G-CSF启动子结合蛋白的克隆

大阪生命科学研究所第一研究部部长长田重一等克隆结合于粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的启动子区段上的转录调节因子获得成功.在1990年11月在京都召开的日本分子生物学会上发表这一结果. 长田等克隆的蛋白是结合到G-CSF3个启动子GPE 1、GPE2、GPE3中,并通过内毒素(LPS)直接参与对G-CSF的诱导.它是作G-CSF的阻遏物起作用的. 长田等以GPE 1区段作为探针,用DNA及蛋白印迹法筛选小鼠巨噬细胞株的cDNA表     

粒细胞集落刺激因子在临床中的应用

粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulatmg factor,G-CSF)是刺激骨髓细胞集落形成的一种造血因子,能特异性地刺激和调节粒细胞的增殖、分化、存活和活化。在临床上,G-CSF可作为各种中性粒细胞减少症以及其他相关疾病的治疗药物。天然人G-CSF(hG-CSF)来源非常有限,价格昂贵,不能满足临床应用的需要。随着生物技术的发展,在八十年代中期国外已获得了重组人G-CSF(rhg-CSF),国内随后也在大肠杆菌中表达了人G-CSF,从而可以大量生产相对廉价的rhG-CSF,以满足临床的需要。因此,G-CSF的临床应用越来越广泛。本文将从几方面介绍一     

鼠粒细胞集落刺激因子受体的纯化及鉴定

粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)在鼠NFS-60细胞中有较高的含量,通过对NFS-60细胞的大规模培养,用CHAPS及超速离心抽提G-CSFR, 经G-CSF亲和层析纯化获得G-CSFR, 采用ABC-ELISA进行鉴定.     

从反面利用G-CSF的癌增殖作用

日本中外制药公司和麒麟啤洒-三共公司最近进行粒状白细胞集落刺激因子(G-CSF)的临床试验,探讨它作为增强抗癌剂效果的增强因子的作用。这是从反面利用分化增殖因子的癌增殖作用。以前,因为担心癌增殖作用,所以在日本分化生长因子等迟迟不能进入临床试验。这次试验也许能成为生物技术医药开发的典型实例。 G-CSF和粒状白细胞巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素1～8、上皮细胞生长因子等体内的分化生长因子不仅有诱引正常细胞分化、增殖的作用,而且还有使某种癌细胞自     

人G-CSF基因组基因的克隆和序列测定

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种定向作用于粒系祖细胞的造血生长因子,它能特异性地刺激和调节粒细胞系统的增殖、分化、存活和活化,对治疗各种原因引起的粒细胞减少症具有显著疗效。许多研究者对G-CSF cDNA在大肠杆菌和其它表达系统中进行了研究,但应用G-CSF基因组基因所做的有关表达方面的研究为数不多。本研究利用PCR技术,在扩增出含有信号肽序列入基因组G-CSF基因的基     

G-CSF 在缺血性脑卒中动物模型治疗中的研究进展

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是细胞生长因子家族中的一员,主要功能是刺激细胞增殖分化降低细胞凋亡。近年来许多缺血性脑卒中的实验研究显示其能有效改善由于脑卒中等中枢神经系统疾病所致的神经功能缺损,G-CSF用于缺血性脑卒中的治疗具有广阔的前景。文章从G-CSF在缺血性脑卒中的研究进展及其作用机制等方面进行综述。     

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的药效学研究

比较研究聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)与重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)升高环磷酰胺所致外周血白细胞降低的Blab/c小鼠的白细胞效果.结果显示一次注射聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子与多次注射重组人粒细胞集落刺激因子的药效作用相当,且各剂量间呈良好的量效关系.     

