与血清学检测miRNA-26a的正常表达,为预防脑垂体腺瘤的发生和发展提供了重要的临床诊断依据。 相似文献
17.
目的:研究硫化氢(H2S)对心肌细胞肥大的负性调控作用与miRNA-133a介导Ca2+/CaN/NFATc4信号通路的关系。方法:异丙肾上腺素(ISO)诱导体外培养的大鼠心肌细胞肥大模型;Leica图像分析软件测量心肌细胞表面积;qRT-PCR检测脑钠尿肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、H2S合酶(CSE)、miRNA-133a和钙调神经磷酸酶(CaN) mRNA表达;Western blot检测CaN、活化T细胞核因子c4(NFATc4)蛋白表达;Elisa方法检测心肌细胞H2S含量;激光共聚焦显微镜检测心肌细胞钙离子浓度;细胞免疫荧光检测NFATc4核转位变化。结果:①心肌细胞肥大时,CSE/H2S水平、miRNA-133a mRNA表达均显著下降。应用NaHS预处理,能上调心肌细胞CSE/H2S水平,增加H2S含量和miRNA-133a mRNA表达,并明显抑制心肌细胞肥大。②心肌细胞肥大时,细胞内钙离子浓度明显增加,CaN表达和NFATc4胞核蛋白表达增加,NFATc4核转位明显增强;应用NaHS预处理能明显抑制ISO诱导的上述效应。③应用antagomir-133a能逆转H2S抑制心肌细胞肥大的作用,使心肌细胞内钙离子浓度、CaN表达和NFATc4胞核蛋白表达增加,NFATc4核转位增强。结论:H2S通过负性调控作用抑制心肌细胞肥大,该作用可能与H2S上调miRNA-133a的表达,抑制其下游的Ca2+/CaN/NFATc4信号通路的激活有关。 相似文献
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《基因组学与应用生物学》2017,(1)
本研究初步探讨过表达miRNA-320a对抑制神经胶质瘤U251细胞迁移、侵袭的可能的机制。实验开始前我们利用生物信息学软件进行分析对比miRNA-320a与水通道蛋白4(AQP4)之间的靶点结合关系,然后我们用miRNA-320a mimic及Ncontrol对U251细胞株进行转染,48 h后进行下一步实验。首先用q-PCR验证过表达转染情况,以及水通道蛋白4(AQP4)m RNA的表达水平,其次用划痕和Transwell检测转染后细胞株的迁移侵袭能力,最后用Western blotting测定AQP4的表达水平。生物信息分析可得miRNA-320a在AQP4 m RNA 3'UTR区域能稳定结合,实验结果显示转染mimic后,过表达组明显升高,且过表达组AQP4 m RNA的表达明显被抑制,划痕和Transwell实验提示了过表达miRNA-320a后能抑制U251细胞株的迁移侵袭能力(p0.01)。Western blotting结果显示,过表达miRNA-320a与对照组相比能明显抑制AQP4蛋白的表达。所有研究结果提示miRNA-320a能靶向作用AQP4 m RNA 3'UTR区域,并抑制其蛋白表达,从而抑制了肿瘤细胞U251的迁移侵袭能力,为临床治疗恶性胶质瘤提供新的参考。 相似文献
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人肝脏特异性miR-122表达载体的构建及鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
人肝脏特异性miRNA-122是肝脏中表达丰度最高的miRNA。为研究该miR-122的生物学功能,从HepG2细胞基因组中用PCR的方法扩增了miR-122的前体,构建了miR-122的表达载体pLMP-miR-122。pLMP-miR-122质粒转染人正常肝细胞系L-O2和肝癌细胞系HepG2后,细胞内成熟miRNA-122的表达量显著增加。该质粒与HBV1.3共转染HepG2细胞72h后,HBV的HBs和HBe蛋白水平的表达量均下降,说明miRNA-122参与了HBV基因的复制和表达的调控,为进一步研究miRNA-122的功能和其他一些肝病如HCC的调控机制打下基础。 相似文献
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MicroRNA(miRNA)是一类非编码小分子RNA,参与基因转录后水平调控,与肿瘤的形成、侵袭及转移、治疗及预后过程密切相关。研究发现,miRNA-200家族包括miR-141、miR-200a、miR-200b、miR-200c和miR-429在卵巢癌中的表达改变明显,且参与卵巢癌的发生、侵袭转移、卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性及复发过程,可能是用于卵巢癌的早期诊断、治疗、预后预测的指标。本文主要对miRNA-200家族在卵巢癌中的研究进展进行综述。 相似文献