银染色方法及其在细胞遗传学中的应用

硝酸银染色在细胞化学中的应用已有很久 的历史,但用以研究染色体却是近几年的事。 Goo即asture等[21应用称为Ag-AS的银染色技 术,使9种哺乳动物的核仁组织者(NOR）特 异性染为黑色。这种银染色阳性的NOR称为 Ag-NOR。经与Hsu等[31用原位分子杂交得到 的结果相比较,证明Ag-NOR也就是18S+28S 核糖体基因（rDNA）的分布区。嗣后,在肿瘤 细胞遗传学、进化遗传学、临床遗传学、体细胞 遗传学等方面,银染色的应用日趋广泛。技术本 身也不断有所改进和发展,现被认为是研究 18S十28S r DNA的分布和转录活性的一种简 易有效的方法。最近,银染色还开始用于着丝 点、中心粒、减数分裂联会复合体（Synapsis complex）的研究,取得了许多有意义的新结 果。     

遗传学实验

（十六）哺乳动物染色体的银染法实验原理 银染法（Ag-As技术）专染哺乳动物染色体上的核 仁组成区（nucleolar organizer region, NOR)。已知哺 乳动物中编码18S rRNA, 28S rRNA的基因（rDNA）是 位于特定染色体的核仁组成区。当用银染法染色时, rDNA能选择性地还原银,呈深黑色,染色深黑的可染 区即为核仁组成区（Ag-NORs )。可染区的数目反映了 有转录活性的核糖体RNA基因的数目。     

人染色体的银染与G带的复合显示方法

自Goodpastur。等^[3]建立染色体的银染色方 法以来,该技术已在细胞遗传学的各个领域得 到广泛的应用,被认为是研究18S-28S rDNA 的分布与转录的一种简易而有效的方法^[4]。银 染技术可以特异性地使核仁组织者区（NOR) 着色（称之Ag-NOR),其银染位置与染色体上 核糖体基因(rDNA）的分布相一致^[10]     

正常人和21三体征家庭的银染核仁形成区的研究

DNA-RNA原位杂交术证明了人类18S—28S核糖体RNA基因位于5对近端着丝点染色体短臂的次缢痕处,即人类的核仁形成区(NOR)。1975年,Goodpasture和Howell等应用银氨法特异地染色核仁形成区,证实银染的位置是染色体上核糖体基因(rDNA)的位置。此后进一步证明银染物质不是rDNA,也不是rRNA,而可能是核仁     

几种作物染色体的Giemsa N一带

近年来，在高等植物染色体的研究中也开 始应用Giemsa N一带染色技术^[4,5,7,9]。所获得 的结果并不一致，有的学者证明N一带染色技术 对NOR（核仁组织区）有专一性^[4,7]，有的学 者则证明N一带染色技术与NOR并不存在有 相关联系^[5,7].     

L615小鼠中期染色体的银染研究

对人和动物细胞的中期染色体的核仁形成 区（NOR,）用硝酸银试剂进行特异性染色（下 称银染技术）,已由Denton^[4]和Goodpasture^[5]等 人证明,被银染的物质是一种酸性蛋白质成分。 银染能够显示核糖体基因18S和28S在染色体 上的位置以及在细胞周期中的活动^[7]。染色体 银染技术的出现,为细胞学研究提供了新的手 段,其应用范围已经扩及到人和动物的体细胞、 生殖细胞以及培养细胞等各个方面。     

应用微波辐射促进组织块浸银染色

目的：探索微波辐射对组织块浸银染色各步骤的作用及微波在其中的应用方法。方法：在组织块浸银染色过程中,对组织块的固定,浸银,还原等步骤进行不同强度的微波辐射处理。结果：微波辐射明显促进了浸银,还原作用,应用适宜强度的微波辐射染色效果比常规染色有更多的优点。结论：恰当地应用微波辐射缩短组织块浸银染色时程,切实可行。     

人14p＋标记染色体的分子细胞遗传学研究

一例23岁女性患者因近五、六年来出现胡须、四肢多毛及偶有月经不规则而就诊。细胞遗传学检查发现一个短臂明显增大的亚中着丝粒的14号标记染色体14p ·p 区域GTG显带呈浅染,C-带暗染,都呈均匀的染色区。硝酸银染色在p 远侧端显现一个Ag-NOR,其大小与正常近端着丝粒染色体的无明显差异。应用~3H标记的7.3 kb长的rRNA基因探针进行染色体原位杂交,自显影银颗粒沿整个p 区域分布,p 上的银颗粒数是正常近端着丝粒染色体短臂上银颗粒平均数的5倍。这些结果排除了Y或其他染色体参加的重排形成p 的可能性,并表明Ag-NOR的大小或NOR的数目并不一定与rRNA基因的数量成正比。研究Dp 或Gp 类型的染色体变异,对了解人二倍体细胞内rRNA基因表达的调控有重要意义。     

