红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响

探讨红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响,为从微生态角度研究红茶在人体肠道菌群形成过程中的作用机制奠定基础。

利用宏基因组测序技术检测4周龄新生幼鼠（4weeks组,n = 30）、12周龄正常对照组小鼠（control组,n = 15）和12周龄喂饲红茶水实验组小鼠（teadrink组,n = 15）的肠道菌群分布,分析3组样本的菌群差异情况,探求红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响。

与control组相比,teadrink组小鼠肠道拟杆菌门（t = −7.711,P＜0.001）、拟杆菌科（t = −3.411,P = 0.009）、长尾嗤菌体科（t = −2.515,P = 0.036）、拟杆菌属（t = −2.693,P = 0.027）、邓肯菌属（t = −2.434,P = 0.041）、居海事城球杆菌属（t = −3.327,P = 0.029）、迪博邓肯菌（t = −2.679,P = 0.028）、普通居海事城球杆菌（t = −3.401,P = 0.027）和Duncaniella_sp._C9（t = −3.104,P = 0.035）相对丰度显著增加,厚壁菌门（t = 8.952,P＜0.001）、乳杆菌科（t = 13.102,P＜0.001）、消化链球菌科（t = 3.665,P = 0.021）、爱格菌科（t = 4.481,P = 0.002）、理研菌科（t = 3.626,P = 0.022）、乳杆菌属（t = 5.542,P = 0.004）、黏液乳杆菌属（t = 6.334,P = 0.002）、龙包茨菌属（t = 3.785,P = 0.005）、阿德勒菌属（t = 4.504,P = 0.002）、约氏乳杆菌（t = 4.282,P = 0.011）和罗伊氏粘液乳杆菌（t = 6.156,P = 0.003）相对丰度显著减少。与4weeks组相比,teadrink组小鼠肠道菌群分布差异大于control组。

红茶对新生幼鼠肠道菌群的形成能够产生影响,不同丰度的菌群可能通过调节碳水化合物代谢等途径来达到改善肠道菌群结构、增强肠道稳态的目的,具体代谢机制有待深入研究。

     

高校女性日常能耗与肠道菌群的相关性研究

探讨高校女性日常能耗及肠道菌群结构特征,分析不同能耗指标与特征肠道菌群之间的相关性。

基于智能可穿戴设备人体运动能耗检测仪对广州两所大学的青年女性（Y组,n=30）、中年女性（M组,n=30）进行48 h能耗监测,统计分析日常能耗的组间差异。采集调查对象清晨粪便进行16S rRNA基因测序,运用多元统计学分析中青年女性肠道菌群结构特征。将目、属水平的特征菌群与能耗指标进行相关性检验及回归分析。

Y组人群的日均步数（t=4.250,P＜0.001）、每日能耗值（t=3.590,P＜0.001）、日均中高强度活动时长（t=4.357,P＜0.001）均显著高于M组;两组人群肠道菌群的目、属水平的丰度差异菌群主要为乳杆菌目（Lactobacillales）（t=2.537,P=0.014）、小杆菌属（Dialister）（t=2.904,P=0.005）、布劳特菌属（Blautia）（t=3.246,P=0.002）,其中Lactobacillales和Dialister与多项能耗指标呈正相关,Blautia与多项能耗指标呈负相关。

日均步数、每日能耗值、日均中高强度活动时长的能耗指标可用于预测更好的身体机能;一定条件下,增加低、中、高强度活动时长可能提高Lactobacillales和Dialister的丰度,进而延缓身体机能下降。

     

氨基酸型肠内营养制剂支持后克罗恩病患者肠道微生物和非靶向代谢组学指标的分析

探讨氨基酸型肠内营养制剂支持后克罗恩病患者的肠道微生物和非靶向代谢组学指标的变化,为该类患者的治疗提供参考。

选择我院收治的20例克罗恩病活动期患者作为研究对象,所有患者均采用氨基酸型肠内营养制剂进行支持治疗。比较患者治疗前后肠道菌群结构、菌群多样性以及非靶向代谢组学检测结果的差异。

治疗后,患者肠道乳杆菌属（t=5.200,P＜0.001）、大肠埃希菌（t=11.974,P＜0.001）、克雷伯菌属（t=15.033,P＜0.001）、糖单胞菌（t=12.166,P＜0.001）、恶臭假单胞菌（t=31.063,P＜0.001）、肠球菌属（t=28.867,P＜0.001）数量均显著升高;同时患者肠道菌群OUTs（t=40.435,P＜0.001）、Observed species（t=5.475,P＜0.001）、Chao1指数（t=12.348,P＜0.001）、Simpson指数（t=2.961,P=0.005）、Shannon指数（t=3.330,P=0.002）均显著升高。相比治疗前,治疗后患者血清以及粪便中的氨基酸、多肽、脂肪酸、胆固醇及碳水化合物水平均显著改善。