FDA给Amgen及Immunex的CSF开绿灯

美国食品与药物管理局(FDA)的生物学反应修饰剂顾问委员会在1990年12月13日的会议上建议批准两种不同的重组型集落刺激因子(CSF)进入市场.顾问委员会的提议虽不能保证正式批准,但FDA以往总是听从上述委员会的提议,因此,有理由期待明年伊始获得正式批准. 第一项是批准应用Amgen的重组型粒细胞CSF(G-CSF)来预防因使用非骨髓癌癌症冶疗药物而引起的感染.G-CSF可刺激产生嗜中性细胞.这是一种白细胞,机体用     

大型生物技术新药G-CSF

厚生省11月29日收载粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的药价。收载之后,中外制药公司和麒麟啤酒公司、三共公司从12月2日开始分别销售重组G-CSF。改变抗癌化学疗法的大型生物技术新药诞生了。按相同投药量计算,药价订得很高,是美国药价的3.5倍。厚生省用药价政策促进生物新药的开发。其结果G-CSF当前的潜在市场已达到380亿～400亿日元。实际上估计各制造厂初年的销售额为300亿～350亿日元。这次销售的有中外制药公司的、麒麟啤酒公司和三共的。这二种药可治     

G-CSF动员造血干细胞机制研究进展

人类粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)是临床上广泛应用的细胞因子之一,最早用于治疗中性粒细胞减少症,降低癌症患者化疗后的死亡率。在临床应用中发现,其可以有效地动员骨髓中造血干细胞进入外周血,目前是临床上最常用的造血干细胞动员剂。介绍了G-CSF的生物学特性,并详细阐述了G-CSF动员造血干细胞的机制,为临床上G-CSF提高动员效率、减少副作用,以及为新型造血干细胞动员剂的开发提供理论基础。     

人粒细胞集落刺激因子cDNA的克隆、序列鉴定及初步表达

利用多聚酶链反应技术,从人膀胱癌细胞系5637细胞中快速扩增并克隆了人粒细胞集落刺激因子cDNA,序列分析证明,该cDNA包含人粒细胞集落刺激因子的全部编码基因,全长612bp,编码30个氨基酸的信号肽和174个氨基酸的成熟蛋白。其中第43位codon出现一个碱基的突变(CAC→TAC)导至第43位氨基酸的改变(组氨酸→酪氨酸)。经逆转录病毒导入SP2/0细胞并初步表达。结果表明:该基因产物具有G-CSF活性。     

聚乙二醇定点修饰重组人粒细胞集落刺激因子突变体的研究

研究了重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)的聚乙二醇化修饰、分离纯化和活性鉴定。通过对人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)第1,3,4,5,17位氨基酸进行突变,并在C末端加了一个半胱氨酸,获得了体外活性为原型rhG-CSF150%以上的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)。然后用分子量为20kD的甲氧聚乙二醇马来酸酐(mPEG-Mal)修饰rmhG-CSF,反应混合物经离子交换和凝胶过滤柱纯化,得到纯化的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF)。SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的PEG-rmhG-CSF的纯度大于95%,体外活性分析表明PEG-rmhG-CSF活性优于目前临床使用的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF,NeulastaR○),药代动力学研究表明PEG-rmhG-CSF体内半衰期约为14h,比修饰前延长了7倍。     

协和发酵公司开始G-CSF衍生物的临床试验

协和发酵公司表示从6月开始进行粒细胞群落刺激因子(G-CSF)的衍生物(KW2228)的临床试验。现在是第一阶段。临床试验班长是东京大学第3内科教授高久史麿。 G-CSF是担任非特异性的活体防御反应的粒细胞(白血球的一种)的增殖分化因子。在粒细胞中特异地增殖噬菌、杀菌作用发挥好的中性白细胞。因此,可望作为因癌的化学疗法和放射疗法等引起的粒细胞减少等副作用的治疗药。如开发G-CSF顺利的话,也许能完全治愈     

利用新酵母开发效率高的人蛋白的分泌系

日本一公司宣布利用分泌能力强于传统的酿酒酵母力的酵母克鲁维酵母,着手开发人蛋白的分泌系。该公司的母公司西德 Hoechst 公司用酿洒酵母的分泌系生产粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。如果能开发有望的系,将来该公司的生物药品生产系也有可能采用新开的有望系。     

RNA的错误剪接影响转基因的表达

利用PCR扩增方法获得1.5 kb人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)基因组基因,将其受控于2.6 kb的鼠乳清酸蛋白(WAP)基因的启动子下,构建成乳腺表达载体.通过显微注射方法建立转基因鼠,PCR及DNA印迹鉴定证实获得两只转基因阳性鼠.在其乳腺表达出极低的G-CSF.为探讨低表达的原因,采用RT-PCR方法,从转基因鼠乳腺获得G-CSF cDNA,序列分析表明,其RNA剪接出现错误,将其第四外显子识别为内含子,由此导致其低水平表达.     

