伦敦白胶和茶：一种既快又安全的用于透射电子显微镜的细菌样品制备方法

【目的】检测乌龙茶提取物是否可作为电子染色剂取代醋酸双氧铀用于细菌细胞染色,使其能在透射电子显微镜下进行观察。【方法】利用伦敦白胶对细菌样品(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌)进行胶块的制备,再在复染铅与不复染铅这两种情况下对超薄切片样品进行3种不同染色剂的电子染色,之后在透射电子显微镜下观察比较其不同之处。这3种不同的染色剂分别是醋酸双氧铀、0.05%乌龙茶提取物以及0.1%乌龙茶提取物。首先将带有超薄切片样品的铜网悬浮于不同的待比较染液中10?15 min,若需进一步用柠檬酸铅复染,则将经3次蒸馏水冲洗过后的铜网再次悬浮于柠檬酸铅染液中8?10 min。【结果】复染铅的情况下,在透射电子显微镜下无论是大肠杆菌还是金黄色葡萄球菌,利用3种电子染色剂进行染色的结果均非常相似。【结论】实验结果表明,在观察细菌结构中,乌龙茶提取物可以替代醋酸双氧铀进行透射电子显微镜样品的电子染色。     

几种染色剂对桔小实蝇产卵孔的染色效果

为寻找水果上桔小实蝇产卵情况的快速检测方法,本文测定了甲基蓝、龙胆紫、品红、曙红、藏红和刚果红等6种染色剂对水果上桔小实蝇Bactrocera dorsalis（Hendel）产卵孔的染色效果。结果表明染色剂对可疑水果进行染色,若有产卵孔,产卵孔可迅速被染色,染色率最高可达100％。筛选出甲基蓝、藏红和刚果红作为芒果、番石榴和夏橙的最适染色剂,各种染色剂在浓度为0．5％时染色效果较佳,同时对持续冷藏保存后的水果上的产卵孔仍然具有较高的染色率。     

链球菌细胞壁和核物质的透射电镜观察

磷钨酸悬滴法负染色的链球菌用透射电镜观察 ,可形象直观地看到细菌的细胞壁和呈环带状的核物质     

浅析高中生物学教材中有关染色剂的几个问题

高中生物学教材中有多个章节涉及到染色剂的使用,根据染料中助色基团电离后所带电荷的正负,将染色剂分为碱性或酸性染色剂.在对生物活体染色时使用的染色剂称活体染色剂,它对活的组织细胞无毒或毒性很小.苏丹红是一种人造染色荆,有一定的致癌作用,主要包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4种类型.亚甲基蓝又可称美蓝,它既是一种染料又是一种氧化还原指示剂.     

介绍一种核和染色体的优良染色剂

苏木精,洋红,地衣红是细胞核和染色体的经典染色剂,至今仍广泛应用。但这些染料都各自存在一些缺点,如苏木精虽可适用于各种动植物材料的染色,但染色程序略繁而操作的技术要求高。后两种染色剂则往往对一些材料染色较佳,而对另一些材料则染色困难或不清晰,有较大的局限性。尤其是洋红和地衣红,商品质量很不稳定,甚至同一厂家不同批号的产品,质量也有显著差别。而对我国广大的科技工作者来说,前三种染料均依赖进口,不仅国家每年需花费大量外汇,而且一般中学或基层单位很难获得这些染料。近年,一位加籍华人学者对以往的石碳酸品红染色剂加以改良,用于细胞杂交中核的染色,效果很好。我们近两年来,选用该染色剂于大量植物染色体的研究工作中,获得了极为优良的效果,它具有以下的主要优点:     

一种新的C群脑膜炎奈瑟菌荚膜染色方法

目的以C群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,简称C群脑膜炎球菌)为研究对象,探索一种新的细菌荚膜染色方法。方法制备C群脑膜炎球菌悬液,分别以Anthony法和新的荚膜染色法进行染色,新的荚膜染色法首先使荚膜与相应的抗血清进行免疫反应,生成易被染色剂染色的物质,再进行染色制片。光学显微镜下观察,对荚膜染色效果进行评价。结果 Anthony法染色后,仅菌体着色,为深紫色;荚膜透明不着色,表现为一圈白色的光环;荚膜与背景呈一定色差,但不明显;荚膜附着于细菌表面,边界不清晰,无法准确判断荚膜厚度。新的荚膜染色法染色后,菌体被染成深紫色,荚膜呈蓝绿色,与背景的色差明显;荚膜形状完整,均匀地附着于菌体表面,边界清晰,能够准确判断荚膜厚度。结论新的荚膜染色法染色效果好、操作简单、易于掌握,可用于C群脑膜炎球菌荚膜的染色。     

血源乙肝疫苗的电镜制样方法

用作样品支持物喷碳的铜网,磷钨酸染色制备血源乙肝疫苗电镜检测样品。４９３批血源乙肝疫苗的镜检结果显示：经溴化钾和蔗糖离心后,原料血浆中的Ｄａｎｅ颗粒和管形颗粒已去除,只观察到２２－２４纳米的ＨＢｓＡｇ球形颗粒。     

