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Epstein—Barr病毒核抗原Ⅱ(EBNA2)重组质粒pSG5—EBNA2—Hyg的构建及… 总被引:1,自引:0,他引:1
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基于EBNA1和oriP的载体在基因治疗中的应用研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
非病毒载体用于基因治疗的主要问题是导入靶细胞的效率较低,目的基因表达水平低,疗效持续时间也较短。EBNA1和oriP元件使引入该元件的质粒在真核细胞内保持为游离体、转运入核、转录增强。质粒携带的目的基因能够获得较高的转染效率,高水平、持续的表达。基于EBNA1/oriP的质粒在肿瘤、单基因缺陷先天性疾病、TNF相关的炎性疾病的基因治疗中显示了良好的应用前景。EBNA1/oriP元件用于构建人工染色体,携带目的基因的调控序列,可望实现可调控的基因治疗。 相似文献
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分析EB病毒核抗原1-IgA抗体(EBNA1-IgA)的不同状态及变化趋势,并探讨人群的鼻咽癌发病风险。检测中山市小榄镇2009~2010年入组的16 695位30~59岁参加鼻咽癌筛查人群血清,按首次筛查和随访中EBNA1/IgA抗体状态将筛查人群进行分组,对照组为未参加筛查的两个镇区同年龄组人群,利用中山市肿瘤登记系统、死因登记系统随访至2014年12月31日,分析各组人群的鼻咽癌发病风险。与对照组相比,基线抗体阴性人群的发病风险比为0.46(95%CI 0.25~0.86),基线抗体阳性人群的发病风险比为31.1(95%CI 21.0~46.1);复查人群中上升组、持续阳性组的发病风险比分别为82.4(95%CI 36.1~188.2),26.4(95%CI 12.3~52.5),而下降组和波动组中未见病例。EBNA1/IgA基线阳性人群在5年中有很高的发病风险,复查人群中上升组和持续阳性组也有很高的发病风险,下降组和波动组发病风险较低。 相似文献
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目的:优化重组抗体在悬浮无血清培养的HEK293 EBNA1瞬时表达,提高重组抗体表达量。方法:将HEK293 EBNA1细胞适应于无血清悬浮培养,筛选适宜的无血清培养基。使用PEI转染质粒进入细胞,瞬时表达重组抗体;使用Modde软件进行实验设计(DOE),优化转染质粒量、轻重链比例、PEI量等影响瞬时表达的条件。培养上清经亲和纯化,获得目标抗体,用快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)测定抗体活性,用BCA法测定纯化抗体浓度。结果:293SFMII为适宜的HEK293 EBNA1细胞无血清悬浮培养基。对抗体表达影响最大的因素是轻重链比例(P=0.00000),其次为质粒浓度(P=0.00086),最后为PEI(P=0.00257)。优化的转染条件为:质粒用量0.61μg/106细胞,轻重链比例2:1,PEI 2.67μg/106细胞,优化后抗体表达量有显著提高(P=0.007)。结论:通过DOE优化获得了重组抗狂犬病病毒抗体的高水平表达,抗体表达量提高了至少50倍。 相似文献
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本文用EB病毒转化自体淋巴细胞所建立的类淋巴母细胞系(LCL),以及用EB病毒潜伏感染膜蛋白(LMP)基因和核蛋白-2(EBNA2)基因与痘苗病毒重组的重组病毒(Vac-LMP和Vac-EBNA2)感染的自身纤维母细胞,同时作为刺激细胞和靶细胞,以~(51)Cr释放法检测5例血清中EB病毒VCA—IgA抗体阳性者及1例阴性健康者外周血单个核细胞(PBMC)的特异性T细胞杀伤效应。结果表明,用自身LCL激活的EB病毒特异性T细胞杀伤效应高峰出现在第14~28天;参与杀伤性细胞免疫反应的T细胞亚群主要是T3、T8阳性的细胞毒性T细胞,其对靶细胞的识别及杀伤受HLA-I的限制。用重组牛痘病毒感染的纤维母细胞作靶细胞或刺激细胞,有1例供者可接受LMP,另1例可接受EBNA2的刺激,并对相应的靶细胞产生特异性T细胞杀伤反应,表明EB病毒-LMP和EBNA2可能既是EB病毒特异性T细胞的刺激抗原,又是其识别的靶抗原。 相似文献
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Man Wang Shuai Jiang Xiaoying Liu Yefu Wang 《Applied microbiology and biotechnology》2013,97(14):6251-6262