氨基酸型肠内营养制剂支持后,克罗恩病患者肠道菌群丰度提高,同时患者脂质代谢的改善可能与氧化应激反应通路相关联。

     

益生菌辅助厄贝沙坦片对糖尿病肾病大鼠的疗效及调节肠道菌群作用的研究

研究益生菌联合厄贝沙坦对糖尿病肾病大鼠的疗效及对肠道菌群的调节作用。

随机选择24只雄性SD大鼠,平均体质量（220±20）g,随机选择6只SD大鼠作为正常组,另取18只SD大鼠为造模组,以高糖高脂饲料+5%葡萄糖水喂养21 d,对造模组大鼠进行腹腔链脲佐菌素（STZ）注射3 d,对照组大鼠腹腔注射枸橼酸缓冲液,将造模成功的大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组和联合给药组,每组各6只。对于正常组和模型组大鼠进行等量生理盐水灌胃,厄贝沙坦组大鼠进行20 mg/mL厄贝沙坦片灌胃,联合给药组大鼠在厄贝沙坦组基础上加用益生菌灌胃（1×10¹⁰ CFU/mL乳酸菌+1×10⁸ CFU/mL其他菌）,每天灌胃1次,共灌胃2周。治疗结束后收集新鲜粪便于−80 ℃冰箱中储存,收集24 h尿液,测定24 h 尿蛋白（UP）,收集腹主动脉血液,测定尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）,对血样中空腹血糖（FBG）水平进行检测。应用DNA提取试剂盒提取粪便DNA,应用紫外分光光度法对DNA含量进行检测,对16S rDNA V4区进行PCR扩增检测,对rDNA文库进行高通量测序。

经过15 d治疗,厄贝沙坦组和联合给药组大鼠的FBG、Scr、BUN和24 h UP水平均有降低,其中联合给药组大鼠的FBG、Scr、BUN和24 h UP水平降低情况优于厄贝沙坦组（t = 8.379,P = 0.001;t = 3.570,P = 0.005;t = 7.579,P = 0.001;t = 2.486,P = 0.032）;粪便样本中有60%以上高质量序列,组间粪便样本差异无统计学意义（P＞0.05）;厄贝沙坦组和联合给药组大鼠的Ace指数和Chaol指数均相对模型组有所改善（t = 9.210,P = 0.001;t = 2.134,P = 0.050;t = 12.314,P = 0.001,t = 7.180,P = 0.001）,而且联合给药组改善情况优于厄贝沙坦组（t = 3.091,P = 0.011;t = 2.769,P = 0.020）;在门水平上群落结构相似（P＞0.05）,在属水平上,乳杆菌属在各组中均有较高丰度。相对正常组,模型组大鼠肠道菌群门、纲、目、属分类水平均有差异,在科、属中,SMB53科、脱硫弧菌科、消化链球菌科、传代菌属和双歧杆菌属丰度有所上调,瘤胃菌科、理研菌科、梭菌属、乳杆菌属丰度有所下降,厄贝沙坦组和联合给药组大鼠各菌属表达均有所改善,其中联合给药组大鼠改善程度优于厄贝沙坦组（t = 9.181,P = 0.001;t = 2.497,P = 0.032;t = 11.288,P = 0.001;t = 2.466,P = 0.033;t = 2.598,P = 0.027;t = 3.152,P = 0.010;t = 7.924,P = 0.001;t = 5.313,P = 0.001;t = 2.287,P = 0.045）。

益生菌联合厄贝沙坦对糖尿病肾病大鼠的治疗效果显著且对肠道菌群有显著改善作用。

     

营养干预对肝硬化代偿期合并糖尿病患者肠道菌群的影响

探讨营养干预对肝硬化代偿期合并糖尿病患者肠道微生物的影响。

收集2022年9月—2023年9月本院收治的80名肝硬化代偿期合并糖尿病患者,随机分为对照组和观察组,每组40例。对照组使用常规降糖药物治疗,观察组在对照组基础上,进行营养干预,根据1.5 g/kg的体重剂量摄入乳清蛋白质粉,接受常规饮食咨询和营养建议。每4周收集空腹血清样本,在干预前和营养干预后12周收集粪便样本,使用全自动生化分析仪、ELISA法检测血清葡萄糖、总胆固醇、高密度脂蛋白（HDL-c）胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）胆固醇水平等临床参数。使用Illumina Nova Seq平台对粪便基因组DNA测序。

