应用分子生物学方法鉴定6群肺炎链球菌血清型

目的利用分子生物学方法,鉴定26株6群肺炎链球菌的血清型。方法利用6群肺炎链球菌荚膜多糖相关基因设计合成6对特异性引物,PCR扩增26株肺炎链球菌,并对PCR产物进行基因序列的测定及分析。结果26株肺炎链球菌cpsD蛋白229个氨基酸中有7个突变点,第220~222位均没有缺失;其中,19株肺炎链球菌具有与wci Nα蛋白氨基酸序列完全一致的氨基酸组成,第150位均为Ala,第38位均为Asp,其余7株与wciN_α蛋白氨基酸序列没有相似性,但与wciN_β蛋白氨基酸序列相似性超过99%;15株wciP蛋白第195位为Ser,11株wci P蛋白第195位为Asn。综合分析比对后,26株6群肺炎链球菌中,11株属于6A型肺炎链球菌,8株属于6B型肺炎链球菌,4株属于6C型肺炎链球菌,3株属于6D型肺炎链球菌。结论分子生物学方法可用于6群肺炎链球菌血清型的鉴定,为完善6群肺炎链球菌的菌种档案提供了实验依据。     

肺炎链球菌性肺炎诊断方法研究进展

肺炎链球菌是一种常见的细菌性肺炎的病原体,快速、准确的确定病原体是控制疾病的关键。本文就目前诊断肺炎链球菌性肺炎的免疫层析法、酶联免疫吸附法、胶乳颗粒凝集试验等研究进展作以简要综述。     

肺炎链球菌致脑膜炎的分子生物学研究进展

肺炎链球菌是引起细菌性脑膜炎的主要病原菌之一,常导致严重的神经系统后遗症和较高的病死率。本文总结了肺炎链球菌引起脑膜炎的主要毒力因子及其作用,肺炎链球菌通过血脑屏障的机制及其引起的病理生理效应等方面的最新进展。随着对链球菌性脑膜炎认识的深入．可望为,临床治疗提供帮助,降低其发病率,减轻脑损伤。     

肺炎链球菌疫苗的研究进展

肺炎链球菌疫苗研制对于肺炎链球菌感染的防治具有重要意义。常见的荚膜多糖疫苗存在很大缺陷,需要更为有效的疫苗来替代。本文综述肺炎链球菌疫苗研制中的一些进展,包括结合疫苗的研制、几种公认的蛋白疫苗因子的研究进展和新的蛋白疫苗因子的筛选。同时还介绍肺炎链球菌疫苗研制过程中的一些新思路（联合疫苗、活疫苗、DNA疫苗）,它们是对肺炎链球菌疫苗研制方法的丰富。     

MALDI-TOF MS对肺炎链球菌鉴定与分型的应用

目的 探讨MALDI-TOF MS对肺炎链球菌鉴定和质谱分型的应用价值。方法 收集2009年1月至2013年5月温州医科大学附属第二医院临床分离的112株肺炎链球菌标本,采用Optochin敏感试验和全自动细菌分析仪对收集的菌株进行鉴定验证,并用Microflex MALDI-TOF质谱仪进行分析鉴定。根据质谱图的相似性进行细菌同源聚类树分析并构建质谱分型模型,采用荚膜肿胀试验对参与分型的菌株进行血清型比较。结果 除20株不符合检测条件之外,92株临床菌株和1株标准株经质谱分析均为肺炎链球菌,选取的60株菌株以0.5的差异水平,将60株肺炎链球菌分为18个质谱型别,在这些菌株的血清分型中有19F、19A、23F、23A、3和14六个血清型别,分布于不同的MALDI-TOF MS分型中,其中19F有18株,占30%（18/60）,分布在6种不同的MALDI-TOF MS分型中,也有3型血清型较为集中地分布于相应的MALDI-TOF MS一个型别里。结论 MALDI-TOF MS能快速、准确、简便地鉴定肺炎链球菌,且能达到种的水平。对比血清型,按照0.5差异水平,建立的18个质谱分型部分的型别与血清型有一致性,但也存有差异。     