维生素A酸诱导小鼠胚胎性癌细胞分化过程中核仁形成区的变化

采用一步银染技术,发现维生素酸诱导小鼠F₉, F_9-1 胚胎性癌细胞分化过程中,核仁形成区的数目有变化。F、细胞Ag-NORs数目的增多发生在72-96小时;而细胞则发生在96小时。设计的撤药试验结果证明,分裂中期银染NOR的变化,反映的是前一个间期NOR的活性。     

黑麦染色体的银染研究

在对黑麦染色体银染过程的盐酸解离条件进行探索的同时,对黑麦染色体的银染正反应区进行了研究,首次发现经短时间空气干燥(4-24h)的黑麦染色体制片,随着盐酸解离强度的递增,分别出现了核仁组织区(NOR)、NOR和端粒以及NOR和着丝点的银染正反应,就此现象讨论了端粒和着丝点的银染机理。     

黑麦染色体的银染研究

在对黑麦染色体银染过程的盐酸解离条件进行探索的同时,对黑麦染色体的银染正反应区进行了研究,首次发现经短时间空气干燥（4～24 h）的黑麦染色体制片,随着盐酸解离强度的递增,分别出现了核仁组织区(NOR)、NOR和端粒以及NOR和着丝点的银染正反应,就此现象讨论了端粒和着丝点的银染机理。     

正常人体细胞染色体银染核仁形成区的研究

原位分子杂交证明,各种哺乳动物的119 s- 28 S核搪体RNA基因（rDNA）位于特定的染色体的核仁形成区（NOR),最近,Gootlpasture 等应用银胺法特异地染色核仁形成区,证实银染的位置是染色体＿L核塘体RNA基因的位置。 此后,进一步证明银染物质不是rDNA,亦不是 rRNA,可能是核仁形成区特异的蛋白质,即和 r1:NA转录相联系的酸性蛋白。人类核糖体 RNA基因位于5对近端着丝点染色体短臂的 次猛痕处,即人类的核仁形成区。在正常人中, 常不是所有核仁形成区皆彼银染,其范围大约 4-10。应用银染法可以觉察正常人体核塘体 RNA基因的活动。     

快速简便的NOR染色法

自Good pasture等(1975)",首先用Ag-As银染 技术对9种动物中期染色体的核仁组织者(NOR)进 行了特异性染色以来,Ag染色已日趋广泛。M川er 等‘,,“。’认为,A g- As选择地染中期及前间期染色体 上转录活化的RNA 基因（18S和28S rRNA基因） rDNA的位点。这些结果与Hsu等t37用DNA/RNA 原位杂交定位核糖体的作用子所得的结果是一致的。 但Henderson等‘3,+,及Howell等【‘,则认为A g- As 是染核仁组织者上和rRNA转录相联系的特异酸性蛋 白质,而不是染rDNA, NOR研究正在不断地深人,方 祛也在不断地改进。同时,由于它可得到燕似于原位 杂交的结果,所以Ag染色法现已成为表征一个基因 功能的一种准确方法。在动、植物细胞遗传学、临床及 肿瘤细胞遗传学、体细胞遗传学以及在进化与发育等 研究中。都有着十分重要的意义。但目前所用的染色 方法耗时较长,一般需3-24小时。同时,由于氨银及 甲醛显影液不稳定,使显影时间不易标准化,故需对 Ag-NOR的显影进行显微镜检。因此操作较繁杂。找 们在Goodpasture"’和Howell等‘,’的实验基础上, 摸索了NOR快速、简便（只用1.5-2分钟,一步操作） 的染色法,得到较理想的结果。这在国内尚未见报道, 现简介如下。     

微波辐射在六胺银染色显示霉菌的应用

微波辐射在六胺银染色显示霉菌的应用苏红,熊正文,谷化平（中国人民解放军第二五一医院病理科,张家口０７５０００）由于广谱抗菌素和免疫制剂的大量应用,霉菌感染作为一种并发症,明显增长;霉菌染色在鉴别诊断中越来越受到重视。传统的六胺银染色存在着染色时间长,...     

