基于16S rDNA技术研究隔药饼灸对高脂血症兔肠道菌群属水平的影响

研究隔药饼灸对高脂血症兔属水平肠道菌群的作用,筛选相关菌属。

将24只兔按随机数表法分为正常组、模型组和隔药饼灸组,每组8只;干预12周后,观察TC、TG、LDL-C水平的变化,采用16S rDNA高通量测序技术分析属水平菌落差异。

与模型组比较,隔药饼灸组兔血清LDL-C、TG、TC水平均下降（均P＜0.05）。隔药饼灸组肠道菌群结构发生改善,un_f_Muribaculaceae、un_o_Gastranaerophilales、瘤胃球菌科UCG-014属、阿克曼菌属相对丰度均显著提高（均P＜0.05）,毛螺菌属NK4A136、瘤胃梭菌属6、拟杆菌属相对丰度均降低（均P＜0.05）。

隔药饼灸能改善异常血脂及调整菌群结构,可能与上调un_f_Muribaculaceae、un_o_Gastranaerophilales、瘤胃球菌科UCG-014属、阿克曼菌属相对丰度,降低毛螺菌属NK4A136、瘤胃梭菌属6、拟杆菌属相对丰度有关。

     

红茶对2型糖尿病小鼠肠道菌群分布的影响

探讨红茶对2型糖尿病（T2DM）小鼠肠道菌群分布的影响,为研究红茶在代谢性疾病的辅助治疗机制提供参考。

构建 T2DM小鼠模型,将其随机分为模型组（T2DM组）和茶水饲喂组（T2DM_T组）,取健康小鼠作为对照组（Control组）,每组各15只。实验终点收集3组小鼠粪便进行宏基因组测序,分析组间菌群差异;同时进行肝脏组织形态学检查,观察组织病理学改变。

与Control组和T2DM组相比,T2DM_T组拟杆菌门（F = 21.056,P＜0.001）、邓肯氏菌属（F = 13.330,P = 0.001）、乳杆菌属（F = 36.546,P＜0.001）和粘液乳杆菌属（F = 43.813,P＜0.001）的相对丰度增加,担子菌门（F = 8.676,P = 0.005）、Muribaculum（F = 8.151,P = 0.006）和肠球菌属（F = 4.271,P = 0.040）的相对丰度降低。与T2DM组小鼠相比,T2DM_T组小鼠肝细胞排列较为紧密,细胞空泡变性程度有所减弱。

红茶在一定范围内能调节T2DM模型小鼠肠道菌群结构和相对丰度,红茶水喂饲可减缓造模所致的T2DM小鼠肝脏细胞的损伤,其具体作用机制值得深入研究和探讨。

     

杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品对小鼠免疫功能的影响

研究杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115（Lacticaseibacillus paracasei N1115）发酵乳饮品对小鼠免疫脏器指数、免疫球蛋白、巨噬细胞、NK细胞、B淋巴细胞及T淋巴细胞的影响。

将SPF级6～8周龄雄性Balb/c小鼠随机分为对照组以及杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品低、中、高剂量组,每组15只,连续灌胃30 d,进行免疫脏器指数测定、免疫球蛋白测定、碳廓清能力测定、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、NK细胞活性测定、脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应、血清溶血素测定和抗体细胞生成实验。

杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品低、中、高剂量组的小鼠碳廓清指数显著高于对照组（t = 3.926 2,P = 0.000 7;t = 6.000 1,P＜0.000 1;t = 5.314 4,P＜0.000 1）,腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率显著高于对照组（t = 3.812 1,P = 0.001 5;t = 4.257 2,P = 0.000 4;t = 4.976 3,P = 0.000 5）。

杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品具有增强小鼠非特异性免疫力的功能,可为副干酪乳酪杆菌N1115的开发利用提供科学依据。

     

高级别上皮内瘤变和不同型别人乳头瘤病毒感染患者阴道微生态特征分析

探讨高级别上皮内瘤变（high level squamous intraepithelial lesion,HSIL）患者阴道微生态的特征及不同型别人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）感染对阴道微生态的影响。

收集我院健康女性（对照组,n=54）和HSIL患者（HSIL组,n=54）的阴道分泌物样本,提取其DNA,通过HPV试剂盒检测HPV型别,并使用16S rRNA基因高通量测序分析阴道菌群的组成结构及特征。