对照组患者12周后临床各项指标与基线比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。观察组患者营养干预后空腹血糖（t=2.862,P=0.005）、空腹胰岛素（t=5.926,P＜0.001）、HOMA-IR（t=2.680,P=0.009）、hs-CRP（t=3.386,P=0.001）、蛋白质氧化率（t=7.762,P=0.001）均显著降低,呼吸商显著增加（t=2.958,P=0.004）。营养干预后6个菌种的相对丰度发生了显著变化,分别属于厚壁菌门、拟杆菌门和变形菌门。属于拟杆菌属和梭菌目的菌种在营养干预后产生了显著的菌株基因组变化。基于HOMA-IR的相对改善,将观察组患者分为响应者（R）亚组和非响应者（NR）亚组。两个亚组之间肠道微生物群的动态变化差异有统计学意义（P=0.008）。

肠道微生物群在营养干预对肝硬化代偿期合并糖尿病患者胰岛素敏感性影响中发挥重要作用,可能有助于临床实施个体化生活方式干预。

     

双歧杆菌三联活菌对混合痔选择性痔上黏膜吻合术术后患者便秘的预防效果及对肠道菌群的影响

探讨双歧杆菌三联活菌在混合痔选择性痔上黏膜吻合术（TST）术后患者中的应用价值,为临床预防术后便秘提供参考。

选取2021年8月至2023年2月我院收治的100例混合痔TST术后患者为研究对象,并分为对照组（n=46,接受莫沙必利治疗）和研究组（n=54,接受莫沙必利联合双歧杆菌三联活菌治疗）。持续治疗2周后,比较两组患者术后便秘发生情况、术后恢复情况（排气时间、排便时间、住院时间）、排便困难程度、粪便性状、肠道菌群数量、血清P物质（SP）、血管活性肠肽（VIP）水平。

研究组患者便秘发生率低于对照组（χ²=4.617,P=0.032）。研究组患者首次排气时间、排便时间及住院时间均短于对照组（t=15.103、13.358、8.463,均P＜0.001）。治疗2周后,研究组患者排便困难程度及粪便性状评分均低于对照组（t=5.221、4.001,均P＜0.001）。研究组患者肠道乳杆菌、双歧杆菌数量高于对照组,肠杆菌、球杆菌、酵母菌数量均低于对照组（t=4.646、3.688、2.454、4.818、8.681,均P＜0.001）。研究组患者血清SP水平高于对照组,VIP水平低于对照组（t=3.328、8.999,均P＜0.001）。

双歧杆菌三联活菌可预防混合痔TST术后患者便秘的发生,同时优化患者肠道菌群及脑肠肽类激素分泌。

     

低聚果糖对AOM/DSS诱导的结肠炎相关结直肠癌小鼠辅助性T细胞的调控作用

探讨益生元低聚果糖（FOS）对结肠炎相关结直肠癌（CAC）小鼠肠道辅助性T细胞的调节作用。

将6周龄SPF级雄性C57BL6小鼠（体重18～20 g）随机分为对照组、模型组和干预组,每组10只。通过偶氮甲烷、葡聚糖硫酸钠构建CAC小鼠模型,干预组每日使用2 mg/kg b.w. FOS灌胃,持续10周。造模期间监测各组小鼠体重变化,造模结束后测量结肠长度和肿瘤数目。采用微球免疫分析法检测血清Th1/Th2/Th17相关细胞因子水平,流式细胞术分析肠系膜淋巴结内Th1、Th2、Th17细胞亚群比例。

与模型组相比,干预组小鼠结肠长度显著增加（t=3.106,P=0.006 4）,肿瘤数目显著减少（U=15.000,P=0.011 1）,血清中IL-17A（t=3.504,P=0.008 8）、TNF-α（t=2.381,P=0.030 0）等促炎细胞因子水平降低,肠系膜淋巴结Th17细胞比例显著降低（t=6.031,P=0.002 7）,Th1/Th2显著升高（t=2.419,P=0.038 7）。

FOS可调控CAC模型小鼠结肠内辅助性T细胞的分化,抑制肿瘤的发生。

     

