血小板生长因子(PDGF-BB)刺激体外培养兔肺动脉平滑肌细胞DNA和蛋白质合成

应用细胞培养、３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入方法,观察血小板生长因子ＢＢ（Ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＢＢ）对体外培养兔肺动脉平滑肌细胞ＤＮＡ和蛋白质合成的影响。结果表明：（１）当ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度为１０ｎｇ／ｍｌ时,３Ｈ－ＴｄＲ掺入值已较对照组显著增高（６２６２．５±４１２．９ｖｓ８３３．５±１２４．０,Ｐ＜０．０５）;当ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度为２０ｎｇ／ｍｌ时,３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入值亦较对照线显著增高（１０２１２．８±６３８．３ｖｓ７３４０．３±１１９７．９,Ｐ＜０．０５）。（２）ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度在５－２５ｎｇ／ｍｌ范围内,３Ｈ－ＴｄＲ,３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入值与剂量直线相关（ｒＤＮＡ＝０．９７,ｒｐｒｏｔ＝０．９０Ｐ＜０．０５）。说明ＰＤＧＦ－ＢＢ刺激体外培养兔肺动脉平滑肌细胞ＤＮＡ和蛋白质合成。     

低氧对肺动脉内皮细胞PDGF—B链释放及平滑肌细胞生长的影响

应用蛋白ｄｏｔｂｌｏｔ技术检测了低氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）和常氧内皮细胞条件培养液（ＮＥＣＣＭ）内ＰＤＧＦ相对含量,并利用［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法和流式细胞术观察了ＨＥＣＣＭ和ＮＥＣＣＭ及加入特异ＰＤＧＦ抗体对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）生长的影响。结果表明,ＨＥＣＣＭ中的ＰＤＧＦ含量明显高于ＮＥＣＣＭ;ＨＥＣＣＭ能明显增强ＰＡＳＭＣ内ＤＮＡ合成,促进ＰＡＳＭＣ从Ｇｏ／Ｇ１期进入Ｓ期;当预先加入ＰＤＧＦ－Ｂ链抗体时,则会明显地抑制ＨＥＣＣＭ对ＰＡＳＭＣ的ＤＮＡ合成,阻止ＰＡＳＭＣ从Ｇｏ／Ｇ１期进入Ｓ期。结果提示,低氧时ＰＡＳＭＣ增殖与肺动脉内皮细胞分泌释放ＰＤＧＦ增加有关     

血小板生长因子（PDGF—BB）刺激体外培养兔肺动脉平滑肌细？…

应用细胞培养、＾３Ｈ－ＴｄＲ和＾３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入方法,观察血小板生长因子ＢＢ对体外培养兔肺动脉平滑肌细胞ＤＮＡ和蛋白质合成的影响。结果表明：（１）当ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度为１０ｎｇ／ｍｌ时,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值已较对照组显著提高（６２６２．５±４１２．９ｖｓ８３３．５±１２４．０,Ｐ〈０．０５）;当ＰＤＧＦ－ＢＢ浓度为２０ｎｇ／ｍｌ时,＾３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入值亦较对照线显著增高（１０２１２     

低氧对肺动脉平滑肌细胞PDGF mRNA表达的影响

应用原位杂交技术,研究了低氧对单层培养的猪肺动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）－Ａ和－Ｂ链ｍＲＮＡ表达的影响。用全自动图像分析仪检测两组细胞ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链杂交产物的平均光密度值。结果表明：常氧条件下无血清培养的肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链ｍＲＮＡ表达阳性颗粒稀少,低氧条件下血清培养的肺的动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ表达阳性颗粒明显增多,较密集地分布于整个细胞内,为常     

缺氧内皮细胞条件培养液对肺动脉平滑肌细胞b-FGF表达的影响

应用细胞培养、免疫细胞化学和图像分析方法,探讨了缺氧猪肺动脉内皮细胞条件培养液对肺动脉平滑肌细胞碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）表达的影响。本研究表明,肺动脉内皮细胞培养汇合前和汇合后均可表达ｂＦＧＦ,在缺氧时其表达增多。缺氧猪肺动脉内皮细胞条件培养液可刺激猪肺动脉平滑肌细胞表达ｂＦＧＦ,将条件培养液加热１００℃处理或加入ｂＦＧＦ抗体后,可使猪肺动脉平滑肌细胞表达ｂＦＧＦ明显减少。这提示缺氧可刺激猪肺动脉内皮细胞表达ｂＦＧＦ,缺氧猪肺动脉内皮细胞条件培养液通过ｂＦＧＦ使肺动脉平滑肌细胞表达ｂＦＧＦ,因此推测缺氧条件下肺动脉内皮细胞ｂＦＧＦ的旁分泌作用可能在肺动脉平滑肌细胞增生中起重要作用,这一过程在缺氧性肺动脉高压时肺动脉结构重建的发生机制中具有重要意义。     