HSIL组女性HPV阳性率为88.9%,对照组女性HPV阳性率仅有11.1 %。与对照组相比,HSIL组女性阴道乳杆菌属相对丰度降低,加德纳菌属、普雷沃菌属、双歧杆菌属相对丰度增多,但差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与HPV Others组相比,HPV CR组女性阴道阿托波菌属相对丰度显著降低（t=2.067,P=0.043）;加德纳菌属、链球菌属、肠球菌属相对丰度降低,双歧杆菌属相对丰度升高,但差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

HSIL患者HPV感染率升高,不同型别HPV感染会对阴道微生态产生影响,提示对阴道微生态进行干预可能对宫颈病变产生调节作用。

     

基于肠道微生物组学分析不同比例肠内营养制剂对神经外科重症患者肠道功能、免疫功能的影响

使用肠道微生物组学技术探讨不同比例的肠内营养制剂对于神经外科重症患者肠道功能与免疫功能的影响。

选取2022年7月至2023年6月在我院进行治疗的神经外科重症患者,随机分为观察组、对照组,每组60例。对照组使用2/3标准剂量,观察组使用1/3标准剂量,对比两组患者的营养指标、免疫功能指标、粪便菌群alpha多样性、7 d内血糖水平、胰岛素的使用总量及并发症的发生情况。

在进行治疗后,观察组的总蛋白、白蛋白、前白蛋白及血红蛋白指标均显著高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;观察组患者的IL-6、IL-10及IL-17指标均显著低于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;观察组患者粪便菌群中的Ace指数、Chao1指数、Shannon指数均显著高于对照组,Simpson指数显著低于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;观察组血糖＞10.0 mmol/L的次数和胰岛素使用总量显著低于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;两组患者在治疗时没有出现比较严重的并发症,观察组发生并发症人数显著低于对照组,差异有统计学意义（χ² = 3.927,P = 0.048）。

对于神经外科重症患者使用1/3标准剂量的营养支持能够改善患者的肠道功能和免疫指标,值得在临床中推广。

     

基于16S rDNA与1H NMR技术探讨高脂血症兔肠道菌群和代谢物变化

观察高脂血症模型兔的代谢物与肠道微生物变化并分析其相互关系。

雄性新西兰兔16只,随机分为正常组和模型组,每组8只。正常组喂普通饲料,模型组高胆固醇饮食。12周后比较2组兔血脂水平。利用16S rDNA测序技术检测兔粪便肠道菌群变化,采用¹H NMR代谢组学分析结肠代谢物改变。

与正常组比较,模型组兔血清LDL-C、TG、TC水平显著升高（均P＜0.01）;模型组兔肠道菌群结构发生改变,厚壁菌门、Lachnospiraceae_NK4A136_group、un_f_Lachnospiraceae、Subdoligranulum等菌群丰度上升,Lachnospiraceae_NK4B4_ group、un_o_Gastranaerophilales等菌属丰度下降。2组差异代谢物通路分析主要涉及谷氨酰胺与谷氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,磷脂代谢。Lachnospiraceae_NK4A136_group、un_f_Lachnospiraceae、un_o_Gastranaerophilales等菌属与差异代谢物有较强相关性。

高脂血症的病理过程可能通过Lachnospiraceae_NK4A136_group、un_f_Lachnospiraceae、Lachnospiraceae_NK4B4_group、un_o_Gastranaerophilales等菌属参与胆碱类代谢,谷氨酰胺与丙氨酸代谢,导致血脂代谢异常。

     

粪菌移植对高原环境下SD大鼠体质量、血常规指标及肠道菌群的影响

探究粪菌移植对低海拔动物的高原适应性的影响。

将30只雄性SD大鼠随机分为3组,每组10只,即模拟高原环境组（H组）、模拟高原环境＋抗生素预处理组（HA组）及模拟高原环境＋抗生素预处理＋高原鼢鼠粪菌组（HAM组）。粪菌移植结束,持续饲养3周后,将所有组大鼠转移至模拟海拔6 000 m环境低压氧舱饲养30 d。测定粪菌移植对SD大鼠体质量、血常规指标及肠道菌群的影响。

