快原子轰击质谱技术在异常血红蛋白一级结构分析中的应用

本文报道用快原子轰击(FAB)质谱技术测定血红蛋白(Hb)肽链经胰蛋白酶水解后的几个片段的氨基酸顺序结果。通过解释正离子谱上的碎片峰,确证用FAB质谱测得的氨基酸顺序与已知的完全一致。在此基础上,我们对二例未知结构的异常Hb进行测定,确证一例是Hb G Taipei(α_2β_2~(22Glu→Gly)),另一例是HbG Honolulu(α_2~(30Glu→Gln)β_2)。实验表明,用FAB质谱技术测定蛋白质一级结构具有微量、快速、可靠和操作简便等优点。     

东曹销售新的肽序列

东曹公司从8月中旬开始销售从美国波顿仪器公司引进的以气相肽序列(爱德曼分解装置)"PI-2020"为核心的氨基酸序列分析系统.东曹公司在液相色谱仪等与生物技术研究和生产有关的仪器方面已取得成绩.但是生物技术专用的研究仪器的商品化这还是第一次.作为生物技术产业的途径首先想把引进的产品作为核心系统加以商业化.东曹的肽序     

海南快生根瘤菌I66的部分16S rRNA序列测定

与豆科植物共生固氮的根瘤菌目前有4个属、10个种.包括Rhizobium(6个种),Sinorhizobium(2个种),Azorhizobium(1个种)和Bradyrhizobium(1个种).其中多数是近年来采用现代分类技术分析后建立的,而且新的类群还在不断被发现.在以前的根瘤菌数值分类及DNA-DNA杂交研究中,我们确定了海南慢生型根瘤菌属于大豆慢生根瘤菌种(B.japonicum).而海南快生型根瘤菌的分类地位则较为分散.其中一些菌株属于已知各根瘤菌种,另有4株银合欢根瘤菌和13株来自不同寄主的菌株分别构成具有独立的分类地位的两个菌群(第2群和第4群)(待发表).为了进一步明确它们的分类地位,我们依据国际系统细菌学委员会根瘤菌分委员会的建议,利用Young等建立的聚合酶链反应(PCR)及测序技术,对第4群的代表菌株166的部分16SrRNA基因片段进行了扩增和测序.     

人骨保护素成熟肽段基因的克隆和序列测定

人骨保护素（OPG）具有抑制破骨细胞分化、抑制成熟破骨细胞的活性并诱导其凋亡的功能,具有广泛的研究和应用前景。采用RT－PCR的方法从重组骨形成蛋白2（BMP－2）刺激的人骨肉瘤细胞系MG63细胞中克隆编码人OPG的成熟肽段基因,并将其克隆到pUC18中,序列分析结果表明,所克隆的人OPG／OCIF成熟肽段基因与献报道的完全一致。为进一步基因表达及功能研究奠定了基础。     

人转化生长因子β1成熟肽基因的克隆及序列测定

转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF β1)作为细胞主要的负调控生长因子,参与了哺乳动物各种细胞的病理和生理过程。此外,TGF β1可望应用于创伤愈合、免疫抑制、肿瘤抑制等方面,具有潜在的临床应用前景。我们在完成了人TGF β1基因的克隆及其在真核细胞中的表达后,准备进行其在大肠杆菌中的高效表达研究。     

快原子轰击质谱技术结合酶学方法鉴定黑曲霉1,6-缩水-β-D-吡喃葡萄糖激酶的诱导合成

1,6-缩水-β-D-吡喃葡萄糖是纤维素类物质热解的主要产物,黑曲霉突变株CBX209能较好地利用该糖作为唯一的碳源和能源生长并产生有用的代谢产物柠檬酸,其效率与利用葡萄糖大致相当。利用葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶复合系统测定证明该菌株不存在1,6-缩水-β-D-吡喃葡萄糖水解酶。采用快原子轰击质谱技术结合6磷酸葡萄糖脱氢酶系统进行测定,结果表明经(NH₄)₂SO₄沉淀或阴离子交换层析处理后的无细胞提取液在加入ATP和Mg²⁺的条件下能直接催化1,6-缩水-β-D-吡喃葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,证明黑曲霉突变株中存在一个新酶,即1,6-缩水-β-D-吡喃葡萄糖激酶。该酶为诱导酶。     

RNA序列测定始末

一、历史的回顾 生物大分子的序列分析,即一级结构的测定,是分子生物学的核心问题,许多科学家为之呕心沥血奋斗终生,取得了巨大成就。 1963年著名的英国科学家Sanger和Thompson揭开了生物大分子序列分析的帷幕,成功的测出了胰岛素51个氨基酸的顺序,获得了1968年诺贝尔奖。1965年Holley等用经典法测定了酵母tRNA~(Ala)的75个核苷酸的全序列。同年Sanger又创造了测定RNA的指纹图谱法,但DNA序列测定的研究工作进展缓慢。     