人类双生子的银染核仁形成区的研究

近二十年来,人们为了探讨遗传与环境在 产生表型中的相互作用,已在解剖、生理、生化、 心理、行为及病理状态等各方面对人类双生子 进行了详尽的研究。1975年Goodpasture等⁵⁾ 应用银染技术使近端着丝粒染色体的副缴痕, 即人类核仁形成区（NOR）特异染色,并证卖 银染的位置是：RNA基因的位置。为了进一 步了解银染核仁形成区（Ag-NOR）和银染近 端着丝粒染色体联合（Ag-AA）的遗传特征, 我们用银染技术进行了双生子的Ag-NOR和 Ag-AA的研究。     

对rDNA转录活性的图象分析

用低浓度的放线菌素D(AMD)处理人的外周血淋巴细胞,可以导致细胞周期各阶段核仁形成区(NOR)的银可染性显著减少,表明了放线菌素D对rDNA的转录活性具有明显的抑制作用。本实验采用IBAS图象分析系统,对经不同浓度的放线菌素D处理过的外周血淋巴细胞进行形态学测量和计算机统计分析,其结果阐述了细胞中NOR的银可染性(即rDNA的转录活性指标)与AMD浓度梯度的相关性,并以此建立了相应的回归方程。本文结果表明,间期的银染核仁面积是检测rDNA转录活性较为敏感的指标。     

稳定转染NOR1抑制5-8F细胞片状伪足形成和Wnt信号通路

细胞骨架是真核细胞中的蛋白纤维网络结构,不仅与保持细胞形态结构有关,而且影响细胞黏附和细胞运动．NOR1是从鼻咽癌中克隆得到的新基因,在鼻咽癌组织和细胞系中表达下调．本研究建立了NOR1稳定表达的鼻咽癌5-8F细胞系．过表达NOR1引起高转移性鼻咽癌5-8F细胞形态改变,抑制片状伪足形成、细胞表面积缩小、细胞聚集性增强．扫描电镜检测发现,NOR1抑制了5-8F细胞膜微绒毛的数量,引起细胞膜表面改变．细胞骨架染色发现,NOR1过表达导致5-8F细胞actin骨架连续性破坏,应力纤维增加．Realtime RT-PCR检测发现,NOR1引起5-8F细胞Wnt/β-catenin信号通路分子Wnt5A受体FZD5、FZD7表达下调,抑制了β-catenin蛋白入核．提示NOR1抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,破坏细胞骨架连续性,抑制细胞膜微绒毛与伪足形成．     

豚鼠小肠EC细胞的免疫细胞化学和银染法的比较研究

本实验利用同一切片标本,在光镜水平上,对豚鼠小肠ＥＣ细胞进行了免疫细胞化学和不同银染法的比较研究。实验结果显示,全部Ｍａｓｓｏｎ－Ｆｏｎｔａｎａ亲银染色阳性细胞均呈ＰＡＰ染色阳性;另一方面,小部分（１５％）Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ嗜银染色阳性细胞却表现为亲银染色和ＰＡＰ染色双阴性。以上结果表明,在显示ＥＣ细胞上,亲银染色具有很高的特异性,因此仍不失为一种经济和实用的方法;嗜银染色显示ＥＣ细胞,尽管其敏感性稍高于亲银染色法,但不具有免疫细胞化学与亲银染色技术那样明显的特异性。     

AgNORs染色在病原菌检测中的特殊应用

ＡｇＮＯＲｓ染色在病原菌检测中的特殊应用胥维勇,杨红,李科,杨群（四川省人民医院病理科．成都６１００７２）核仁组成区嗜银蛋白ＡｇＮＯＲｓ染色法是近年来广泛采用的银浸润染色技术,它在判断细胞增殖状态,区别良恶性肿瘤研究时有一定意义［１］。我们应用ＡｇＮ...     

网状纤维染色技术改进

目的探讨改进网状纤维染色氨银液配制方法与改进染色方法的可行性。方法改进网状纤维染色中氨银液的配制方法和染色方法,与传统染色方法比较其染色效果与脱片率。结果改进网状纤维染色方法切片背景清洁度、网状纤维清晰度、网状纤维与胶原纤维对比度3项指标的得分均显著高于传统方法;改进网状纤维染色方法切片脱片率低于传统方法。结论改进网状纤维染色氨银液配制方法、改进网状纤维染色方法,可提高氨银液配制的成功率,延长氨银液有效期,提高网状纤维的染色质量,减少网状纤维染色的脱片率。