HAM组、HA组和H组3组大鼠间平均日采食量比较差异无统计学意义（F = 2.928,P＞0.05）,H组大鼠平均日增重显著低于HA组、HAM组（F = 3.951,P＜0.05）;HA组大鼠中性粒细胞数量较H组、HAM组分别上升7.85%和51.27%,HA组大鼠单核细胞数、单核细胞百分比显著高于H组、HAM组（F = 5.131、4.325,均P＜0.05）;HAM组、HA组和H组大鼠肠道菌群的优势菌门以拟杆菌门（Bacteroidetes）、厚壁菌门（Firmicutes）为主。HAM组大鼠肠道菌群的毛螺菌科（Lachnospiraceae）的相对丰度显著高于HA组、H组（F = 8.545,P＜0.01）,毛螺菌科NK4A136属（Lachnospiraceae_NK4A136_group）的相对丰度显著高于HA组、H组（F = 3.926,P＜0.05）。LEfSe分析显示,HAM组大鼠肠道菌群中对群落结构影响较大的物种有乳螺目（Lachnospirales）、毛螺菌科。

通过粪菌移植能够提高进入高原环境的低海拔动物的高原适应性。

     

人体肠道菌群对二甲基亚砜的体外降解作用——

通过二甲基亚砜（DMSO）与肠道菌群相互作用机制的研究,为DMSO的降解及其在药物研究中的应用提供肠道菌群方面的理论依据。

采用分批发酵、气相色谱、气质联用和高通量测序技术研究DMSO的降解量与肠道菌群结构间的关系。

发酵液中主要检测到甲硫醚、二甲基砜、二甲基二硫醚及甲基硫代磺酸甲酯等DMSO相关代谢产物;与其他他汀相比,生理浓度氟伐他汀组菌群的DMSO降解效果最佳,可能与Proteobacteria及Solobacterium和Escherichia-Shigella等菌群的相对丰度增加有关。不同肠道菌群产二甲基硫醚（DMS）水平差异明显,DMS分解可能与硫代谢途径相关,涉及的微生物主要是Desulfovibrio。

人体肠道菌群可降解DMSO,其降解效率可能与Escherichia-Shigella的相对丰度有关,降解产物对人体肠道菌群结构无影响。

     

糖脂代谢性疾病模型小鼠肠道菌群特征分析

基于16S rDNA测序研究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、2型糖尿病(T2D)及动脉粥样硬化(AS)小鼠的肠道菌群特征, 分析上述疾病肠道微生物的异同。

以SPF级C57BL/6J雄鼠为对象, 分别采用高脂饮食制备NAFLD模型, 高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立T2D模型, ApoE^-/-小鼠高脂饮食诱导AS模型, 另设对照组, 每组10只。采用试剂盒测定小鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平。收集粪便样本, 以Illumina MiSeq测序平台, 采用QIIME2软件对肠道菌群的可分类操作单元(OTUs)数量, Alpha、Beta多样性和菌群多样性指数以及差异菌门、菌属等进行综合分析与评价, 并对肠道菌群代谢功能进行预测。

与对照组小鼠比, T2D组、NAFLD组、AS组血清中TC、TG和LDL-C水平均显著升高, 菌群多样性指数显著降低(F=14.33, P < 0.01), Firmicutes/Bacteroidetes比值逐渐升高; 双歧杆菌属(Bifidobacterium)丰度在AS组、T2D组中显著增加(F=12.15, P < 0.01), 在NAFLD组中显著下降(F=12.15, P < 0.05), 乳杆菌属(Lactobacillus)丰度在NAFLD组、AS组中著降低(F=9.35, P < 0.01), 在T2D组中显著降低。关联分析表明Lactobacillus、Akkermansia等与血脂呈负相关, Faecalibaculum、Blautia等与血脂呈正相关。肠道菌群参与代谢性疾病主要涉及碳水化合物代谢、氨基酸代谢、脂质代谢以及能量代谢等通路。

本研究阐明了NAFLD、T2D、AS肠道微生物组成与变化的共性和个性特征, 为靶向调控肠道微生物治疗代谢性疾病提供科学依据。

     

基于高通量测序分析哮喘小鼠呼吸道菌群的变化

通过高通量测序分析哮喘模型小鼠呼吸道菌群的变化情况。

将12只SPF级BALB/c雄性小鼠随机分为对照组和模型组, 每组6只。采用卵清蛋白致敏方法建立哮喘小鼠模型后, 进行支气管组织切片病理学观察, ELISA法检测血清IgE水平, 测定肺指数, 采集咽拭子后提取DNA行高通量测序分析。