G-CSF使双特异性抗体更有效

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)能促进白细胞生长,似乎也可提高双特异性抗体(名为MDX-210,Medarex公司的产品)的功效。 荷兰Utoecht大学医院的研究人员发现与G-CSF结合使用,MDX-210可加强嗜中性白细胞对癌的抵御力。这种白细胞通常没有抵御癌的作用,所以,这项发现很有意义。嗜中性白细胞在免疫系统中是最常见的白血细胞。果如上面所述,这就好比在抗击癌时给细胞增加新战斗力。 该大学的科学家发现,G-CSF在化疗后的患者嗜中性白细胞上可诱导一种抗癌受体。在体外,在     

FL对脐血造血细胞长期液体培养的影响*

用脐血进行千细胞移植有许多优点,但有一个主要的缺点是可获得的细胞数量有限。因此脐血干细胞的体外扩增对于其临床应用具有重要意义。考察了Flt-3配体(FL)和干细胞因子(SCF)、白介索3(IL一3)、IL-6、粒细胞集落刺激因子(G-csF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)的组合对脐血细胞扩增和分化的影响。培养42d,总细胞最多扩增了385,30±163 51倍(FL+SCF+G．CSF+GM—CSF),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)在第28天达到最高,最高扩增了409．52±189．50倍(FL十SCF+IL-3+IL一6)。FL与SCF等细胞因子具有协同作用,对所有考察的细胞因子组合中,加入FL都使总细胞和CFUGM的扩增倍数增加。FL+SCF培养的总细胞扩增最小,而CFU-GM长时间保持在较高水平,表明这FL和SCF有利于保持造血干细胞的活性,防止细胞分化。在存在G-CSF和GMCSF的培养中,总细胞获得了最大的扩增,但CFU-GM达到最大后很快下降至O,表明G-CSF和GM—CSF促进了细胞的分化。结果提示,细胞因子组合对脐血造血细胞的扩增和分化具有重要的作用．FL和SCF可促进造血细胞的扩增,而G-CSF和GM—CSF等可导致细胞的过度分化。     

聚乙二醇定点修饰重组人粒细胞集落刺激因子突变体的研究

研究了重组人粒细胞集落刺激因子突变体（rmhG-CSF）的聚乙二醇化修饰、分离纯化和活性鉴定。通过对人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）第1,3,4,5,17位氨基酸进行突变,并在C末端加了一个半胱氨酸,获得了体外活性为原型rhG-CSF 150％以上的重组人粒细胞集落刺激因子突变体（rmhG-CSF）。然后用分子量为20kD的甲氧聚乙二醇马来酸酐（mPEG-Mal）修饰rmhG-CSF,反应混合物经离子交换和凝胶过滤柱纯化,得到纯化的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子突变体（PEG-rmhG-CSF）。SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的PEG-rmhG-CSF的纯度大于95％,体外活性分析表明PEG-rmhG-CSF活性优于目前临床使用的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子（PEG-rhG-CSF,Neulasta^?）,药代动力学研究表明PEG-rmhG-CSF体内半衰期约为14h,比修饰前延长了7倍。     

CSF的临床试验捷报频传

集落刺激因子(CSF)初期临床试验的结果正开始收集,这些结果似乎证实了早期的结论,即CSF确可增加白细胞的数量、减轻感染,并只有很小的副作用。例如,每天以每公斤体重用3～60mg的Amgen的rDNA粒细胞CSF(G-CSF)处理5位患先天性粒细胞缺乏症的病人9～13个月时,5位患者的白细胞数都有了提高,同时,感染的发生率和严重程度都显著下降。在这项研究之前,患者们每年平均要有91天     

人粒细胞集落刺激因子受体膜外区在昆虫细胞中的表达

以胎盘组织提取的mRNA为模板,RTPCR扩增人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)受体膜外区CRH的cDNA片段,克隆于供体质粒pF_ASTB_AC1,与杆状病毒表达载体Bacmid同源重组后,转染昆虫细胞SF9,获得重组杆状病毒并证明了CRH的高效表达。表达产物经G-CSF亲和层析进一步纯化,纯度可达90%以上。受体竞争性结合实验结果表明,该表达产物能特异性结合G-CSF,具有较高的亲和力(Kd=3.8nmol/L)。