应用whaF基因序列鉴定20型肺炎链球菌血清型

目的应用wha F基因测序方法,对20型肺炎链球菌进行血清型鉴定。方法采用血清凝集法和用20型肺炎链球菌型特异性基因(wci L基因)合成的引物进行PCR扩增,对中国医学细菌保藏管理中心所保藏的20型肺炎链球菌进行血清学鉴定;根据Gen Bank上发表的wha F基因设计合成引物,PCR扩增wha F基因,利用测序获得基因序列,分析wha F基因多态性。结果 7株20型肺炎链球菌菌株均能与20型血清产生血清凝集反应,wci L基因PCR扩增产物,可见与预期相符大小500 bp的特异性条带。wha F基因PCR扩增产物,除20-3外,其余6株菌均可见1 000bp大小与预期相符的PCR扩增产物。wha F基因测序和分析显示:20-2、20-4、20-5、20-7与20B亚型(Gen Bank accession No.:CR931679和JQ653093)的wha F基因序列相同;20-6与20A亚型(Gen Bank accession No.:JQ653094)的wha F基因序列相同;20-1与CR931679和JQ653093相比,在898有点突变(A→C)。20-3的wha F基因比20A亚型和20B亚型的wha F基因均少了约600 bp。结论 20-6为20A亚型肺炎链球菌,20-2、20-4、20-5、20-7均为20B亚型肺炎链球菌。     

耐青霉素肺炎链球菌研究进展

肺炎链球菌 (Streptococcus Pneumoniae,SP)是一种常见病原菌 ,可引起细菌性肺炎、脑膜炎、心内膜炎、中耳炎、鼻窦炎、败血症等。 196 7年澳大利亚的 Hansan和 Bullen首次报道了从 1例低丙种球蛋白血症的支气管扩张症患者痰液中分离出耐青霉素肺炎链球菌 (penicillin- resistantstreptococcus pneum oniae,PRSP) [1 ] ,1977年南非亦报道了耐青霉素的肺炎链球菌 [2 ] ,此后许多国家和地区有关于PRSP散在发病和流行的报道 ,引起人们重视。现就耐青霉肺炎链球菌的研究现状作一综述。1　耐青霉素肺炎链球菌的流行病学目前全世界几乎所有…     

合成肺炎链球菌荚膜多糖基因的研究进展

肺炎链球菌是导致婴幼儿和老年人罹患肺炎、脑膜炎、中耳炎等疾病的主要病原体之一,其致病力与位于细菌表面的荚膜多糖密切相关,而荚膜多糖层的薄厚和多糖结构是影响致病力的主要因素。在分子水平探索参与荚膜多糖合成的相关基因,不仅有助于进一步理解肺炎链球菌的致病机理,而且可从基因水平选育高表达荚膜多糖的肺炎链球菌菌株用于多糖疫苗的研发。鉴于此,现就合成肺炎链球菌荚膜多糖基因的作用机制和研究方法作一综述。     

肺炎链球菌粘附和毒力因子A研究进展

肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,SP）普遍定植于呼吸道,是人类重要的侵袭性病原菌之一,是社区获得性肺炎、中耳炎、脑膜炎、菌血症、鼻窦炎的主要病原菌。肺炎链球菌粘附和毒力因子A（pneumococcal adherence and virulence factor A,PavA）是肺炎链球菌早期感染和侵袭过程中关键的毒力因子。体外试验表明,缺失PavA的肺炎链球菌的突变株其粘附和侵入上皮细胞和内皮细胞的能力明显下降。作为一种保护性抗原,其诱导的细胞和体液免疫可以有效的抵抗肺炎链球菌的感染,是肺炎链球菌新一代疫苗的候选蛋白。但是,PavA在肺炎链球菌与人肺上皮细胞交互对话中作用机制的研究尚属空白,本文就肺炎链球菌粘附和毒力因子A得最新研究进展作一综述。     

肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的PCR法鉴定

肺炎链球菌是一种致病率和致死率很高的病原菌 ,若无丰富临床检测经验从临床标准中分离鉴定此菌较困难 ,本实验以寡核苷酸引物YH1 YH2、YH7 YH8分别扩增肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的 35 4bp和 30 7bp的DNA片段 ,通过改变各种反应条件 ,建立了这两种病原因子基因的PCR检测方法。用此方法对 2 0株肺炎链球菌标准菌株及 7株对照菌株进行了鉴定 ;其扩增产物分别经限制性内切酶TthHB81和和AccI进行酶切以确认扩增产物是否正确 ;用酚 氯仿抽提纯化的全细胞DNA对PCR方法的检测灵敏度进行了测定 ;并利用此方法对 2 8份临床标本分离物进行了鉴定。结果　所有 2 0株肺炎链球菌均可分别用引物YH1 YH2、YH7 YH8扩增出 35 4bp和 30 7bp的DNA片段 ,而对照菌株均呈阴性 ;自溶素及溶血素基因的扩增产物分别经限制性内切酶TthHB81和AccI消化后产生的片段和预期的完全一致 ;两对产物均可从 10fg的全细胞DNA中扩增出目的DNA片段。所建立的两套PCR系统对 2 8份临床标本分离物进行鉴定 ,其中PCR阳性的 15份分离物经生化学特性检查被鉴定为肺炎链球菌。本试验所建立的两套PCR检测系统具有特异性强 ,灵敏度高及操作简单等优点 ,均可用于肺炎链球菌的鉴定。     

肺炎链球菌疫苗的研究进展

肺炎链球菌是引起全球所有年龄组高发病率和病死率的主要病原菌。目前投入使用的有23价荚膜多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗。荚膜多糖疫苗有许多局限性,蛋白结合疫苗是对其改进,但也不能完全取代它。两者都具有一定效力和良好的安全性,其中蛋白结合疫苗具有更好的免疫原性。此外,其他多价结合疫苗也已进入临床试验阶段。蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗、活疫苗也在研制和开发中。     

新型肺炎链球菌疫苗研究进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是引发人类肺炎、中耳炎、脑膜炎的主要病原体。为了预防肺炎链球菌感染,人类已研制出了多种相关的疫苗。目前,常用23价肺炎球菌多糖疫苗(23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine,PPV23)预防成人和2岁以上儿童肺炎链球菌的感染,用7价、10价、13价肺炎球菌结合疫苗来预防婴幼儿肺炎链球菌的感染。虽然荚膜多糖类疫苗能预防其所包含的肺炎链球菌血清型的感染,但非疫苗血清型的菌株还是可以在鼻咽部定植,并引起感染,而且结合疫苗研制工艺复杂、价格昂贵,在发展中国家使用还不普及。鉴于上述原因许多疫苗公司开始研发具有保护力强、价格低廉的新型疫苗。近年来,肺炎链球菌全细胞疫苗和肺炎链球菌纯化蛋白疫苗由于其血清非依赖性和较低的生产成本已成为人们关注的焦点。现对肺炎链球菌新型疫苗的研制及临床应用作一概述。     

90株链球菌血清学及生化特征分群鉴定的研究

本文报告90株链球菌血清学和生化特征分群鉴定结果。研究结果表明,90株链球菌用血清学分群,属A群的63株,B群3株,C群12株,D群10株,G群2株。采用生化鉴定,对链球菌属的确认有参考价值。对分群鉴定无鉴别意义。我国过去沿用的非血清学推测性分群法,只适用于B、D群和绝大部分A群菌的鉴定,对C群和G群菌无鉴别意义。因此,在链球菌分群鉴定时,要采用血清学方法,对非血清学推测性分群需进一步完善,以提高其鉴定的准确性。     