应用负染色技术电镜观察快速检测植物病毒粒子的研究

应用负染色技术电镜观察,对感染病毒的叶片,进行简便、快速的检测,对供试的几种病毒样本,均获得较为理想的效果。初步认为,此法采用了磷钨酸负染,不但适于线状和杆状病毒粒体的观察,亦对一些球状颗粒的植物病毒有效。采用本文所述的负染色技术,对于某些植物病毒进行快速鉴定和判断植株叶内有无病毒等,其效应还是较好的。     

活性玫红染料对组织切片染色的观察

[目的]找到苏木精和伊红以外其它染色效果良好的组织切片染色剂。[方法]应用27种直接服装染料对小鼠肝脏组织切片进行染色效果观察。发现其中的活性玫红染料染色能够清晰显示中央静脉和肝细胞核等结构。再用活性玫红染料对小鼠心脏、肾脏、睾丸和肺组织切片进行染色效果观察,同时用伊红进行染色对比观察。[结果]活性玫红染料用蒸馏水溶解后即可使用,配制简单,在5 min之内完成。对心脏、肾脏、睾丸和肺组织切片染色后,肾小囊腔、生精细胞等结构清晰可辨,与HE染色结果类似。心肌横纹也可辨认。活性玫红处理的肝脏、肾脏和睾丸组织切片染色清晰度,高于伊红的染色效果。[结论]找到活性玫红染料这种染色效果良好的红色组织切片染色剂,其制备简单,来源丰富。     

一种光学显微镜下观察原生质体的染色方法

Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔｕｍ菌液经溶菌酶处理后分别与４种微生物染色液混合,在光学显微镜下比较观察原生质体形态的效果。结果表明;染色样品中的原生质体比未经染色的形态清晰易观察,而且显微照相效果好;其中使用草酸铵结晶紫和复红染色液的效果更佳。该方法程序简单、操作方便、效果明显,还适用于悬滴法观察菌体形态和细菌运动方式。     

蛋白负染方法在蛋白质组学中的应用评价

为评价蛋白质负染方法在蛋白质组学分析中的应用,采用负染和考马斯亮蓝染色两种方法对同一样品的双向电泳胶进行染色,取相对应的8对蛋白点,并进行胶内酶解及MALDI-TOF/TOF分析,比较两种方法与质谱的兼容性。图像分析显示,负染方法展示出的蛋白点更多,但三维峰图不如考染明晰;质谱结果显示,8个负染蛋白点中有7个鉴定结果有效,8个考染蛋白点鉴定结果均有效。因此可以得出以下结论:负染的灵敏度高于考染,与质谱的兼容性良好,适用于建立双向电泳参考图谱的研究;但负染后的胶图不适于进行蛋白点丰度对比分析。     

小鹅瘟病毒核酸链型与结构蛋白分析

采用简易方法从鹅胚中分离纯化的小鹅瘟病毒(GPV)样品相当纯净,以致在电镜下呈晶格排列。用负染色技术观察病毒的形态结构,病毒直径为18～20nm,无囊膜。病毒颗粒含有4种结构蛋白,其分子量分别为88、78、66和51kd。根据病毒的核酸链型分析,小鹅瘟病毒含有单链核酸。此结果支持了小鹅瘟病毒属于细小病毒属的结论。     

家蚕拟浆细胞具有吞噬功能

目的：通过观察家蚕Bombyx mori吞噬细胞的微细结构,来确定拟绛色细胞是否也具有吞噬功能。方法：用荧光小球微量注射家蚕pnd pS品系的幼虫,经荧光染色剂丫啶橙和碘化丙啶染色循环血细胞后,在荧光显微镜下观察并扫描拍摄。结果：观察发现除颗粒细胞和浆血细胞外,一些原血球细胞（血干细胞）和拟绛色细胞（多酚氧化酶）也能吞噬荧光小球。在拟绛色细胞里还发现许多和颗粒细胞一样的能被丫啶橙染色的颗粒。尽管在小球细胞中没有发现被吞噬的荧光小球,但该类血球有比较多的能被丫啶橙染色的大颗粒,这表明它们可能是已经被吞噬的凋亡小体。结论：除颗粒细胞和浆血细胞外,一些原血球细胞和拟绛色细胞也能吞噬荧光小球。说明拟绛色细胞也具有吞噬功能。     

甲烷氧化细菌的电子显微镜观察

采用冷冻蚀刻、超薄切片和负染色电镜技术,对 Methylomonas sp. 761M和Methylosinus sp．81Z两抹甲烷氧化细菌的细微结构进行了观察。在冷冻蚀刻中,缅胞从质膜和细胞壁外膜的中央劈开,暴露出四个断裂面。各个断面的结构有所不同,显示出颗粒、小杆、乳状突起、小坑和光滑区等结构。冷冻蚀刻揭示的多层结构,与超薄切片和负染色观察结果一致。此外,对甲烷氧化细菌细胞壁表面图案,细胞内膜结构进行了观察。     