表皮生长因子对离体大鼠肺动脉及肺动脉平滑肌细胞作用的研究

本研究着重探讨表皮生长因子（ＥＧＦ）对大鼠肺动脉的收缩作用及对肺动脉平滑肌细胞分裂增殖的影响。浓度为１×１０－９－１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ的ＥＧＦ可引起大鼠肺动脉剂量依赖性收缩（ｒ＝０．９６８,Ｐ＜０,００１）,其Ｅｍａｘ为１００．６ｍｇ,ＥＣ５０为１１．９６ｎｍｏｌ／Ｌ。在同时存在０．５％胎牛血清（ＦＣＳ）时,ＥＧＦ能促进平滑肌细胞的３Ｈ－ＴｄＲ参入率,该作用与剂量呈正相关（ｒ＝０．８２３,Ｐ＜０．０５）,其ＥＣ５０为６．５×１Ｏ－１２ｍｏｌ／Ｌ。１×１０－９ｍｏｌ／Ｌ的ＥＧＦ＋０．５％ＦＣＳ能产生与１０％ＦＣＳ相当的促细胞分裂增殖能力（在培养的第１,３,５,７天,二者促分裂增殖能力相差不明显,Ｐ均＞０．０５,第９天时,前者大于后者,Ｐ＜０．０５）。１×１０－９ｍｏｌ／ＬＥＧＦ单独存在时对平滑肌细胞未显示出明显的致分裂活性。上述作用提示ＥＣＦ在某些肺血管病变如缺氧性肺动脉高压中可能有一定意义。     

缺氧促进热休克蛋白70在肺动脉平滑肌细胞中的表达

缺氧性肺动脉高压中肺动脉结构重组,中膜平滑肌细胞增殖并迁移,但机制不明。本研究观察缺氧对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）细胞周期、ＤＮＡ合成及细胞增殖的影响,并通过观察缺氧对ＰＡＳＭＣ热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）表达的影响,初步探讨缺氧的作用是如何介导的。结果表明缺氧可直接或协同内皮质－１促进ＰＡＳＭＣ ＤＮＡ合成及细胞增殖,并可增加ＨＳＰ７０在ＰＡＳＭＣ中的表达。     

RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌增殖细胞核抗原表达的影响

研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂ＲＧ５０８６４对ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌增殖细胞核抗原表达的影响。应用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,采用流式细胞仪分析ＲＧ５０８６４对ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌增殖细胞核抗原及ＤＮＡ含量的变化,并用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析技术观察了ＲＧ５０８６４对ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞酪氨酸磷酸化的影响。结果表明：与对照组相比,ＲＧ５０８６４处理组可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌增殖细胞核抗原的表达,发现细胞周期Ｓ期受抑制。Ｗｅｓｔ－ｅｒｎＢｌｏｔ分析显示ＲＧ５０８６４可明显地抑制ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞酪氨酸磷酸化程度。提示ＲＧ５０８６４可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导肺动脉平滑肌增殖细胞核抗原的表达,其机制可能是抑制酪氨酸蛋白激酶活性     

成纤维细胞生长因子9抑制PDGF-BB诱导的肺血管平滑肌细胞表型转化

该研究探讨了成纤维细胞生长因子9(fibroblast growth factor 9,FGF9)在肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)及肺血管平滑肌细胞表型转化中的作用.建立野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导的大鼠肺动脉高压模型,Western blot...     