益生菌对调节脑梗死后大鼠运动功能的机制研究

探讨在脑梗死后康复期使用益生菌治疗促进大鼠运动功能恢复的机制。

成年雄性SPF级7～8周龄Wistar大鼠,体重200～250 g,共35只。25只大鼠颅内注射内皮素制作脑缺血模型,模型制作后5只大鼠死亡,剩余20只大鼠按照随机数表法分为缺血组（ISC组）和缺血+益生菌组（ISC+PB组）,每组10只。另外10只大鼠作为假手术组（SHAM组）。SHAM组大鼠仅使用生理盐水按照上述造模流程进行。各组均喂食普通大鼠饲料。ISC+PB组大鼠第7天开始使用益生菌VSL#3溶液进行灌胃,0.25 mL/(只•d)。采用原位末端转移酶标记（TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL）凋亡试剂盒检测凋亡细胞。采用蛋白质免疫印迹法检测各组大鼠海马与梗死周边皮层脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）的蛋白水平变化。使用梯形平衡木测试大鼠的肢体运动功能。

ISC组大鼠TUNEL阳性细胞数量较SHAM组显著增多（t=3.278,P=0.016）,ISC+PB组大鼠的TUNEL阳性细胞数量低于ISC组（t=2.721,P=0.037）。ISC组大鼠海马与梗死周边BDNF蛋白表达水平高于SHAM组（t=2.012,P=0.032）,ISC+PB组大鼠海马与梗死周边皮层BDNF水平较ISC组进一步提高（t=1.892,P=0.021）。梯形平衡木行走实验显示ISC组大鼠产生明显的运动功能损伤（t=3.425,P=0.041）,而ISC+PB组错误率低于ISC组（t=4.131,P=0.024）。

脑梗死后益生菌通过调控BDNF水平,抑制细胞凋亡,改善运动功能。

     

赖氨酸维B12合剂联合西沙比利对功能性消化不良腹痛患儿肠道菌群及胃肠功能的影响

探讨赖氨酸维B₁₂合剂联合西沙比利对功能性消化不良（FD）腹痛患儿肠道菌群及胃肠功能的影响,以期为临床提供参考。

选取2022年5月至2023年6月于本院收治的90例FD伴腹痛患儿,采用简单随机分组将患儿分为单一组（n=45）和联合组（n=45）,单一组患儿采用西沙比利治疗,联合组患儿采用赖氨酸维B₁₂合剂联合西沙比利治疗。比较两组患儿的疗效,治疗前后患儿的肠道菌群、胃肠功能和疼痛程度,记录两组患儿治疗期间的不良反应发生情况。

联合组患儿治疗的有效率为95.56%,单一组为82.22%,差异有统计学意义（χ²=4.050,P＜0.05）。治疗后,联合组患儿的乳杆菌和双歧杆菌数量较单一组高,大肠埃希菌数量较单一组低,差异均有统计学意义（t=11.065,17.829,7.985,均P＜0.05）。治疗后,联合组患儿的粪便性质分级量表评分较单一组高,克利夫兰便秘评分量表和视觉模拟评分量表评分较单一组低,差异均有统计学意义（t=4.395,4.414,10.302,均P＜0.05）。治疗后,联合组患儿的胃动素和胃泌素水平较单一组高,生长抑素水平较单一组低,差异均有统计学意义（t=6.102,10.743,10.908,均P＜0.05）。联合组患儿的不良反应发生率为6.67%,单一组为13.33%,差异无统计学意义（χ²=0.485,P＞0.05）。

赖氨酸维B₁₂合剂联合西沙比利治疗FD伴腹痛患儿具有较好的临床疗效且无明显不良反应,可以缓解腹痛,改善肠道菌群和胃肠功能。

     

慢性肾衰竭患者肠道菌群改变与肾小球滤过率的关系

探究慢性肾衰竭患者肠道菌群结构改变与肾小球滤过率的关系。

选取2017年3月至2020年3月我院收治的202例慢性肾衰竭患者作为试验组, 并选取198例同期健康体检者作为对照组。收集两组入选者粪便标本并进行检测, 对比两组入选者肠道菌群数量; 同时对比两组入选者体质量、肾小球滤过率、血肌酐、血尿素氮、血胱抑素C水平, 采用Pearson相关性分析肠道菌群改变与肾小球滤过率的相关性。

