古银杏内生真菌的分离及其抑菌活性

采用组织分离法从古银杏健康组织中分离得到55株内生真菌, 其中28个分离菌株在PDA培养基上不产孢子, 占总分离菌株的50.9%, 其它菌株根据其在PDA培养基上的培养特征, 10株被鉴定为青霉、6株为曲霉、4株为交链孢霉、3株为简梗孢霉, 另外酵母、毛霉、小单头孢霉、镰孢霉各1株。考察内生真菌培养上清对7种受试指示菌的抑制作用, 共筛选得到23株至少对一种指示菌的生长有抑制作用的菌株, 其中11株为不产孢真菌, 占活性菌株的47.83%。对活性最强的一株菌进行形态学和分子生物学鉴定, 将其确定为Xyla     

五味子根内生真菌的分离及其抑菌活性的研究

采用组织块分离方法对五味子根内生真菌进行分离鉴定,并以人参疫病病菌[Phytophthora cactorum(Leb.et Coh.)Schroet.]、人参黑斑病病菌(Alternaria panax Whetz.)为供试病原菌对分离的内生真菌进行了抑菌活性筛选。试验共分离得到74株内生真菌,根据形态特征鉴定出33株,分别隶属于半知菌亚门丛梗孢科的轮枝孢属(Verticillium)、柱隔孢属(Ramularia)和瘤座孢科的镰刀菌属(Fusarium)。通过抑菌试验筛选出5个内生真菌有抑制作用,其中3个内生真菌的发酵产物、乙醇提取液对2种病原菌均有一定的抑菌活性。     

白木香内生真菌的分离及分子鉴定

对采自广东省信宜市的白木香进行了内生真菌分离培养,共获得50个菌株,通过rDNA中内转录间隔区(ITS)序列鉴定其为20个种,其中确定至种名的有7属8种,仅确定至属名的有8种,不能确定种属的有4种,其中A20菌株(Fimetariella rabenhorstii)为国内首次报道。刺盘孢菌(Colletotrichum)共分离到17株,占分离总数的34%,为白木香优势种群;镰刀菌(Fusarium)共分离到11株,是结香部位的优势种群。白木香内生真菌分布部位的专一性不明显,茎中分离的数量及种类最多,叶中最少;5年龄内生真菌的多样性较好,10月龄的多样性较低。     

春兰内生真菌的分离及其抑菌活性的初步研究

采用平板分离法从皖西大别山野生兰花的根、茎、叶中分离内生真菌32株,用琼脂块法对获取的菌株进行抑菌活性筛选,其中有4种兰花内生真菌对供试菌株有抑菌作用,占总分离菌株的12.50%,对抑菌活性较强的一株内生真菌进行形态学鉴定,结果表明它属于无孢类群。     

葛内生真菌抑菌活性菌株的筛选及鉴定

对药用植物葛的112株内生真菌进行抑菌活性的观察,结果显示:J5-2、J100-2、J31-3这3株菌对细菌及植物病原真菌具有较好的抑制作用,其中J100-2对苹果树腐烂病菌(Valsa mali)等5种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,抗菌谱较广。通过形态学特征观察和rRNA基因ITS序列系统发育分析对J100-2进行鉴定,可知J100-2为半知菌门,球壳孢目,球壳孢科,茎点霉属,巨腔茎点霉(Phoma macrostoma)。     

骆驼刺内生真菌的分离、鉴定与抑菌活性初筛

本研究采集干旱沙漠植物骆驼刺(Alhagi sparsifolia Shap.)标本,采用匀浆涂布法分离培养骆驼刺内生真菌,共分离获得9株内生真菌,通过ITS序列测定的方法进行鉴定,其中7株(LTCZ2、LTCY1a、LTCY1b、P9、P10、P11、3P1)为外担菌纲(Exobasidiomycetes),2株(LTCY2、LTCY3)为不整囊菌纲(Eurotiomycetes)曲霉科(Eurotiaceae)曲霉菌属(Aspergillus)。采用菌饼法检测其抑菌活性,P9、P10、P11、LTCY1a、LTCY1b、LTCZ2、LTCY3对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有潜在抑菌活性,LTCY3、P10和LTCY2对粪肠球菌(Enterococcus faecalis)有潜在抑菌活性,其中分离获得的一株曲霉属内生真菌LTCY3对临床常见的致病菌金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌(Escherichia coli)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、粪肠球菌均具有潜在抑菌活性。本研究以期为今后开发利用新的微生物资源提供科学依据。     