与对照组比较, 模型组小鼠血清IgE水平明显升高(P < 0.05), 肺指数明显上升(P < 0.05), 可见支气管上皮粘膜有水肿, 少量淋巴细胞浸润, 平滑肌增生。模型组小鼠呼吸道菌群与对照组比较, 菌种丰度升高, 厚壁菌门较对照组减少(P < 0.05), 放线菌门和变形菌门增多(P < 0.05), 菌群结构有明显差异。

哮喘小鼠存在呼吸道微生态菌群失衡。

     

circ_0000218通过靶向吸附miR-1182对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA 0000218(circ_0000218)是否通过靶向吸附miR-1182从而影响宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析43例宫颈癌患者癌组织、癌旁组织中circ_0000218和miR-1182的表达水平。根据转染序列不同分为si-NC组、si-circ_0000218组、miR-NC组、miR-1182组、pcDNA组、pcDNAcirc_0000218组、si-circ_0000218+anti-miR-NC组、si-circ_0000218+anti-miR-1182组。运用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、Transwell实验分析circ_0000218和miR-1182表达对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。蛋白质印迹法检测Ki-67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR分析circ_0000218和miR-1182的靶向关系。癌旁组织与宫颈癌组织比较采用配对t检验,两组间比较采用独立样本t检验进行统计学分析。结果宫颈癌组织中circ_0000218表达量高于癌旁组织(4.17±0.32比1.00±0.05),而miR-1182表达量低于癌旁组织(0.33±0.03比1.00±0.05),差异具有统计学意义(P均<0.001)。与si-NC组比较,si-circ_0000218组HeLa细胞增殖活力(0.86±0.04比0.37±0.03)、迁移数量[(86.73±7.13)个比(38.52±3.19)个]和侵袭数量[(66.80±4.95)个比(26.58±2.55)个]以及Ki-67(0.57±0.05比0.18±0.02)、MMP-2(0.74±0.07比0.28±0.03)和MMP-9蛋白表达量(0.64±0.04比0.22±0.02)降低,差异有统计学意义(P均<0.001).与miR-NC组比较,miR-1182组HeLa细胞增殖活力(0.88±0.04比0.46±0.04)、迁移数量[(89.74±5.53)个比(46.63±3.79)个]和侵袭数量[(68.03±4.34)个比(34.63±3.37)个]以及Ki-67(0.59±0.04比0.24±0.02)、MMP-2(0.76±0.05比0.33±0.03)和MMP-9蛋白表达量(0.66±0.04比0.29±0.03)降低,差异有统计学意义(P均<0.001)。circ_0000218靶向负调控miR-1182表达。与si-circ_0000218+anti-miR-NC组比较,si-circ_0000218+anti-miR-1182组HeLa细胞增殖活力(0.35±0.03比0.76±0.04)、迁移数量[(35.58±3.11)个比(77.04±4.08)个]和侵袭数量[(25.44±2.29)个比(57.61±3.47)个]以及Ki-67(0.16±0.02比0.46±0.04)、MMP-2(0.26±0.02比0.65±0.04)和MMP-9蛋白表达量(0.20±0.02比0.57±0.04)升高,差异有统计学意义(P均<0.001)。结论circ_0000218通过靶向吸附miR-1182可促进宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-125a-5p转染对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及相关机制研究

摘要 目的：探究miR-125a-5p转染对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及相关机制。方法：将肝癌细胞分为对照组、下调组和上调组,并通过细胞转染建立稳定转染的下调组和上调组。MMT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测P13K/Akt通路中AKT、Bax、Bcl-2、P13K、P-AKT蛋白表达量。结果：与上调组相比,下调组24、48、72 h细胞增殖率,细胞侵袭、迁移细胞数,AKT、Bcl-2、P13K、P-AKT蛋白表达量显著降低,具有统计学差异（29.67±9.87 vs 17.34±5.71,t=5.192,P＜0.05、34.75±11.56 vs 15.17±5.04,t=7.365,P＜0.05、38.48±12.81 vs 12.51 ±4.13,t=9.153,P＜0.05,72.53±24.17 vs 36.28±12.07,t=6.365,P＜0.05、86.51±28.75 vs 46.28±15.32,t=5.858,P＜0.05,1.26±0.41 vs 0.81±0.26,t=4.397,P＜0.05、1.35±0.44 vs 0.76±0.24,t=5.584,P＜0.05、1.48±0.46 vs 0.79±0.26,t=6.194,P＜0.05、1.22±0.39 vs 0.73±0.24,t=5.584,P＜0.05）;与上调组相比,下调组24、48、72h细胞凋亡率,Bax蛋白表达量显著升高,具有统计学差异（17.62±5.84 vs 29.31±9.75,t=4.879,P＜0.05、14.97±4.65 vs 34.19±11.36,t=7.427,P＜0.05、11.26±3.74 vs 38.62±12.86,t=9.690,P＜0.05,0.75±0.24 vs 1.33±0.43,t=5.587,P＜0.05）。结论：下调miR-125a-5p的表达,可通过作用于P13K/Akt通路,调控AKT、Bax、Bcl-2、P13K、P-AKT蛋白表达量,进而起到抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡以及抑制肝癌细胞的侵袭、迁移能力。     