相比于对照组, 试验组患者肠道双歧杆菌(t=21.915, P < 0.001)、大肠埃希菌数量显著降低(t=18.220, P < 0.001), 肠球菌数量显著增高(t=16.782, P < 0.001)。相比于对照组, 试验组患者肾小球滤过率(t=147.035, P < 0.001)显著降低, 血肌酐(t=43.129, P < 0.001)、血尿素氮(t=170.206, P < 0.001)、血胱抑素C(t=22.432, P < 0.001)水平显著增高。Spearman相关性分析显示, 慢性肾衰竭患者肠道双歧杆菌(r=-0.695, P < 0.001)和大肠埃希菌(r=-0.631, P < 0.001)与肾小球滤过率呈负相关。Logistic回归分析显示, 双歧杆菌、大肠埃希菌、肠球菌、血肌酐、血尿素氮和血胱氨酸均是慢性肾衰竭患者肾小球滤过率降低的独立危险因素。

慢性肾衰竭患者肠道双歧杆菌和大肠埃希菌数量降低、肠球菌数量升高, 且与肾小球滤过率呈显著负相关。

     

鸟苷酸环化酶C激动剂对便秘小鼠肠道菌群的影响

通过动物模型和16S rDNA高通量测序,探究鸟苷酸环化酶C（guanylate cyclase C,GC-C）激动剂（利那洛肽）对便秘的治疗作用和肠道菌群的影响,以期为便秘的治疗提供理论依据。

随机将30只雄性C57BL/6小鼠平均分为对照组、便秘模型组及治疗组,每组10只。其中对照组小鼠给予生理盐水灌胃,便秘模型组和治疗组小鼠给予洛哌丁胺灌胃构建便秘模型,造模成功后治疗组小鼠给予GC-C激动剂灌胃。干预结束后检测各组小鼠粪便含水率、首粒黑便排出时间、小肠推进率以及血清中P物质（Substance P,SP）、血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）水平;使用16S rDNA高通量测序分析3组小鼠肠道菌群特点和差异。

与便秘模型组相比,治疗组小鼠粪便含水量、小肠推进率显著提升（t = 3.418,P = 0.003 1;t = 3.141,P = 0.005 6）,首粒黑便排出时间缩短（t = 4.756,P = 0.000 2）;血清VIP水平降低（t = 4.894,P = 0.000 5）,SP水平有升高趋势。与对照组相比,便秘模型组小鼠肠道菌群多样性显著降低,门水平上,Firmicutes丰度升高和Bacteroidetes丰度降低;属水平上,便秘模型组小鼠Muribaculaceae、Lachnospiraceae、Akkermansia丰度降低（均P＜0.050 0）,Allobaculum、Turicibacter、Clostriclium丰度升高（均P＜0.001 0）,通过GC-C激动剂干预可以改善便秘引起的菌群改变,并显著提高了Lactobacillus丰度（P = 0.030 5）。

GC-C激动剂可能通过影响血清中SP、VIP水平,并调节便秘小鼠的肠道菌群趋于正常,增加Lactobacillus、Muribaculaceae等产短链脂肪酸菌群丰度,提高肠道动力,从而起到改善便秘的作用。

     

Akkermansia muciniphila在结肠炎相关结肠癌中的作用和机制

探究Akkermansia muciniphila在结肠炎相关结肠癌中的作用以及Akkermansia muciniphila通过影响肠道黏膜屏障延缓结肠炎癌变的机制。

C57BL/C小鼠共30只,分为对照组、结肠炎相关结肠癌组、结肠炎相关结肠癌+AKK组,每组10只,在建模结束后采用断头法处死小鼠,HE染色检测结肠病理结构,计算成瘤率。采用ELISA法检测3组小鼠结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,免疫荧光双染法检测3组小鼠ZO-1和E-cadherin的表达情况,免疫组化法检测3组小鼠结肠组织Occludin-1、N-cadherin、GPCR41、GPCR43、Bcl-2、 Bax等蛋白的水平,GC-MS法检测3组小鼠短链脂肪酸的水平。