鱼源无乳链球菌的血清型及分子分型研究

为了解不同鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)分子分型特征, 分析菌株之间的相关性和同源性, 研究在采用S. agalactiae特异性cfb基因对分离菌株鉴定的基础上, 对26株不同鱼源S. agalactiae进行了荚膜多糖血清型(CPS)多重PCR鉴定, 同时采用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子特征比较与同源性分析。结果显示, 26株菌CPS型存在Ia (n=22)和III型(n=4)两种类型, 其中黄河裸裂尻鱼源和罗非鱼源菌株均为Ia血清型, 齐口裂腹鱼源菌株存在Ia (n=2)和III (n=4)型两种CPS型; 多位点序列分型共得到3种STs序列型(ST-891、ST-103、ST-19), 其中黄河裸裂尻鱼源和罗非鱼源菌株均为新的序列型ST-891, 齐口裂腹鱼源菌株存在ST-103和ST-19两种STs型; PFGE聚类分析可分为16个PFGE谱型(A-P), 其中优势带型为P型(n=9)。相同荚膜多糖血清型—MLST分型菌株在PFGE带型中呈现高度聚集。CPS分型与MLST分型、PFGE分型有很好的相关性, 而CPS型、STs序列型、PFGE带型与宿主的来源没有明显的相关性。不同鱼源S. agalactiae分子特征的相似性, 提示其存在交叉感染的可能性, 而齐口裂腹鱼源S. agalactiae分子特征的多样性, 提示其存在遗传变异的情况。     

肺炎链球菌相关毒力因子及其作用的研究进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)是导致黏膜疾病(如中耳炎、肺炎)和系统性疾病(包括败血症和脑膜炎)等严重疾病的主要病原体之一。肺炎链球菌毒力因子分为荚膜多糖、S.pn相关蛋白、细胞壁及细胞壁多糖三大类,其中荚膜多糖为最主要的毒力因子,也是疫苗中最有效的成分。毒力因子在S.pn入侵机体及引发疾病的过程中起着重要的作用。因此,毒力因子及作用的研究,不仅对预防和治疗肺炎链球菌的感染有着重要的意义,并为研发安全、有效的多糖疫苗提供一定的技术支持。现就肺炎链球菌毒力因子及其作用作一综述。     

肺炎链球菌二元信号转导系统研究进展

肺炎链球菌是引起细菌性肺炎的主要病原菌。透彻地了解肺炎链球菌的信号转导对于系统地认识该菌的致病机制和靶标药物的设计具有重要意义。二元信号转导系统作为在病原菌中普遍存在的一种跨膜信号转导机制,在细菌响应外界环境变化并作出适应性反应的过程中起着主要作用。随着大规模基因组测序、信号标签诱变、差异荧光诱导以及DNA微阵列等技术的蓬勃发展,关于肺炎链球菌的二元信号转导系统已经取得了许多重要的研究成果。本文就肺炎链球菌二元信号转导系统的研究进展作一综述。     

真菌的分子生物学鉴定方法研究进展

综述了真菌的分子生物学鉴定方法,包括DNA碱基组成分析,核酸分析技术,真菌核型的脉冲电泳分析。     

肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的PCR法测定

肺炎链球菌是一种致病率和致死率很高的病原菌,若无丰富临床检测经验从临床标准中分离鉴定此菌较困难,本实验以寡核苷酸引物ＹＨ１、ＹＨ２、ＹＨ７、ＹＨ８分别扩增肺炎链球８菌自溶素和溶血素基因的３５４ｂｐ、３０７ｂｐ的ＤＮＡ片段,通过改变各种反应条件,建立了这两种病原因子基因的ＰＣＲ检测方法。用经方法对２０株肺炎链球菌标准菌株及７株对照菌株进行了鉴定,其扩增产物分别经限制性内切酶ＴｔｈＨＢ８１和和Ａｃｅｌ