miR-491-5p靶向调控SHOC2对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-491-5p对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及作用机制。 方法培养永生化食管上皮细胞株HET-1A和人食管癌细胞株EC109,EC9706,KYSE510,qRT-PCR检测细胞中miR-491-5p和富含亮氨酸重复蛋白SHOC2 （SHOC2） mRNA水平。EC109细胞分为空白对照组、miR- 491-5p组、miR-NC组、miR-491-5p+pcDNA-SHOC2组和miR-491-5p+pcDNA组,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot法检测CyclinD1、Vimentin、E-cadherin以及MAPK/ERK信号通路相关蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR- 491- 5p与SHOC2之间调控关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验。 结果食管鳞癌细胞EC109、EC9706和KYSE510中miR-491-5p表达水平低于HET-1A细胞（0.32±0.06、0.62±0.10、0.61±0.08比1.00±0.08）,差异具有统计学意义（F = 106.340,P < 0.001）;SHOC2 mRNA表达水平高于HET- 1A细胞（2.85±0.16、1.73±0.10、1.45±0.06比1.02±0.09）,差异具有统计学意义（F = 464.949,P < 0.001）。miR-491-5p组EC109细胞培养72 h后的OD值、细胞迁移数、侵袭数及CyclinD1、Vimentin、p-MEK和p-ERK蛋白水平均低于miR-NC组（0.70±0.06比1.42±0.08,65.01±10.36比150.01±12.48,70.03±10.26比140.02±11.85,0.30±0.03比0.93±0.16,0.41±0.05比0.86±0.08,0.32±0.06比0.95±0.11,0.40±0.06比0.92±0.13）,差异具有统计学意义（F = 236.565、159.440、120.706、101.071、98.619、130.766、77.046,P均< 0.001）,E-cadherin蛋白水平高于miR-NC组（0.89±0.13比0.48±0.08）,差异具有统计学意义（F = 816.432,P < 0.001）。miR-491-5p在EC109细胞中负调控SHOC2表达,SHOC2过表达逆转了miR-491-5p过表达对EC109细胞增殖、迁移和侵袭及MAPK/ERK信号通路的影响。 结论miR-491-5p可抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与下调SHOC2表达抑制MAPK/ERK信号通路活性有关。     

盐酸罗哌卡因对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制*

目的:探讨盐酸罗哌卡因对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及分子机制。方法:采用逐步增加药物剂量诱导法建立骨肉瘤多柔比星耐药细胞株(U2OS/DOX),用浓度分别为0、20、50、100 μg/ml的盐酸罗哌卡因处理U2OS/DOX细胞,作为不同浓度盐酸罗哌卡因处理组;将pcDNA3.1、pcDNA3.1-Livin转染至U2OS/DOX细胞中再用浓度为100 μg/ml的盐酸罗哌卡因处理,记为盐酸罗哌卡因100 μg/ml+pcDNA3.1组、盐酸罗哌卡因100 μg/ml+pcDNA3.1-Livin组。MTT检测细胞增殖抑制率及细胞半数抑制浓度(IC₅₀);蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、Livin蛋白表达;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Livin mRNA表达水平。结果:多柔比星浓度大于1 μg/ml时,骨肉瘤细胞U2OS增殖抑制率显著升高,且具有剂量依赖性(P＜0.05);多柔比星浓度大于10 μg/ml时,骨肉瘤细胞骨肉瘤耐药细胞U2OS/DOX增殖抑制率显著升高,且具有剂量依赖性(P＜0.05)。盐酸罗哌卡因处理的U2OS/DOX细胞中P21、Caspase-3、E-cadherin表达水平显著升高,MMP-2表达水平显著降低,细胞增殖抑制率显著升高,克隆形成数显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞迁移、侵袭数显著降低,Livin表达水平显著降低,且呈浓度依赖性(P＜0.05)。过表达Livin部分逆转了盐酸罗哌卡因对细胞U2OS/DOX增殖、迁移、侵袭的抑制作用及凋亡的促进作用。结论:盐酸罗哌卡因能明显抑制对多柔比星具有耐药性的骨肉瘤细胞的增殖,迁移和侵袭,明显促进骨瘤细胞凋亡,其机制可能与Livin有关。     

miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的: 探讨miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,分析其调控WW结构域氧化还原酶基因(WWOX)的机制。方法: 收集2016年1月至2017年10月收治的28例肺癌组织和对应癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺癌组织、癌旁组织中miR-670-5p的表达水平。将肺癌细胞A549分为anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-670-5p组(转染anti-miR-670-5p)、anti-miR-670-5p+si-NC组(转染anti-miR-670-5p与si-NC)、anti-miR-670-5p+si-WWOX组(转染anti-miR-670-5p与si-WWOX)。转染48 h后,RT-qPCR或蛋白质印记(Western blot)检测转染效果。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测P21、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-670-5p和WWOX的靶向关系。结果: 肺癌组织中miR-670-5p的表达水平较癌旁组织显著升高(P＜0.05)。抑制miR-670-5p可抑制MMP-2蛋白表达(P＜0.05),促进P21和E-cadherin表达(P＜0.05),抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭(P＜0.05)。WWOX是miR-670-5p的靶基因,miR-670-5p负调控WWOX表达。抑制WWOX可部分逆转anti-miR-670-5p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P＜0.05)。结论: miR-670-5p通过靶向WWOX能够促进肺癌细胞增殖、迁移、侵袭。     

Inhibition of cervical carcinoma cell line proliferation by the introduction of a bovine papillomavirus regulatory gene.

Human papillomavirus (HPV) E6 and E7 oncogenes are expressed in the great majority of human cervical carcinomas, whereas the viral E2 regulatory gene is usually disrupted in these cancers. To investigate the roles of the papillomavirus E2 genes in the development and maintenance of cervical carcinoma, the bovine papillomavirus (BPV) E2 gene was acutely introduced into cervical carcinoma cell lines by infection with high-titer stocks of simian virus 40-based recombinant viruses. Expression of the BPV E2 protein in HeLa, C-4I, and MS751 cells results in specific inhibition of the expression of the resident HPV type 18 (HPV18) E6 and E7 genes and in inhibition of cell growth. HeLa cells, in which HPV gene expression is nearly completely abolished, undergo a dramatic and rapid inhibition of proliferation, which appears to be largely a consequence of a block in progression from the G1 to the S phase of the cell cycle. Loss of HPV18 gene expression in HeLa cells is also accompanied by a marked increase in the level of the cellular p53 tumor suppressor protein, apparently as a consequence of abrogation of HPV18 E6-mediated destabilization of p53. The proliferation of HT-3 cells, a human cervical carcinoma cell line devoid of detectable HPV DNA, is also inhibited by E2 expression, whereas two other epithelial cell lines that do not contain HPV DNA are not inhibited. Thus, a number of cervical carcinoma cell lines are remarkably sensitive to growth inhibition by the E2 protein. Although BPV E2-mediated inhibition of HPV18 E6 and E7 expression may contribute to growth inhibition in some of the cervical carcinoma cell lines, the BPV E2 protein also appears to exert a growth-inhibitory effect that is independent of its effects on HPV gene expression.     

