用套多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周务中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％,对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后     

多聚酶链反应技术及其在乙型肝炎病毒研究中的应用进展

随着多聚酶链反应技术的广泛应用,本文据ＰＣＲ在乙型肝炎病毒研究中的一些具体特点,对其在技术方面及其应用所得得的进展作一综述,重点包括ＰＣＲ技术在ＨＢＶ研究中的一些实际应用问题,以ＰＣＲ技术对ＨＢＶ所得到的新认识,ＨＢＶ感染性评价,ＨＢＶ基因分型和变异株的研究,ＨＢＶ的复制和表达机理,传播方式,及与肝细胞肝癌关系的有关进展。     

微量直接法检测鸭乙型肝炎病毒DNA多聚酶

鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA多聚酶(DNAP)是研究DHBV感染规律和观察药效的敏感指标,但常规方法测定DNAP需用较多量血清并超速离心,不适用于大批标本的检测。本文参照Sprengel介绍的掺入液条件,用微量血清(70～100μl)直接检测鸭血清中的DHBV-DNAP,比常规超速离心法和DHBV-DNA斑点杂交法简便。同时,观察了膦羧基甲酸钠(PFNa_3)对DNAP的抑制作用,以探讨方法的特异性和可行性。     

多聚酶链反应技术在研究人微小病毒B19中的应用

本文概述了人微小病毒Ｂ１９的基本情况,详细介绍了多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术在Ｂ１９病毒引起的各类感染、血制品等的检测,寻找整合状态的Ｂ１９病毒和其他微小病毒,以及研究Ｂ１９病毒在组织培养中的复制过程等方面的应用,并对其作了初步的评价。     

多聚酶链反应检测狂犬病毒的研究

应用一对狂犬病毒特异性引物,经逆转录和循环的扩增,从狂犬病毒感染的细胞及加热灭活的这种样本中,都扩增出了与预期相符的带,表明结合热灭活技术可用作狂犬病毒的安全,敏感,特异,快速检测手段。     

多聚酶链反应技术鉴别肾综合征出血热病毒血清型的初步研究

肾综合征出血热(HFRS)为一组抗原性密切相关的布尼亚科汉坦病毒引起的急性传染病。在我国存在至少两种临床表现、动物宿主及流行特征截然不同的血清型别,即血清Ⅰ型(汉坦型)和血清Ⅱ型(汉城型)。这两型病毒间的血清学定型已有报道。近年来,除啮齿类动物外,从临床病人以及非啮齿类动物体内也分离到了HFRS病毒。同时出现两类型别毒株共存,以及从家鼠体内分离到野鼠型毒株或从野鼠体内分离到家鼠型毒株的复杂情形。为此,准确检定并鉴别不同来源毒株型别,将为深入了解其病原学、流行病学以及制定疫苗生产策略提供重要信息。     

乙型肝炎病毒多聚酶末端蛋白的结构和功能研究

乙肝病毒蛋白结构和功能是当前研究乙肝病毒的热点之一。HBV多聚酶的末端蛋白在病毒复制过程中起重要作用,主要包括前基因组RNA包装和DNA合成的蛋白引发等,并可抑制细胞对干扰素的反应。本文综述了乙肝病毒多聚酶末端蛋白的结构和功能,还比较了乙肝病毒与逆转录病毒多聚酶结构和功能的异同。     

应用乙型肝炎疫苗阻断围产期乙型肝炎病毒的母婴传播

993名HBsAg携带者母亲所生新生儿,以768名新生儿为试验组,226名新生儿为对照组,试验组分别注射HBsAg血源性氢氧化铝佐剂疫苗,乙型肝炎高价免疫球蛋白(HBlg)或疫苗加HBIg,对照组注射安慰剂,所用疫苗为国产81-2、82-1-2、83-1和美国NIHA9,观察表明,出生后六个月,试验组各批疫苗的保护率为60～93％,以83-1批为最高;疫苗加HBIg的保护效果与疫苗相似,HBIg组亦有70％的保护效果,以上结果证明单独应用HBsAg疫苗阻断母婴传播的效果是理想的。     

套式PCR检测婴幼儿巨细胞病毒感染

本文采用套式ＰＣＲ（Ｎｅｓｔｅｄｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术对６１例婴儿肝炎综合征（Ｎｅｏｎａｔａｌｈｅｐａｔｉｔｉｓ）患者进行了ＨＣＭＶ（Ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）检测,结果表明,当只用一对引物进行ＰＣＲ时,检出３３例患者为ＨＣＭＶ阳性,阳性检出率为５４．１％;而采用套式ＰＣＲ后,有１７例为ＨＣＭＶ阳性,阳性检出率提高到７７．０％。可见套式ＰＣＲ方法的阳性检出率明显高于单一ＰＣＲ,并远高于目前使用的其它方法。同时也说明ＨＣＭＶ是导致肝炎综合征的主要病原体之一。此外,灵敏性和特异性试验表明,套式ＰＣＲ技术的敏感度高、特异性强、简单快速,在临床检测和诊断中具有很大的潜力。     

聚合酶链反应技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒

目的建立聚合酶链反应(PCR)技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。方法提取感染REV-T和脾坏死病毒(SNV)的SPF鸡胚成纤维细胞DNA为模板,利用前病毒长末端重复序列(LTR)区引物进行扩增。采集肿瘤病鸡,以及人工感染REV 28 d后鸡肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胸腺、法氏囊等器官,进行扩增。同时将采集的脏器组织,进行HE染色和免疫组化试验(IHC)。结果REV-T感染的组织未检测出电泳条带,而SNV感染的细胞中检测到了一条300bp特异而清晰的电泳条带,而且SNV感染的鸡组织中,PCR方法检测到了特异的条带。通过HE染色和免疫组化技术观察到了肿瘤组织,肿瘤细胞的形态、分布。结论PCR检测REV更快捷,特异更好。     