Epstein–Barr virus (EBV) is a ubiquitous human herpesvirus associated with the development of both lymphoid and epithelial tumors. EBNA1 is the only viral protein expressed in all EBV-associated malignancies and plays important roles in EBV latency. Thus, EBNA1 is thought to be a promising antigen for immunotherapy of all EBV-associated malignancies. This study was undertaken to produce recombinant EBNA1 protein in Pichia pastoris and evaluate its immunogenicity. The truncated EBNA1 (E1ΔGA, codons 390–641) was expressed as a secretory protein with an N-terminal histidine tag in the methylotrophic yeast P. pastoris and purified by Ni-NTA affinity chromatography. The purified proteins were then used as antigens to immunize BALB/c mice for production of polyclonal antibodies. Western blot analysis showed that the polyclonal antibodies specifically recognized the EBNA1 protein in B95-8 cell lysates. The recombinant E1ΔGA also induced strong lymphoproliferative and Th1 cytokine responses in mice. Furthermore, mice immunized with E1ΔGA developed CD4+ and CD8+ T cell responses. These findings showed that the yeast-expressed E1ΔGA retained good immunogenicity and might be a promising vaccine candidate against EBV-associated malignancies. 相似文献
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本文通过对小分子免疲调节剂L—2—(3—羟基—4—羟甲基苯基)—甘氨酸(英文名:Forphenicinol)前体物DL—2—(3—羟基—4—羟甲基苯基)—N—乙酰基甘氨酸的合成方法研究,探索了终产物Forphenicinol 的合成路线及实验方法、并通过对各步产物之红外光谱分析,确证各步产物之主要特征吸收峰,为今后的合成工作打下良好之基础、 相似文献
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用转染EBV DNA Bam HI K片段后稳定表达EBNA-1的K_4细胞作为靶细胞,检测50份鼻咽癌病人和38份健康对照者血清中的IgG/EBNA-1抗体;阳性率分别为100%和92%。前者的平均几何滴度为89.4,后者为18.3,前者约为后者的5倍。同一批被检血清经SPA吸收去除IgG竞争性抑制后,鼻咽癌病人的IgA/EBNA-1抗体阳性率达78%(GMT 20.9),健康人的IgA/EBNA-1抗体阳性率仅5.3%,效价亦很低(GMT 5.2)。表明IgA/EBNA-1抗体对鼻咽癌是比较特异的,可考虑作为鼻咽癌血清学诊断的指标之一。 相似文献
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用萄葡球菌菌体A蛋白(SPA)预先处理被检血清,以去除抗体IgG部份的竞争性结合,提高了间接免疫荧光法检查鼻咽癌病人血清中EB病毒膜抗原IgA(IgA/MA)抗体的敏感性及特异性,检查48例鼻咽癌病人血清IgA/MA抗体,阳性率为100%,血清几何平均滴度为141;40例其它恶性肿瘤病人和46例正常人都检不出IgA/MA抗体,免疫荧光法测得IgA/MA抗体阴性的6例鼻咽癌病人血清,SPA吸收后呈阳性反应,此改进方法可用以追踪观察鼻咽癌病的病程及预后。 相似文献
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近年来,常用未经丙酮固定的、由丁酸和巴豆油激活的B95-8细胞或P3HR-1细胞为靶细胞,检测人血清中EB病毒IgA/MA抗体以早期诊断鼻咽癌,效果良好。但由于B95-8细胞含有多种EB病毒抗原,不能用丙酮固定,需多次离心沉淀,在浮悬状态下检测,技术比较复杂。 相似文献
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将pUCB质粒表达的P83蛋白应用于免疫印迹法(IB)和ELISA中,检测了85例鼻咽癌(NPC)患者和100例健康人血清,同时与免疫酶法(IE)作比较。结果表明,免疫印迹法对NPC患者血清阳性检出率为94%;ELISA法阳性检出率为88%;而IE法阳性率为64%。三种方法检测健康人血清出现低水平IgA/EA抗体的阳性率分别为4%、3%及2%。用IE法检测IgA/EA抗体为阴性的NPC患者血清,用IB法检测的阳性率达87%,ELISA法阳性检出率为77%。IB法与ELISA法之间具有较好的正相关(r=0.67,P<0.01)。 相似文献