环烯醚萜甙的快速原子轰击质谱和场解吸质谱研究

环烯醚萜甙是植物界分布较广泛的一类配糖体成分,极性较大,用通常的电子轰击质谱测试不能得到分子离子信息,且离子碎片零碎,难以进行结构解析。本文对２５个不同类型的环烯醚萜甙进行正,负离子快速原子轰击质谱和场解吸质谱分析,并讨论这两种质谱新技术在环烯醚萜甙类化合物结构解析中的应用。     

乳蛋白生物活性肽的序列及其功能

乳蛋白经消化产生的肽类除了具有营养作用外,还具有多种生物活性,包括阿片肽和阿片拮抗肽活性及免疫调节,抗高血压、抗血栓、抗菌抗病毒,促进矿质元素吸收,防止腹泻等作用。本文对近几年发现的乳蛋白生物活性肽的序列结构及功能做了综述。     

高通量质谱法用于小鼠器官内源性肽的鉴定

内源性肽以细胞因子、生长激素、激素肽等形式在人体的内分泌、神经、细胞生长和生殖各个领域发挥功能。神经肽是一种内源性肽,与痛觉、睡眠、情绪、学习与记忆等生理活动相关,不但存在于脑部神经细胞,也存在于其他体液和器官内并发挥重要作用。目前对器官内源性肽的研究仍不足,尤其是其中的神经肽。文中应用液质联用串联质谱高通量鉴定胰腺、心脏、肝脏和肾脏中内源性肽的分布以及神经肽的种类。鉴定结果显示,在肝脏中内源性肽和神经肽的数目最多,而胰腺中最少;所鉴定到的内源性肽具有器官特异性,在4个器官中分别呈现不同的动态分布;4个器官中神经肽的LPV(最长肽变异体)数目差异较大,而且基因家族的分布也各不相同,比如胰腺中的神经肽多属于Glucagon家族,心脏中的神经肽分别属于ACBD7、Granins、PEBP等几个家族。鉴定结果将为疾病的机制研究和治疗药物的研发提供参考。     

快原子轰击质谱技术结合酶学方法鉴定黑曲霉1,6—缩水—β—D—吡喃葡萄糖激酶的诱导合成

1,6－缩水－β－D－吡喃葡萄糖是纤维素类物质热解的主要产物,黑曲霉突变株CBX－209能较好地利用该糖作为唯一的碳源和能源生长并产生有用的代谢产物柠檬酸,其效率与利用葡萄糖大致相当。利用葡萄糖氧化酶和竦根过氧化物酶复合系统测定证明该菌株不存在1,6－缩水－β－D－吡喃葡萄糖水解酶,采用快原子轰击质谱技术结合6－磷酸葡萄糖脱氢酶系统进行测定,结果表明经（NH4）2SO4沉淀或阴离子交换层析析处理后的无细胞提取液在加入ATP和Mg^2 条件下能直接催化1,6－缩水－β－D－吡喃葡萄糖合成6－磷酸葡萄糖,证明黑曲霉突变株中存在一个新酶,即1,6－缩水－β－D－吡喃葡萄糖激酶。该酶为诱导酶。     

HA结合肽的筛选与序列分析

利用噬菌体随机十二肽库对羟基磷灰石进行结合肽筛选,经4轮生物淘洗和选择、噬菌体扩增和DNA测序,获得一组多肽序列,其中含有较高比例的脯氨酸、亮氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺以及疏水氨基酸。经Blast分析、CLUSTALW多重序列比对推得羟基磷灰石结合肽可能的结合基序为VLPP、LP(X)₆PL/X、PP(X)_4~6P,(X为任意氨基酸)。认为脯氨酸等氨基酸的高比例特性以及结合基序特征可以很好地解释羟基磷灰石的生物可利用性和安全性。在生物体中未发现结合肽有价值的相似DNA编码序列和多肽、蛋白质序列。噬菌体单克隆反筛功能测定进一步确定了相关序列对羟基磷灰石的结合能力。     

印度测定鹰嘴豆基因组序列

ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１９９９年１７卷３期第２２１页报道：为了加强生物技术研究,印度政府启动了一个植物基因组计划,测定印度主要粮食作物鹰嘴豆的完整基因组序列。４００万美元的政府拨款给了国家植物基因组研究中心（ＮＣＰＧＲ,新德里）,使其与政府生物技术部（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）资助的７个植物分子生物学实验室网络一起开展测序工作。“初步目标是培育转基因植物”,ＮＣＰＧＲ主任ＡｓｉｓＤａｔｔａ称。“我们希望测定鹰嘴豆的基因组序列将有助于鉴定出有用的基因和启动…     