慢性肺心病肺动脉平滑肌细胞的胶原合成：体内及体外观察

肺动脉构形重建（ｓｔｒｕｃｔｒｕｒａｌｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ）是慢性肺心病的重要血管病变,但其发生机制至今未完全明了。病变以血管中膜平滑肌细胞肥大、增生和细胞外基质（包括纤维性与非纤维性成分）增多导致的血管壁增厚、血管腔狭窄为特征。本文用天狼星红－偏振光显微镜观察,真彩色全自动图像分析法,测量１０例慢性肺心病尸检肺小动脉中膜厚度及中膜内Ⅰ、Ⅲ两型胶原的含量和所占的百分比。用３Ｈ－胸腺嘧院核苷和３Ｈ－脯氨酸掺入法,观察缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）对培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣＳ）ＤＮＡ及胶原合成的影响。结果：（１）肺心病组４３７支肌型肺动脉平均中膜厚占血管直径的百分值高于对照组５±１．０８％;（２）肺心病组的Ⅰ型和Ⅲ型胶原面积分别占中膜面积的５４．６２％和５１９％,而对照组两型胶原占中膜面积小于２％。（３）ＨＥＣＣＭ组平滑肌细胞的３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－脯氨酸掺入量（ｃｐｍ值）,均明显高于常氧对照组（ＮＥＣＣＭ）,两组相比,有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。（４）细胞周期分析,ＨＥＣＣＭ组平滑肌细胞的Ｇ０／Ｇ１期细胞数百分值比ＮＥＣＣＭ组少２８％,Ｇ２＋Ｍ期细胞百分值则比ＮＥＣＣＭ组高３０％。可以认为,缺     

大鼠肺动脉平滑肌培养细胞内Ca~(2+)反应的多样性

用Ｃａ２＋荧光色素Ｆｌｏｕ－３／ＡＭ负荷原代培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞,在共聚焦激光显微镜下观察细胞内Ｃａ２＋对各种缩血管物质反应的非均一性。实验结果提示：各种Ｃａ２＋通道的反应与细胞培养时间相关。８０％以上的Ｃａ２＋贮库具有ＣＩＣＲＣａ２＋通道,在肺血管管平滑肌细胞可能存在一种只具有ＣＩＣＲ通道的Ｃａ２＋贮库,ＣＩＣＲ的Ｃａ２＋释放作用强于ＩＣＲＣａ２＋通道     

人脐静脉血管平滑肌促内皮细胞组织因子表达的体外实验研究

目的研究血管平滑肌细胞对血管内皮细胞组织因子表达的影响并探讨其临床意义.方法用贴块法培养人脐静脉平滑肌细胞;酶消化法培养人脐静脉内皮细胞;用培养平滑肌细胞条件培养液(SMC-CM)刺激培养的内皮细胞,一步凝固法检测内皮细胞组织因子的活性;Northern blot检测内皮细胞组织因子的mRNA表达;并用酶联免疫吸附试验检测SMC-CM中IL-1α、IL-1β、TNF-α和VEGF的含量.结果 SMC-CM使内皮细胞组织因子活性呈剂量依赖性增强,作用6h增至最高,最高增强约38倍;SMC-CM使内皮细胞组织因子mRNA表达显著增强;SMC-CM中的组织因子诱导剂不耐热,且并非IL-1α、IL-1β、TNF-α和VEGF等已知的组织因子诱导剂.结论血管平滑肌细胞能促进血管内皮细胞组织因子的表达,提示体内增生的平滑肌细胞,如动脉再狭窄新内膜中的平滑肌细胞可能诱导局部血管内皮细胞活化及表达组织因子,在局部血栓形成中起一定作用.     

慢性缺氧的猪肺动脉内皮细胞在急性缺氧时PDGF-B链mRNA的表达

采用原位杂交技术结合图象分析检测常氧(PO2±21.3kPa)及慢性缺氧(P025.3±0.7kPa)培养的猪肺动脉内皮细胞PDGF-BmRNA的表达及其对急性缺氧刺激的反应.结果常氧及慢性缺氧培养的肺动脉内皮细胞(PAEC)在急性缺氧后PDGF-BmRNA表达均增加(P＜0.05),以第4、6代慢性缺氧组升高的幅度更大.结果表明慢性缺氧可增强PAEC在急性缺氧时PDGF-BmRNA的表达,可能促进肺血管改建和肺动脉高压的发展.     

角质形成细胞生长因子(KGF)在喉粘膜良性、癌前及恶性病变中的mRNA水平分析

利用原位杂交的方法检测KGFmRNA在正常喉粘膜上皮（N）、慢性非特异性炎症（IF）、不典型增生（DYS）及鳞癌（SCC）中的转录水平,探讨KGF在喉粘膜良性及恶性病变中的分布和可能的作用。结果表明,KGFmRNA不仅在间质中的成纤维细胞中表达,少量的炎细胞及血管内皮细胞中亦表达,而且从N、IF、DYS到SCC、KGFmRNA转录水平逐渐增强;上皮细胞及肿瘤性上皮细胞不表达KGFmRNA,KGFmRNA在分化差的SCC周围间质中表达较分化好的SCC周围间质增多。结论：KGF在上皮与间充质细胞的交互作用中发挥着重要的作用,对维持喉粘膜正常结构、代谢及喉癌的发生发展具有重要意义。