AcMNPVP35抑制HaSNPV诱导的Tn-Hi5细胞凋亡

苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)能够抑制棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera Nucleopoly hedrovirus,HaSNPV)诱导的Tn Hi5 细胞凋亡,并能辅助HaSNPV在Tn Hi5细胞中复制,产生具有感染能力的子代病毒。瞬时表达实验证明,在Tn Hi5细胞中,p35具有明显抑制凋亡的能力,但是不能辅助HaSNPV在Tn Hi5细胞中的复制;进一步构建超表达p35 的重组病毒:vHap35,发现vHap35能够抑制Tn Hi5细胞凋亡,但是不能产生具有感染力的病毒粒子。电镜观察发现感染重组病毒的部分细胞中存在单粒包埋的病毒粒子(ODV)。     

重组水蛭素相关肽Hi-lys的表达与纯化(英文)

为开发一种新的有临床应用价值的抗血栓药物,根据水蛭素保持抗凝活性的2 0肽片段,设计并构建了水蛭素相关肽(Hi lys)与天冬酰胺酶C端的融合表达系统.为方便目的肽与融合伙伴的分离,增加了富含带电序列的8肽(KRKRKKSR)及酸敏感的天冬氨酰 脯氨酸(Asp Pro)位点,获得了表达质粒pED P8 Hi lys.将其转化E .coliBL 2 1,玉米浆培养基(kanr)培养,乳糖诱导获得融合蛋白(AnsB C P8 Hi lys)的高效表达.通过细菌裂解、包涵体洗涤、尿素溶解、乙醇沉淀、酸水解和DEAE 纤维素5 2柱层析纯化获得目的肽Hi lys ,用凝血酶测定法测得其抗凝活性为5 0ATU mg .     

儿童肺炎链球菌和流感嗜血杆菌耐药及感染特征分析

目的 了解儿童呼吸道感染肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,SP)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)的分布特征、耐药情况,及耐药菌抗生素间的相互影响,以更合理地指导临床用药.方法 对2009-2010年临床呼吸道感染患儿进行痰、咽拭子或肺泡灌洗液培养分离Hi和SP.因子需求试验鉴定Hi,头孢硝噻酚法检测β-内酰胺酶;奥普托辛和胆汁溶菌试验确认SP.两菌均采用K-B法检测常用对抗生素的耐药性.结果 收集SP 495株,Hi 515株,多见于3岁以下儿童,以呼吸科分离率最高.SP对红霉素、四环素、阿奇霉素、复方新诺明的耐药率分别为98.4％、66.1％、98％和81.6％,其对青霉素敏感性仅为9.5％.Hi有42.7％产生β-内酰胺酶,Hi对氯霉素、复方新诺明、氨苄青霉素、阿奇霉素的耐药率分别为22.1％、21.6％、36.7％和62.7％.与青霉素敏感SP和β-内酰胺酶阴性Hi相比,耐药SP和阳性Hi更易对氯霉素、四环素和复方新诺明耐药.结论 SP和Hi以婴幼儿为主,多见于呼吸科.其耐药情况严峻,青霉素耐药和产β-内酰胺酶菌株会诱导其他抗生素耐药,引发多重耐药.合理使用抗生素以及对两菌的耐药监测应引起高度重视.     

重组人脑利钠肽的纯化与活性测定

目的:建立重组人脑利钠肽(BNP)的纯化方法,筛选疏水作用层析纯化介质并优化纯化条件。方法:根据带有6×His标签的Dsb A-BNP融合蛋白的特性,采用金属螯合亲和层析(IMAC)、凝血酶酶切去除His-Dsb A、阳离子交换层析等步骤进行粗纯;利用BNP的疏水性,分别选用不同疏水性质的介质Hi Trap Butyl FF、Hi Trap Phenyl(HS)及Source 15进行精纯;用SDS-PAGE和HPLC检测纯化获得的BNP的含量及纯度;用细胞法对BNP进行活性检测。结果:经IMAC、酶切去除标签蛋白及阳离子交换层析纯化后,获得纯度为60%的BNP;Hi Trap Butyl FF、Hi Trap Phenyl(HS)等疏水介质与BNP的吸附效果不佳,而经Source 15反相层析后,BNP的纯度可达98.98%,活性检测与对照品一致。结论:利用Source 15反相层析可获得高纯度、活性优的BNP原液,可满足后期制剂处方实验的要求,为后续研究奠定了基础。     