HE发现结肠炎相关结肠癌组小鼠的结肠组织炎症浸润,肠腺水肿,存在不同程度的异型增生,结肠炎相关结肠癌+AKK组小鼠的结肠水肿和出血减轻,肠腺结构清晰。结肠炎相关结肠癌组中小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平（pg/mL）（9.12±0.36、6.36±0.42、45.20±3.63）较对照组（3.80±0.38、0.06±0.89、2.10±0.14）升高（Tamhane’s T2分别为0.001、2.549、12.831,均P＜0.05）,经Akkermansia muciniphila灌胃后,IL-1β、IL-6、TNF-α水平（3.92±0.19、3.54±1.28、18.20±8.47）下降（Tamhane’s T2分别为6.553、2.414、5.743,均P＜0.05）。免疫荧光双染法显示ZO-1 和 E-cadherin主要定位在结肠柱状上皮和肠腺,结肠炎相关结肠癌组ZO-1和E-cadherin的表达（ng/mL）（0.04±0.01、0.34±0.55）比对照组（0.10±0.18、0.48±0.13）降低（Tamhane’s T2分别为0.681、4.379,均P＜0.05）,而经Akkermansia muciniphila处理后显著上调小鼠结肠的ZO-1 和 E-cadherin的表达（0.08±0.05、1.08±0.28）（Tamhane’s T2分别为7.059、5.873,均P＜0.05）。免疫组化显示结肠炎相关结肠癌组Occludin-1、GPCR41、GPCR43、Bcl-2表达（ng/mL）（0.36±0.06、0.48±0.13、0.38±0.13、0.34±0.55）较对照组（1.08±0.08、0.74±0.06、0.48±0.13、1.64±0.11）减低（LSD-t分别为2.369、0.304、8.119、2.298,均P＜0.05）,Bax表达（ng/mL）（1.34±0.27）较对照组（0.48±0.13）增加（LSD-t为7.727,P＜0.05）,与结肠炎相关结肠癌组相比,结肠炎相关结肠癌+AKK组小鼠的Occludin-1、GPCR41、GPCR43、Bcl-2表达（0.84±0.06、0.60±0.19、1.08±0.08、1.08±0.28）上调（LSD-t分别为1.153、4.111、9.472、5.873,均P＜0.05）,Bax表达（0.34±0.58）下调（LSD-t为8.785,P＜0.05）。短链脂肪酸检测结果显示,结肠炎相关结肠癌组丙酸丙酯水平（μg/mg）（0.000066±0.000025）较对照组（0.000244±0.000035）下降（LSD-t为7.448,P＜0.05）,而经Akkermansia muciniphila干预后,结肠炎相关结肠癌+AKK组的丙酸丙酯水平（0.000276±0.000049）上升（LSD-t为8.779,P＜0.05）,3组中戊酸丙酯、异己酸丙酯、己酸丙酯的水平差异均无统计学意义。

Akkermansia muciniphila可降低结肠炎相关结肠癌小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平,可能通过短链脂肪酸介导GPCR调控ZO-1、E-cadherin、Occludin-1等结肠紧密连接蛋白的表达,增强结肠的黏膜屏障,从而降低结肠炎相关癌变的发展进程。

     

布拉氏酵母菌散剂对NASH大鼠的疗效及其作用机制探讨

目的观察口服布拉氏酵母菌散剂对NASH大鼠的疗效及其对sR—A的影响。方法42只雄性Sprague Dawley（SD）大鼠,随机分为正常对照组（NG,n=14）、模型组（MG,n=14）和干预组（TB,n=14）;正常组给予普通饲料喂养,模型组给予高脂饲料喂养,17周起干预组给予布拉氏酵母菌散剂灌胃,24周末将所有大鼠一并处死。比较各组血清内毒素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶;计算非酒精性脂肪性肝病评分;采用免疫荧光法测定SR—A蛋白的表达,RealtimePCR法检测大鼠肝脏SR-A、TNF—αmRNA水平。结果与正常对照组相比,模型组的大鼠门冬氨酸氨基转氨酶（AST）、丙氨酸氨基转氨酶（ALT）均明显升高;干预组的大鼠AST、ALT与模型组相比均下降;模型组血清内毒素水平与正常对照组相比明显增加[（0．36±0．02）EU／mL vs（0．17±0．01）EU／mL,P〈0．05];而与模型组相比,干预组血清内毒素水平减少（0．22±0．01）EU／mL vs（0．36±0．02）EU／Ml,P〈0．05）。肝组织SR—A在正常对照组呈弥漫性表达,模型组肝脏的表达明显减少,干预组肝组织SR—A的表达较模型组升高。模型组的大鼠肝组织SR—AmRNA水平与正常组相比显著减少（0．52±0．32vs1．43±0．46,P〈0．05）;而与模型组相比,干预组的大鼠肝组织SR—AmRNA增加（0．87±0．34vs0．52±0．32。P〈0．05）。与正常组相比,模型组的大鼠肝组织TNF-αmRNA水平明显增加（1．56±0．35vs0．57±0．23,P〈0．05）;而与模型组相比,干预组的大鼠肝组织TNF—dmRNA水平减少（1．23±0．24vs1．564-0．35,P〈0．05）。结论布拉氏酵母菌散剂能够减轻肝脏脂肪变性及炎症程度,其机制可能与改善肠道菌群、减少肠源性内毒素、增加肝组织SR-A的表达有关。     