PCR在猴B病毒鉴定中的应用研究

目的为鉴定新分离毒株是否为B病毒.方法根据ScinicarielloF报道的引物,用PCR方法扩增BV147、HSV-1、HSV-2,对扩增产物进行SacⅡ内切酶消化.结果这一对引物可同时对这3种病毒进行扩增,但只有BV147的扩增产物可被SacⅡ内切酶切开.对BV147扩增片段克隆测序的结果证实,其与美国B病毒E2490株部分基因(UL27)相对应位置的核苷酸同源性为100%.结论初步建立了检测B病毒DNA的PCR方法并测定了新分离病毒毒株的部分基因序列,证明新分离的病毒为B病毒.     

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的同步PCR扩增

介绍了一种从人血清中同步扩增和检测ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＣＶ－ＲＮＡ的方法。ＨＣＶ－ＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ,这种ｃＤＮＡ和从ＨＢＶ中抽提出的ＤＮＡ一起,用根据ＨＢＶ、ＨＣＶ保守区序列设计的特异引物进行同步ＰＣＲ扩增,这种方法对于检测ＨＢＶ和ＨＣＶ重复感染很有用处     

化学发光法检测体外HBV复制

目的:建立化学发光法检测体外HBV复制水平的方法,研究其灵敏度和稳定性.方法:用HBV DNA重组质粒pCH9转染到人肝癌细胞株HepG2和Huh7中,5d后收集细胞并抽提其HBV复制中问体DNA,转印后以地高辛标记HBV DNA为探针进行杂交,用化学发光法检测杂交结果,同时进行探针灵敏度的检测.结果:转染后HepG2和Huh7细胞提取HBV DNA中检测出较强的复制中间体的信号,分别为松散环状DNA(rcDNA),双链线性DNA(dslDNA),单链DNA(ssDNA),探针检测的灵敏度可达到lpg,接近同位素法检测的灵敏度.整个实验重复3次获得同样结果.结论:成功建立了稳定的化学发光法检测体外HBV复制水平的方法.     

Detection of Puccinia striiformis in Latently Infected Wheat Leaves by Nested Polymerase Chain Reaction

Stripe rust, caused by Puccinia striiformis f. sp. tritici ( Pst ), is one of the most devastating wheat diseases worldwide, especially in temperate regions with cool moist weather conditions. The identification of the pathogen in infected plants based on morphological or physiological criteria before sporulation is labour-intensive and time-consuming. To accelerate and simplify the process of detection, a nested Polymerase Chain Reaction (PCR) assay was developed for specific and sensitive detection of Pst . Specific primers Psta-Psts were designed according to a genome-specific sequence of Pst . In nested PCR, with a 10-fold dilution series of template DNA, the detection limit was 2 pg DNA in the first PCR with the primers Psta-Psts. The second round PCR was then performed using amplified products from the first PCR as the template and Nesta-Nests as the primers. An amplification signal was detectable even when only 2 fg of P. striiformis f. sp. tritici DNA was used as the template in nested PCR. With nested PCR, the sensitivity of detection was enhanced 1000 fold. Using extracts from stripe rust-infected wheat leaves, the fungus could be determined in the leaves before symptom appearance. The assay provides a rapid and sensitive method for detection of P. striiformis f. sp. tritici in latently infected leaves of overwintering wheat plants.     

巢－PCR分型检测人乳头状瘤病毒同源序列

采用Ｌ１通用引物ＭＹ１１／９介导聚合酶链反应,（ＰＣＲ）,从人生殖道疣,癌组织中扩增人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）同源序列得３９４－５５２ｂｐＤＮＡ片段,再以内引物ＧＰ５／６介导第二次扩增得１３９－１５４ｂｐ片段,然后根据ＲｓａＩ酶切扩增片段的电泳图谱来分出ＨＰＶ型别,无需特异型别的探针进行分子杂交,３５例宫颈癌和３０例生殖器疣ＨＰＶ同源序列检出率分别为８５．７５％和９６％;１２例卵巢腺癌检出ＨＰＶ同源     

巢－PCR分型检测人乳头状瘤病毒同源序列

采用L₁通用引物MY 11/9介导聚合酶链反应(PCR),从人生殖道疣、癌组织中扩增人乳头状瘤病毒(HPV)同源序列得394-552bp DNA片段,再以内引物GP5/6介导第二次扩增得139-154bp片段,然后根据Rsa Ⅰ酶切扩增片段的电泳图谱来分出HPV型别,无需特异型别的探针进行分子杂交,35例宫颈癌和30例生殖器疣HPV同源序列检出率分别为85.75%和96%;12例卵巢腺癌检出HPV同源序列者7例.本法简便、灵敏、可靠,并适合于临床应用.     

小鼠肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立和比较研究

用小鼠肝炎病毒的MHV1、MHV3、A59、JHM四株分别感染DBT细胞 ,收获病毒 ,提取病毒RNA。依据小鼠肝炎病毒的病毒基因、M结构蛋白、mRNA的基因保守区分别设计出多对引物 ,按各对引物的条件建立了RT -PCR方法 ,比较了不同引物敏感性和特异性 ,并比较选择与MHV同为冠状病毒的传染性支气管炎 (IBV)标准株和野毒株没有交叉的最佳特异引物。敏感性实验检测到 1 0pg的小鼠肝炎病毒RNA。