常见细菌性脑膜炎特异性快速诊断研究进展

脑膜炎球菌(MC)、肺炎球菌(Pnc)、和流感嗜血杆菌(Hi)所致脑脊髓膜炎,特别是对婴幼儿发病率仍很高,隐球菌(CRY)性脑膜炎发病率虽较低,但其病情严重,预后较差和临床确诊困难。因此近年来人们一直在寻求对上述病源的特异、快速、敏感和简便的诊断方法。     

深圳地区CAP患儿流感嗜血杆菌对抗生素的体外抗菌活性研究

目的了解深圳地区儿童流感嗜血杆菌(Hi)对7种抗生素的体外抗菌活性、产酶率以及感染患儿的年龄分布情况,以有效指导临床合理用药。方法采用E-test法测定从患儿的深部吸痰标本分离的嗜血杆菌72株对7种抗生素的耐药情况,以头孢硝噻吩(Nitrocefin)棒测定β-内酰胺酶的产生率。结果β-内酰胺酶的产生率为25%,Hi对氨苄西林的耐药率为22.22%,对头孢曲松、头孢呋辛、头孢克罗、氨苄西林/舒巴坦耐药率为0,对氧氟沙星、阿齐霉素的耐药率均为2.78%。氨苄西林的MIC90为24 mg/L,要远远高于其他抗生素。结论深圳地区Hi的β-内酰胺酶的产生率和氨苄西林的耐药率都较高,其作为首选药物的地位受到了严重的挑战,提醒临床医生合理地使用抗生素,延缓细菌耐药性的产生。     

农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化体系的优化

本实验以玉米品种HiⅡ(PA*PB和PB*PA)的幼胚为材料,用根瘤农杆菌菌株EHA105和LBA4404对幼胚进行转化,将PTF102-GUS导入玉米中,借助GUS基因的瞬时表达率,对影响农杆菌介导玉米幼胚转化的部分因素进行优化。研究表明使用EHA105侵染HiⅡ幼胚;农杆菌浓度在OD550=0.3,侵染时间在10min;幼胚大小为1.0mm时,GUS染色瞬时表达率较高。     

甘蔗梢腐病串珠镰孢菌T-DNA插入突变体的构建及其鉴定分析

甘蔗梢腐病是世界范围内重要的经济作物真菌性病害,其病原真菌为串珠镰孢菌(F.moniliforme)。通过农杆菌介导的遗传转化构建了串珠镰孢菌(菌株CNO-1)的突变体库,并通过Hi TAIL-PCR和菌落形态对突变体库进行鉴定。结果构建了库容量为956的CNO-1突变体库。从CNO-1突变体库中随机挑选6个转化子,进行PCR鉴定,结果均为阳性。CNO-1突变体库中,筛选出生长速度减慢突变体22个,色素变异突变体1个;对47株突变体进行Hi TAIL-PCR,扩增插入位点侧翼序列,得到有效序列22条,BLAST结果显示,T-DNA的22个插入位点分布在CNO-1的15条基因组scaffold上;生长速度减慢突变体的插入失活基因分别与细胞分裂、DNA修复、△12脂肪酸脱氢酶、E3泛素连接酶等有关。     

流感嗜血杆菌胶体金检测卡产品的性能评估

[目的]参考国家药监局体外诊断第三类医疗器械产品的注册检验要求,评估流感嗜血杆菌(H.influenzae,Hi)胶体金免疫层析检测卡的产品性能.[方法]基于双抗夹心法制备的胶体金免疫层析检测卡产品,针对其灵敏度、特异性、抗干扰性、钩状效应、稳定性等方面进行测试.[结果]制备的胶体金免疫层析检测卡产品对流感嗜血杆菌的检...     