健脾益肾通络方对MPTP诱导的帕金森病小鼠肠道菌群与短链脂肪酸的调节作用

探讨健脾益肾通络方（JYTR）对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的帕金森病小鼠肠道菌群组成和短链脂肪酸的影响。

将成年雄性C57BL/6小鼠随机分成3组：空白组、MPTP组、MPTP+JYTR组,每组15只。采用爬杆、悬挂、横梁实验评估运动情况。采用免疫荧光法检测纹状体酪氨酸羟化酶（TH）的表达。采用蛋白印迹法检测纹状体和结肠中α-突触核蛋白（α-syn）的表达。采用16S核糖体RNA（16S rRNA）基因测序评估肠道菌群的变化。采用气相色谱质谱法（GC-MS）分析小鼠粪便短链脂肪酸的水平。最后对差异菌群和短链脂肪酸进行相关性分析。

与MPTP组相比,MPTP+JYTR组小鼠悬挂评分增加（P=0.040）,爬杆时间和横梁行走时间显著缩短（P=0.042、P＜0.001）;纹状体TH表达显著增加（P=0.045）,纹状体、结肠中α-syn表达显著减少（P=0.011、P=0.037）;肠道菌群alpha多样性、beta多样性显著改变;门水平方面拟杆菌门丰度增加（P=0.003）,厚壁菌门、疣微菌门丰度均显著减少（P=0.001、P=0.011）;科水平方面毛螺菌科丰度显著升高（P=0.001）,嗜黏蛋白阿克曼菌科、丹毒丝菌科丰度均显著降低（P=0.008、P=0.004）;短链脂肪酸中乙酸、丙酸水平均显著增加（P=0.014、P=0.010）。相关性分析显示爬杆时间、悬挂评分、横梁时间均与肠道菌群、短链脂肪酸存在相关性。

JYTR可以通过调节肠道菌群失调和改善短链脂肪酸水平起到治疗帕金森病的作用。

     

双歧杆菌三联活菌对肥胖小鼠的改善作用及其机制

探讨双歧杆菌三联活菌对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的改善作用及其机制。

将24只LDLR^－/－小鼠随机分为正常组（n = 8,普通饲料,灌胃生理盐水）、高脂组（n = 8,高脂饲料,灌胃生理盐水）和干预组（n = 8,高脂饲料,灌胃双歧杆菌三联活菌）。所有小鼠均干预16周,每2周记录小鼠体质量,第15周进行口服葡萄糖耐量试验。小鼠处死后,检测血清中脂质和胰岛素指标;采用RT-PCR分析回肠中炎症因子和肠道紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的mRNA相对表达量;采用HE染色评估回肠组织病理变化;采用16S rDNA高通量测序分析小鼠肠道微生物群变化特点。

与正常组相比,高脂组小鼠表现出明显的体质量增加、糖脂代谢紊乱、回肠炎症水平增加和肠道微生物群紊乱。干预后,干预组小鼠体质量下降,糖脂代谢紊乱改善,回肠炎症因子TLR4和TNF-α相对表达量显著下降（均P＜0.05）;而肠道紧密连接蛋白ZO-1和Occludin相对表达量显著增加（均P＜0.05）。测序结果表明,干预组小鼠肠道菌群中Firmicutes和Bifidobacterium丰度增加。

双歧杆菌三联活菌可能通过优化肥胖小鼠的肠道微生物群结构,增加Firmicutes和Bifidobacterium丰度,进而减轻肥胖小鼠体质量,调节糖脂代谢,降低肠道内炎症和修复肠黏膜屏障。

     

维吾尔族新发2型糖尿病患者肠道 乳杆菌属和多形拟杆菌的定量研究

目的定量研究维吾尔族新发2型糖尿病(T2DM)患者和糖耐量正常(NGT)人群肠道中乳杆菌属(Lactobacillus genus)和多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)的相对水平。方法严格按照纳入标准、排除标准收集维吾尔族新发T2DM患者96例,NGT 98例。提取所有研究对象的粪便细菌总DNA后,采用16SrDNA基因实时荧光定量PCR(Real-time PCR)对乳杆菌属和多形拟杆菌的水平进行定量检测;运用Pearson相关性分析乳杆菌属与研究对象的BMI、腰围、臀围、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)的相关性。结果 16SrDNA基因Real-time PCR结果显示:(1)与新疆维吾尔族NGT组相比,乳杆菌属水平在新发T2DM中较低,差异有统计学意义(t=8.557,P=0.000)。但是多形拟杆菌在两组差异无统计学意义(t=0.524,P=0.601);(2)新疆维吾尔族上述人群肠道中乳杆菌属水平与FBG呈负相关(r=-0.334,P=0.000),腰围呈负相关(r=-0.170,P=0.018),TC呈负相关(r=-0.178,P=0.013),TG呈负相关(r=-0.157,P=0.030),收缩压呈负相关(r=-0.255,P=0.000)。结论 Lactobacillus genus水平在肠道中降低可能与2型糖尿病的发病,血糖和血脂代谢有关,其机制需进一步研究探讨。     