余甘子提取物调控LINC01772/miR-153对肺癌细胞A549生物学行为的影响

摘要 目的：探讨余甘子提取物对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法：体外培养A549细胞,分为对照组、不同剂量（低、中、高剂量）余甘子提取物组、si-NC组、si-LINC01772组、高剂量余甘子提取物+pcDNA组和高剂量余甘子提取物+pcDNA-LINC01772组,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,嵌入式细胞共培养法（Transwell）检测细胞侵袭,免疫印迹法（Western Blot）检测细胞中上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）和神经型钙黏蛋白（N-cadherin）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测LINC01772和miR-153表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01772和miR-153调控关系。结果：与对照组相比,不同剂量余甘子提取物组A549细胞中LINC01772表达降低,且光密度值（OD值）、克隆形成数、迁移以及侵袭细胞数减少（P<0.05）,而miR-153含量与E-cadherin蛋白表达升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性（P<0.05）。LINC01772在A549细胞中负调控miR-153表达。与si-NC组相比,si-LINC01772组A549细胞增殖,侵袭及迁移能力受到抑制（P<0.05）。与高剂量余甘子提取物+pcDNA组相比,高剂量余甘子提取物+pcDNA-LINC01772组A549细胞增殖,侵袭及迁移能力增强（P<0.05）。结论：余甘子提取物可能通过调控LINC01772/miR-153轴抑制肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭,其可能通过下调LINC01772进而上调miR-153表达发挥作用,具有开发为治疗肺癌药物的潜在价值。     

Sulfiredoxin基因敲低对HeLa细胞恶性生物学行为的影响

Sulfiredoxin（SRX)作为一种重要的抗氧化蛋白质,最近研究发现其对某些肿瘤细胞生物学行为及细胞恶性转化有重要作用,而SRX对宫颈癌细胞恶性生物学行为有何影响尚未见报道.本研究选取宫颈癌HeLa细胞株,分别设为Wild-type（WT）组,Non-target（NT）组,Knock-down（KD）组. 利用siRNA技术干扰SRX基因在HeLa细胞中的内源性表达,采用MTT法、平板克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测肿瘤细胞增殖力、浸润、迁移能力、细胞凋亡情况,并分别用3组HeLa细胞上清液处理人脐静脉内皮细胞,观察各组条件培养基对内皮细胞血管形成能力的影响.结果表明,与两对照组比较,SRX干扰组细胞增殖力、浸润、迁移力显著降低,且干扰组上清使内皮细胞体外血管形成能力也明显下降（P<0.05）,而凋亡率则明显增加（P<0.05）.而两对照组之间结果均无显著差异（P>0.05）.实验结果表明,SRX基因对宫颈癌HeLa细胞恶性生物学行为具有促进作用,说明SRX可能与宫颈癌恶性进展有密切关系.     

骆驼蓬碱通过LOXL1-AS1影响卵巢癌细胞CAOV3增殖、凋亡、迁移侵袭

该研究探讨了骆驼蓬碱对卵巢癌细胞CAOV3增殖、凋亡、迁移侵袭的影响及分子机制.卵巢癌细胞CAOV3分为对照组,骆驼蓬碱低、中、高剂量组,si-NC组,si-LOXL1-AS1组,骆驼蓬碱高剂量+pcDNA组,骆驼蓬碱高剂量+pcDNA-LOXL 1-AS 1组.用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率;平板克...     

LncRNA MYU对胶质瘤细胞周期分布、增殖、转移和凋亡以及PI3K/Akt信号通路的影响

摘要 目的：探讨长链非编码RNA（LncRNA）MYU对胶质瘤细胞周期分布、细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法：实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测人脑正常胶质细胞HEB和胶质瘤细胞（U-251MG、A172、SHG139）中LncRNA MYU的表达情况。选取SHG139细胞,分为正常对照（NC）组、si-con组、si-LncRNA MYU组进行转染实验,行RT-qPCR检测转染效果。分别采用流式细胞术、细胞计数试剂盒（CCK-8）、Transwell实验检测沉默LncRNA MYU对SHG139细胞周期分布和凋亡、细胞增殖、细胞迁移和侵袭的影响。蛋白免疫印迹（Western blot）法检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved caspase-3）、Cleaved caspase-9以及磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路相关蛋白表达情况。结果：LncRNA MYU在胶质瘤细胞株中比人脑正常胶质细胞中的表达水平显著升高（P＜0.05）,因此选择表达量最高的SHG139细胞进行转染实验。沉默LncRNA MYU能够显著诱导SHG139细胞G0-G1期阻滞、抑制细胞增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡（P＜0.05）。沉默LncRNA MYU可显著抑制MMP-2、MMP-9、p-PI3K和p-AKT表达并促进Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达（P＜0.05）。结论：沉默LncRNA MYU可诱导胶质瘤细胞G0-G1期阻滞,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。