准备进行大田试验的重组DNA植物

公司Cib一Geigy生物技木研究公司Mosanto农业公司Mosanto农业公司北卡罗林纳州立大学弗洛里达大学Mosanto农业公司Rohm&Haas公司Poimeer Hi一Bre迁国际公司美国农业部农业研究局Calgene公司 试验内容- 重组DNA玉米/引进混霉素(hygromy-c认)抗性和任葡糖昔酸酶标记基因 通过遗传工程表达苏云金杆菌(Bt(ssp.)Kurstaki)色一内毒素蛋白质的重组DNA玉米 通过遗传工程表达苏云金杆菌(Bt(ssp.)Kurstaki)各一内毒素蛋白质的重组DNA棉花-通过遗传工程表达苏云金杆菌Kurslakl两种HDI菌株卜内毒素蛋白质的重组DNA花草重组DNA花草/引进表…     

伪狂犬病病毒鄂A株包膜糖蛋白gD基因的克隆与表达

克隆了伪狂犬病病毒鄂A株编码包膜糖蛋白gD的基因并进行了序列测定 ,与国外报道的Rice株相比 ,其核苷酸序列具有 98%的同源性 ,推导氨基酸序列同源性为 97%。将此基因克隆于具有全期启动子盒的杆状病毒转移载体pSX35A中 ,构建成重组转移质粒pSX35A gD ,与致死缺失型线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV OCC- )基因组DNA一起共转染粉纹夜蛾Hi5细胞 ,经同源重组 ,获得含gD基因的重组病毒AcMNPV OCC+ gD。重组病毒经空斑纯化后感染Hi5细胞进行表达分析 ,细胞裂解物的SDS PAGE及Western Blot ting均显示分子量约 47kD的gD蛋白得到了特异性表达 ,其表达量占细胞总蛋白的 6 2 % ,表达的gD蛋白具有免疫原性。     

酵母甘油醛—3—磷酸脱氢酶(GPD)基因及其启动子的分离和鉴定

以大肠杆菌质粒pBR322为载体进行了野生型酿酒酵母(S.cerevisiae)的基因组克隆。以人工合成的寡聚核苷酸(3’GTGCGTACATAGATAGAGTA5’)为探针进行分子杂交,分离到的阳性克隆经限制性内切酶酶谱、southem杂交分析证实,插入序列中的2．1kb Hind Hi片段含有GPD基因。其中650bpTaq I片段的部分序列分析结果初步表明,该区域可能包含了高表达GPD基因的启动子。     

抗虫抗除草剂转基因玉米HiII-NGc-1的遗传稳定性分析

目的基因和目标性状遗传稳定性是转基因植物新品种选育和产业化的重要前提。以进入农业部环境释放的抗虫抗除草剂双价转基因玉米Hi II-NGc-1为试验材料,采用PCR、RT-PCR和免疫试纸条技术检测转基因玉米连续3代目的基因cry NGc和bar整合及表达的遗传稳定性,采用心叶期除草剂草铵膦抗性鉴定和心叶期/穗期亚洲玉米螟抗性鉴定实验详细分析了目标性状的遗传稳定性。研究结果表明:Cry NGc和PAT蛋白在Hi II-NGc-1中连续3代遗传稳定,高世代稳定耐受正常5倍大田除草剂草铵膦使用浓度,心叶期和穗期高抗亚洲玉米螟性状稳定,具有潜在的产业化应用价值。转基因玉米Hi II-NGc-1目的基因和目标性状遗传稳定性的明确为开展下一步生物安全评价奠定了基础,对复合性状转基因抗虫抗除草剂玉米新品种的选育和产业化具有重要意义。     

树鼩实验感染基孔肯雅病毒的研究

选用3株基孔肯雅病毒人工感染成年树鼩,进行了病毒血症、抗体动态变化、内脏组织病理改变和病毒在宿主体内定位的研究。结果表明,感染树鼩能产生2～6天的病毒血症。血凝抑制(Hi)抗体第6天产生,第30～50天达高峰:中和(NT)抗体在第10天产生,第30～40天达高峰,二者相关性非常显著(P<0.01)。补体结合(CF)抗体第14天产生,第40～50天为高峰,以后逐渐下降。第8～12天能在其脑、肺、肝、脾和肾等组织查到病毒,经病理检查这些内脏组织呈炎性改变和出血倾向,表明该病毒能侵袭树鼩各主要脏器。试验认为树鼩对基孔肯雅病毒敏感。     

食品上的应用

951847黑曲霉B60间歇培养物中钕鼻子和柠糠酸的补充"[英l/Yigitoglu,M.…/Biotechs01.Lett..1992,14(9).一831,",.,836E译自DBA,1992,11(23),92-13130] 黑曲霉B60于400rpm,30℃和1’vm在12升搅拌发酵罐(工作容积9升)中生长以生产柠檬酸,培养基含140g/I蔗糖、2.0g/l KH,PO.、2.0g/l(NH‘)4 SO.、0.5g/l MgSO.·7 Hi0、0.1ing/1 Fe 8’((NH‘)i SO‘Fei(SO‘)·24H 20)、0.1mg/l Zn2’(ZnSO.·7 H 20)和0.06mg/1 Cu”(CuSO‘·5 HlO)。检验了硫酸铵或柠檬酸的单一脉冲输送对发酵进程及最终结果的作用。 (NH.)。SO.的最适添…     