黄连内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究CSCD

为研究四川省峨眉地区黄连内生真菌多样性及菌株抑菌活性和机制,发掘黄连内生真菌资源,本研究从川黄连植株分离鉴定14株黄连内生真菌,分属于2纲,5目,7科,11属。根状茎、茎、叶和须根中的内生真菌定殖率分别是27.8%、56.7%、52.5%和39.6%。14株黄连内生真菌对金黄色葡萄球菌均有抑菌效果,Cop S01、Cop L01、Cop FR01的抑菌圈直径超过35 mm,纸片扩散法测得3株内生真菌发酵液对金黄色葡萄球菌均有效,Cop L01抑菌圈直径大于20 mm,抑菌效果最好,其发酵产物最低抑菌浓度(MIC)为10 mg/mL,最低杀菌浓度(MBC)为11 mg/mL。初步探究Cop L01抑菌机制发现该菌株发酵产物破坏金黄色葡萄球菌细胞膜,引起胞内核酸及蛋白外泄,造成金黄色葡萄球菌死亡。本研究表明川黄连内生真菌具有丰富的多样性,部分菌株及其发酵产物对金黄色葡萄球菌均表现出较好的抑菌效果,预示着黄连内生真菌Cop L01具有产生新型抗菌活性物质的潜力,为后续深入开发这一资源宝库提供了新的菌种和思路。     

野生抚育山参内生真菌分离鉴定

采用组织块法对野生抚育山参(Panax ginseng)根中内生真菌进行分离,共分离出16株内生真菌,根据形态鉴定出10株,分别隶属于头孢属(Cephalosporium)、青霉属(Penicillium)、柱孢属(Cylindrocarpon)、轮枝孢属(Verticillium)、单端孢属(Trichothecium)。以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、白色念珠菌(Candida albicans)为指示菌对内生真菌进行抑菌活性筛选,共筛选出2株内生菌,这2株内生菌对金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用。     

无花果内生真菌的分离及其鉴定

从无花果(Ficus carica)的根、茎、叶中分离得到87株内生真菌,经显微形态特征观察鉴定为14个属,其中根部35株涉及8个属,茎部37株涉及10个属,叶部15株涉及3个属。结果表明,无花果的不同部位内生真菌的数量、分布和种群存有差异。     

远志内生真菌分离鉴定及活性筛选

从两个不同生长时期野生远志中分离内生真菌菌株88株,隶属于28个属,研究了各菌株对3种指示菌的拮抗作用。结果表明,远志不同生长时期不同部位的内生真菌数量、分布、种群存在差异,其优势属为Alternaria Nees。茎中内生真菌种类较多。88株内生真菌中有73株菌至少能拮抗1种指示菌,占总菌数的83.0%。4株抗性较强的菌株分别隶属于Trichothecium Link、Cephalosporium Corda、Alternaria Nees、Dactuliophora C.L.等。     

沉香叶提取工艺及其抗氧化活性实验研究

采用单因素分析方法和正交试验法研究沉香叶提取工艺并评价沉香叶的体外抗氧化活性.沉香叶的最佳提取工艺为:以15倍量的60％乙醇为溶剂,超声提取40 min,提取1次.野生沉香叶和栽培沉香叶的氧化时间分别为(11.53±0.08)s和(9.98±0.16)s;超氧阴离子的清除率分别为(36.26±0.96)％和(35.67±1.25)％,总还原力的吸光度分别为0.188±0.008和0.129±0.011.该提取工艺简单、重复性好、提取液抗氧化活性强、工艺稳定、无污染;野生沉香叶和栽培沉香叶均具有较好的体外抗氧化活性.     

1株白木香内生真菌中抗肿瘤活性成分的分离纯化和结构鉴定

采用活性追踪的方法对白木香内生真菌螺旋木霉Trichoderma spiraleA17的抗肿瘤活性代谢产物进行了分离纯化和结构鉴定。通过凝胶柱层析和反相硅胶柱层析,从其发酵液的活性组分中分离到2个无色针晶化合物,质谱和核磁共振的鉴定结果表明化合物1是一个八氢萘衍生物,命名为木霉酸(Trichodermic acid),化合物2是酪醇(Tyrosol)。活性实验显示化合物1对SF-268、MCF-7和NCI-H460 3种肿瘤细胞株都具有显著的增殖抑制活性,而化合物2对这3种肿瘤细胞株只有微弱的增殖抑制活性。     

白木香树干中的黄酮类成分

从白木香[Aquilaria smensis(Lour.)Gilg]树干的乙醇提取物中分离得到5个黄酮类化合物,经波谱分析,分别鉴定为:洋芹素-7,4'-二甲醚(1)、5-羟基-7,3',4'-三甲氧基黄酮(2)、木犀草素-7,4'-二甲醚p)、芫花素(4)和4',5-二羟基-3',7-二甲氧基黄酮(5).以上化合物均为首次从该种植物树干中分离得到.     