基于16S rRNA基因测序研究蜥蜴胃康方对胃癌肝转移裸鼠肠道菌群的影响

观察不同剂量蜥蜴胃康方对胃癌肝转移裸鼠肠道菌群的影响。

60只裸鼠随机分为正常对照组(10只)和造模组(50只), 造模组用HGC-27胃癌细胞通过脾脏注射制备胃癌肝转移模型, 造模4周时, 随机取正常对照组1只与造模组5只, 取裸鼠肝组织通过病理切片对比验证造模是否成功。随后剩余造模组45只裸鼠随机分为模型组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组以及蜥蜴胃康方高(2.6 g/mL)、中(1.3 g/mL)、低(0.6 g/mL)剂量组, 每组9只。取最后一次灌胃2 h后各组裸鼠新鲜粪便进行16S rRNA基因测序。

16S rRNA测序结果显示, 与正常对照组相比模型组裸鼠肠道菌群在门水平表现为拟杆菌门、厚壁菌门丰度下降, 放线菌门、蓝藻菌门丰度富集。属水平表现为Muribaculaceae丰度显著降低(t=3.514 4, P=0.024 6), 拟普雷沃菌属丰度显著富集(t=-4.660 1, P=0.009 6), 副拟杆菌属丰度显著富集(t=-4.284 7, P=0.012 8), 瘤胃球菌属丰度显著降低(t=3.342 7, P=0.028 8)。经蜥蜴胃康方干预后, 胃癌肝转移裸鼠的肠道菌群结构得到了改善, 门水平表现为厚壁菌门丰度增加, 放线菌门丰度降低, 各组间差异有统计学意义(H=11.619 9, P=0.040 4);蓝藻菌门丰度降低, 组间差异有统计学意义(H=11.433 1, P=0.043 4)。属水平表现为Muribaculaceae丰度升高, 拟普雷沃菌属、副拟杆菌属丰度降低; 瘤胃球菌属(H=14.658 4, P=0.011 9)、乳杆菌属(H=11.386 0, P=0.044 2)丰度显著富集, 各组间差异有统计学意义(P < 0.05)。

蜥蜴胃康方能增加厚壁菌门丰度, 降低放线菌门、蓝藻菌门丰度, 提高益生菌乳杆菌属、瘤胃球菌属丰度, 降低致病菌肠杆菌属、梭状芽胞杆菌属丰度。其中以蜥蜴胃康方高剂量组对肠杆菌属、梭状芽胞杆菌属的抑制作用最显著, 并能有效提高乳杆菌属丰度, 从而调节胃癌肝转移裸鼠肠道菌群的平衡, 增强肠黏膜免疫屏障, 激活免疫细胞释放肿瘤坏死因子来发挥对胃癌的抑制作用。

     

地衣芽胞杆菌BL63516对DSS诱导的小鼠结肠炎的调节作用

目的 探索地衣芽胞杆菌BL63516对DSS诱导的小鼠结肠炎的缓解作用和可能机制,为临床疾病的治疗提供新思路。方法 用BALB/C雌性小鼠构建动物模型,将30只小鼠分为CON组、DSS组和BL组,每组10只,除CON组外,其余两组均给予3%（m/v）DSS自由饮用,并给予地衣芽胞杆菌BL63516干预。第8天摘眼球处死小鼠,取血、结肠、粪便样本。以ELISA法检测小鼠血清和结肠研磨液中的细胞因子。用PCR-变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）方法分析小鼠肠道菌群结构。结果 DSS组小鼠血清IL-10及结肠MPO水平均与CON组有明显差异,地衣芽胞杆菌干预后有不同程度改变;使用非加权成对算术平均算法（UPGMA）对PCR-DGGE图谱中各泳道条带类型聚类分析结果显示各组小鼠结肠菌群结构具有显著差异,其中BL组增加双歧杆菌属Bifidobacterium saguini及疣微菌门的噬黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila）数量。结论 地衣芽胞杆菌可以有效改善DSS诱导的结肠炎症状,其作用机制与肠屏障功能和肠道菌群的调节有密切关系。