骨桥蛋白RGD黏附序列多拷贝短肽的表达、纯化及生物学活性测定

目的:用大肠杆菌表达骨桥蛋白RGD黏附序列6拷贝短肽,经分离纯化后检测其生物学活性.方法:运用基因重组技术,将骨桥蛋白RGD黏附序列的核酸片段首尾相连,与携带GST编码序列的原核表达载体连接构建融合蛋白表达质粒pGEX-3X-RGD.将重组质粒转化宿主菌后,对诱导融合蛋白表达的条件进行优化.表达产物GST-RGD经谷胱甘肽-亲和层析纯化后,分别检测其对骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞黏附和迁移的影响.结果:所构建的含有6个拷贝短肽的GST-RGD融合蛋白可在大肠杆菌中以包含体的形式进行表达.用十二烷基肌氨酸钠变性溶解包含体及透析复性后,经亲和层析可得到高纯度的GST-RGD(6)融合蛋白.GST-RGD(6)融合蛋白能特异性的抑制骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞的黏附和迁移.结论:骨桥蛋白RGD黏附序列6拷贝短肽可在大肠杆菌中高效表达,纯化的GST-RGD融合蛋白具有抑制血管平滑肌细胞黏附和迁移的活性.     

人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的扩增、克隆和序列测定

骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)作为TGF-β超家族成员,可以诱导未分化的间质细胞向软骨细胞分化,然后通过软骨内成骨形成骨组织,对难治性骨折的愈合及各种骨缺损的修复有明显的促进作用。另外,BMP在胚胎发生和神经发育过程中也起重要作用。但是由于BMP在骨组织中含量甚微,提取方法繁琐,故不能满足临床应用和基础研究需要,随着人BMP(hBMP)1～13 cDNA基因的克隆,人们已在COS、CHO等真核细胞中表     

世纪之交的蛋白质序列测定技术

对蛋白质序列测定技术的发展过程作了简要回顾，介绍了近年在该方法学领域的主要进展，其中包括Ｎ－端顺序测定的微量化、毛细管ＨＰＬＣ与毛细管电泳的应用，新的Ｃ－端化学降解测序方法，以及快原子轰击（ＦＡＢ）、电喷雾（ＥＳＩ）和基质辅助激光解吸电离－飞行时间（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）质谱在蛋白质序列测定中的应用，还对世纪之交该领域的发展趋势作了扼要的展望。     

人表皮生长因子肽谱及一级结构的质谱法分析

采用液相色谱－质谱联用法（ＬＣ－ＭＳ）,分别对基因工程表达的人表皮生长因子胰蛋白酶和Ｖ８蛋白酶的酶解产物进行了肽质谱分析,获得各肽段的分子量信息。并对大部分肽段用串联质谱（ＭＳ－ＭＳ）分析了肽的序列,获得其氨基酸序列信息。此外,还测定了分子中二硫键的数目。均获得满意的结果。这一方法的建立将有助于天然的,人工合成的及基因工程表达的蛋白质或多肽的鉴定和结构分析,其精确度及分辨率都超过常规方法。     

HIV-1融膜肽的编码DNA序列比较

通过分析GenBank中的全部95个HIV-1完整基因组序列,设计融膜肽"探针序列",对所获得的95段融膜肽的编码DNA序列进行了翻译、对准和分析.得到融膜肽及其编码序列的"优势序列"及突变分布。 Abstract:Fusion peptide coding DNA sequences were retrieved from 95 HIV-1 complete genome entries of GenBank.Results of translation,alignment and analysis led to "the dominant sequence" and the mutation distribution of the fusion eptide coding DNA sequences.     

脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白结合肽序列的亲和筛选

应用噬菌体展示肽库技术,以重组的脑膜炎大肠杆菌致病蛋白IbeA作为靶分子,经过吸附-洗脱-扩增-再吸附的亲和筛选,随机挑选亲和力强的噬菌体克隆,进行ELISA、竞争抑制实验和序列测定。结果显示,经3轮淘选后,间接ELISA鉴定得到高亲和性结合IbeA蛋白的15个阳性克隆。竞争抑制实验结果表明,游离IbeA蛋白能竞争抑制噬菌体结合肽克隆与固相包被的IbeA蛋白的结合,其抑制作用随游离IbeA蛋白浓度的降低而减弱。测序结果得到5种阳性噬菌体克隆展示肽序列。上述结果提示以脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白为靶筛选所获得的噬菌体12肽克隆,具有特异性,其结合肽序列呈现相对保守性。建立的从噬菌体随机肽库筛选IbeA蛋白结合肽的方法具有方便、灵活和高效可行的特点。