白木香叶解剖结构的研究

用石蜡切片法制片,光学显微镜观察,研究白木香叶的解剖结构。结果表明,白木香叶为典型的异面叶,但同时还表现出许多旱生形态。表皮由一层排列紧密形状不规则的表皮细胞组成,细胞外壁角质膜较厚。上表皮角质膜一般较下表皮角质膜厚1μm,下表皮上零星分布着单细胞表皮毛。气孔仅分布在下表皮上,微下陷,气孔类型为无规则型。叶肉组织发达,其间分布着较多的长方晶体,其细胞长轴与表皮垂直。栅栏组织由1—2层排列整齐的圆柱形细胞组成。栅栏组织的外层细胞转化为异细胞,海绵组织内具有一层由异细胞组成的下皮层;横切面上栅栏组织厚度与海绵组织厚度之比为1：3。主脉发达,有异细胞组成的维管束鞘,具双生韧皮部。叶内具有发达的木质部外纤维。这些特征与旱生环境相适应。     

白木香遗传多样性研究

用ISSR分子标记技术对白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg)的遗传多样性进行分析.结果表明,白木香物种水平的遗传多样性较高,而居群水平的遗传多样性相对较低,其中广东茂名居群的遗传多样性最高.白木香居群间存在较大的遗传分化,遗传分化系数G_(ST)=0.4425,表明居群内遗传分化大于居群间的分化.UPGMA聚类分析表明白木香分化为两个谱系,其中谱系Ⅰ由广东、福建、海南的5居群组成,谱系Ⅱ由广西、云南的3个居群组成.居群间的基因交流受到阻碍(Nm=0.6633<1),阻碍主要产生于两个谱系间,而谱系内部的居群间在较近的历史时期基因交流频繁(Nm分别为1.4382和1.2333),谱系分化的原因主要是地理因素,两谱系交界处有云开山脉等形成的天然屏障,阻碍物种的扩展和基因交流.     

野葛内生真菌的分离、鉴定及体外细胞毒活性

目的:药用植物内生真菌是一类重要的微生物资源,其代谢产物有着广泛的生物学活性。该研究拟从野葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)中分离有细胞毒活性的内生真菌。方法:组织块改良法分离内生真菌;细胞毒活性测定采用Alamar blue法;结合形态学和分子生物学方法进行菌种鉴定。结果:获得的34株内生真菌中菌株KLBMP f0027对HepG2、HO-8910、NCI-H460、SGC-7901等细胞株均有显著活性,ID50分别为437.4、460.0、542.5、771.2。而且活性产物相对稳定,对温度、pH变化及蛋白酶不敏感。代谢过程研究显示菌株KLBMP f0027的活性产物合成与细胞生长属于部分耦联关系类型。形态学和ITS-rDNA序列分析鉴定菌株为Aspergillus ostianus strain KLBMP f0027。结论:野葛内生真菌A.ostianus strain KLBMP f0027可作为细胞毒活性候选菌株进行深入研究。     

白木香内生真菌抗肿瘤抗菌活性的筛选研究

白本香[Aquilariasinensis（Lour．）Gilg]是我国特有的珍稀濒危药用植物。对已分离得到的白木香内生真菌的发酵液提取物的抗肿瘤抗菌活性进行了筛选。结果表明,对肿瘤细胞SF-268增殖的抑制率在90％以上的菌株有6株,占总菌株数的31．6％。其中有16株对金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌活性,占总菌株教的84．2％,有9株表现较强的抑菌活性。另外有1株时白色念珠菌表现较强的抑菌活性;有2株对黑曲霉表现一定的抑菌活性。所有菌株对大肠埃希菌都没有表现明显的抑菌活性。     

江蓠内生真菌NSS1蛋白活性的初步研究

为促进江蓠内生真菌NSS1抗菌蛋白的应用研究,利用硫酸铵沉淀法制备抗菌蛋白,最佳硫酸铵饱和度为65%。采用滤纸片法检测其对细菌指示菌的抑菌活性,抗菌粗蛋白均能抑制五种细菌指示菌的生长,当浓度达到750 μg/mL时,抑制效果最好。采用邻苯三酚自氧化法测定蛋白对超氧阴离子自由基(O-2)的清除作用,MTT法检测蛋白对肿瘤细胞的影响。抗菌蛋白在100℃以下,pH中性时抑菌活性稳定,对紫外线照射不敏感,丙三醇、甲醇和胰蛋白酶对抗菌蛋白的抑菌活性没有影响。不同浓度的蛋白液对超氧阴离子均有清除效果。当蛋白浓度达到360 μg/mL时对肿瘤细胞的抑瘤作用最强。上述结果显示抗菌蛋白具有较强的抑菌活性、抗氧化活性和抗肿瘤活性。