医院内鼠伤寒沙门氏菌流行株耐药质粒的分析

采用质粒及其酶切片段的指纹分析,配合以生化反应、血清学鉴定、最小抑菌浓度(MIC)测定,就我院一次鼠伤寒沙门氏菌的暴发流行中任选的7个菌株进行了分子分析。所有流行株均有相同的生化反应谱,血清学鉴定均属0．Hi型。按Mic结果及质粒指纹分析,可将这七个株分成两组,甲组：5个株耐青霉素(PC>500mg/ml),氨苄青霉素(AP,>500μg/ml),头孢唑啉(Cz,16μg/ml),红霉素(Er,>500μg／ml),氯霉素(Cm,250μg／ml),链霉素(Sm,>500μg／ml),卡那霉素(Km,>500μg/ml)及四环素(Tc,>500μg／ml)8种抗生素。     

基于SSR的梭罗草遗传多样性分析

为保护和利用小麦近缘野生植物梭罗草[Roegneria thoroldiana (Oliv.)Keng],利用SSR技术对采集于青海、西藏的12个梭罗草居群进行遗传多样性分析.结果表明,各个居群内的遗传多样性指数(Hi)变异范围为0.34～0.57,居群总体的遗传多样性指数Ht=0.64,平均居群内多样性Hs=0.49,居群间多样性Dst=0.15, 居群间的变异占总变异的Gst=23%, 大部分(77%)遗传变异存在于居群内部,居群间的基因流Nm=0.83.进一步的聚类和相关分析表明,居群的遗传多样性指数与海拔呈显著正相关,与经度呈显著负相关.上述结果表明,对于梭罗草的保护和利用应优先考虑分布于高海拔区域的居群.     

周口店龙骨山新洞钙质沉积铀系年代

新洞(北京猿人遗址第4地点)钙质沉积地层厚2米。钙华的230Th/234U年龄为距今17.9万、13.9万、12.8万和8.8万年。新洞形成于距今20万年以前。洞内古人类开始活动时间为距今20万年以前,与猿人洞古人类活动时代上限(23-26万年)近似。 采自新洞的石钟乳和石笋样品,其生长年代为距今8-5万年。在七万多年时新洞古温度为13.2℃(石钟乳样)和13.7℃(石笋样)。至5.5万年左右,新洞地区古温度是11.9℃(石笋样)。     

杆状病毒SpltMNPV SL136蛋白的功能

先前的研究发现斜纹夜蛾核多角体病毒 (Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)基因组中Sl136表达产物具有膜融合功能。通过RT PCR检测了该基因的转录时相 ;制备该蛋白质的多克隆抗血清 ,SDS PAGE、Western印迹实验证明SL136蛋白质是芽生型病毒粒子特有的蛋白质。该基因在斜纹夜蛾离体细胞系中表达产物分子量为 86、6 5kD的两条带 ,后者与芽生型病毒粒子中检测到的一条蛋白质带分子量基本一致。另外 ,细胞酶联免疫吸附测定 (cellenzyme linkedimmunosorbantassay ,CELISA)实验证明SL136蛋白可分布于重组病毒Bac Sl136和野生型SpltMNPV分别感染的Hi5、Sl zsu 1细胞表面 ,并进行了定量分析。生物测定结果表明 ,弗林蛋白酶 (furin)抑制剂对于病毒感染力没有明显的影响 ,但是抑制病毒蛋白的糖基化却使病毒的滴度大为下降     

周口店北京猿人洞骨化石铀系年龄数据——混合模式

铀系混合模式得出北京猿人在第一地点生活的年代是距今50万年到23万年。通过周口店猿人洞堆积物骨化石中 Th~(230)/U~(234)和 U~(234)/U~(232)的测定,建立铀系混合模式,给出下列年龄值:第1—3层距今23万年,6—7层距今35万年,8—9层大于40万年,12层距今50万年前或更早。一些中间层位的Th~(230)/U~(234)比值测定年龄偏低,可能是近20万年以来铀发生迁移造成的。