果蝇唾腺染色体的改良苯酚品红染色法

我们将一种植物材料中常用的细胞核染色剂——改良苯酚品红应用于果蝇唾腺染色体的染色,取得了较为满意的效果。该法具有操作简便、易于掌握、染色时间短、制成的永久标本不易褪色等特点。文中讨论了这种染色法的操作程序和注意事项。     

高中生物学实验中的显色原理

高中生物学新课程实验中涉及到相当多的物质检测与鉴定的显色方法。其原理多样,既有利用氧化还原反应原理,也有利用络合物的特性,还有利用有机染色剂染色的和酸碱指示剂变色特性的。作为学习者来说知其所以然有利于知识的构建。     

吸入细颗粒物在小鼠体内多器官分布及其组织损害的组织化学检测

目的探讨我国大气污染的主要成分细颗粒物(PM2.5)被吸入后在机体内的分布情况。方法选用碳粉颗粒制成悬液,于雾化箱中超声雾化使小鼠吸入碳粉颗粒,6周后取小鼠脏器并行HE染色明确碳粉颗粒的体内分布,Masson三联染色检测肺组织胶原沉积,肺组织免疫荧光染色检测F4/80和TGF-β1蛋白的免疫反应性表达。结果吸入体内的碳粉颗粒主要沉积于肺泡及肺间质中,并诱导肺泡巨噬细胞在肺内聚集,以及诱导肺组织胶原纤维沉积和TGF-β1表达增强;全身脏器中,脾脏内有较多的碳粉沉积,其他脏器如心、肝、小肠内也见少许分布。结论可吸入的细颗粒物主要分布于肺,引起肺泡腔变小、肺间隔增厚和胶原纤维沉积,并可以到达全身其他脏器,可能造成全身性危害。     

环孢素A抑制骨水泥颗粒诱导破骨细胞形成及功能

目的:探讨环孢素A对颗粒诱导破骨细胞形成及功能的影响。方法:取SD仔鼠双侧股骨和胫骨的骨髓,以不含血清的α-MEM培养液洗涤并收集骨髓细胞,再将细胞重悬于含10%胎牛血清及10~(-8)mol/L1,25-(OH)_2D_3的α-MEM培养液中,细胞计数后配成1.5×10~7/ml的细胞悬液,加入聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)颗粒和不同浓度的环孢素A(10~((-8)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-6) mol/L)于24孔培养板进行培养,并设置阳性对照组(只加PMMA颗粒)和阴性对照组(PMMA颗粒和CsA均不加),每组均有4孔放置骨磨片1片进行培养。培养2周后,行抗酒石酸(TRAP)染色检测破骨细胞形成;骨磨片行甲苯胺蓝染色观察。结果:PM- MA颗粒能够诱导大量TRAP染色阳性的破骨细胞形成,骨磨片有吸收陷窝形成;用环孢素A(10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L)和PMMA颗粒共同培养下TRAP染色阳性的破骨细胞形成数量明显减少,环孢素A浓度达到10~(-6)mol/L时无TRAP染色阳性的破骨细胞形成;环孢素A浓度在(10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L)时骨磨片有吸收陷窝形成,但少于阳性对照组,在10~(-6)mol/L时骨磨片则无吸收陷窝的形成。结论:环孢素A对PMMA颗粒诱导的破骨细胞的形成有着明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。     

丙型肝炎病毒免疫电镜的初步研究

采用组织匀浆免疫沉淀后负染、免疫组化块染后包埋、原位包埋等免疫电镜技术,研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）。组织匀浆、免疫沉定、负染后在电镜下观察到与ＨＣＶ相关的类病毒颗粒,形态与披膜病毒相似,大小多在５５～６５ｎｍ,圆形,有包膜,边缘略有突起或比较平滑,有胶体金结合在此种颗粒上及其周围。无关单抗阴性对照无类似颗粒及胶体金。免疫酶染电镜下还见到成堆可疑颗粒。此外,ＨＣＶ－Ｅ区抗原染色后原位包埋,尚发现胶体金大多结合于大小５０ｎｍ左右圆形结构的内部,表明Ｅ区单抗针对的特异性抗原位点位于这种结构的内侧。     

2种核酸染色方法的比较

目的:比较前染和后染等2种核酸染色方法对凝胶中DNA的染色效果,及其对染料染色灵敏度的影响,并验证新型核酸染色剂SYBRGreenⅠ能否代替传统染料溴化乙锭(EB)用于常规电泳中DNA的染色。方法:分别用SYBRGreenⅠ与EB采用2种不同的方法对凝胶中的DNA进行染色。结果:前染和后染的染色效果无显著差别,2种染料都能显示出10ng以下的DNA条带。结论:前染和后染方法的染色效果相当,染料SYBRGreenⅠ和EB均可用于这2种染色方法;新型染料SYBRGreenⅠ可代替强致癌性染料EB,用于常规凝胶中DNA的染色。