链球菌病类活疫苗活菌计数参考品的研制

研制链球菌病类活疫苗活菌计数参考品,可以更加科学地评价活菌计数结果的准确性和有效性。首先,制备了一批链球菌病类活疫苗活菌计数参考品,对其物理性状、纯粹性、真空度、剩余水分进行检验,并对其均一性、运输稳定性、热稳定性进行测定,另组织3家单位通过协作标定的方式对参考品活菌数进行赋值,用协作标定法统计参考品在12个月内的保存期。参考品的性状检查、纯粹检验、真空度测定和剩余水分测定结果均符合《中国兽药典》的规定;均一性试验结果显示,参考品计数结果的变异系数小于10%,均一性良好;运输稳定性试验证明,参考品在夏季和冬季用泡沫盒加冰袋的方式运输3日内数值仍能保持稳定;加速热稳定性试验验证,参考品在–20 ℃条件下保存3个月、4 ℃条件下保存21 d内均可活菌数稳定;通过协作标定,统计出参考品活菌数的赋值范围为 (8.5–12.1)×107 CFU/支;保存期试验结果证实,参考品在–70 ℃以下保存一年内活菌数可维持稳定状态。链球菌病类活疫苗活菌计数参考品,不仅可以为链球菌病类活疫苗的活菌计数实验提供参照物,而且可以用于评价马丁琼脂培养基的质量,为兽用生物制品质量控制提供保障。     

酪酸梭菌-婴儿型双歧杆菌二联活菌制剂的研究

对酪酸梭菌－婴儿型双歧杆菌二联活菌制剂的特性及功效进行研究和分析。方法：通过实验鼠进行刺激生长试验、活菌数测定、毒理试验、调节肠道菌群试验、免疫调节作用来观察制剂的作用。结果：小鼠肠道中双歧杆菌、乳杆菌、酪酸梭菌数量明显增加,高剂量能增加小鼠抗体生成细胞数。     

参照CLSIM38-A方案测定皮肤癣菌临床株对4种抗真菌药物的敏感性

目的测定并比较临床分离的皮肤癣菌对4种常用抗真菌药物的敏感性,探讨CLSIM38-A方案用于皮肤癣菌药敏试验的可行性。方法实验菌株为31株临床近期分离的皮肤癣菌。其中红色毛癣菌14株,须癣毛癣菌14株,犬小孢子菌1株,铁锈色小孢子菌1株,絮状表皮癣菌1株。4种抗真菌药物为益康唑、伊曲康唑、特比萘芬、伏立康唑。采用M38-A方案微量稀释法,并适当调整试验参数进行体外抗真菌药物敏感性试验。结果红色毛癣菌和须癣毛癣菌对以上4种药物的敏感性无明显差异。犬小孢子菌、铁锈色小孢子菌、絮状表皮癣菌对所有4种抗真菌药物的敏感性都低于红色毛癣菌和须癣毛癣菌。结论M38-A方案经过调整适用于皮肤癣菌药敏试验。     

无细胞百日咳攻击菌的制备及液氮保存方法分析

为了制备无细胞百日咳效价测定用攻击菌并用液氮进行保存,对此方法进行评价。采用原代攻击菌复苏传代后测定细菌浓度,并用蛋白胨水稀释为27亿个菌/m l,分装冻存管中。放入液氮罐内,并对液氮保存的攻击菌进行相应的检测,用统计软件计算。结果显示,此方法制备的攻击菌与传统的攻击菌无显著性差异,冻后虽攻击菌的毒力有所下降,但都在100-1000/MLD的正常范围内,且冻后0、3、6、9、12月无显著性差异。同批支间差异小,CV<5%。通过此方法制备的攻击菌稳定性好,试验结果符合《中华人民共和国药典》要求,可用于无细胞百日咳的效价测定。     

抑菌试验用于测定T-2毒素

本文从镰刀菌中提取T-2毒素,对不同的酵母菌进行抑菌试验,结果证明红酵母属(Rho-dotorula)的三个种,即红酵母(R.glutrnis)、深红酵母(R.ruber)和小红酵母(R.minuta)对T-2毒素最敏感,被定为测毒敏感菌。将抑菌试验与家兔皮肤反应试验、豌豆发芽抑制试验进行对比,结果有部分重合,但不能相互取代。由于抑菌试验具有快速、简便、准确的优点,可做为测定T-2毒素的方法之一。     

用半数变色单位法精确测定支原体活菌滴度北大核心CSCD

【目的】使用半数变色单位法实现对支原体活菌滴度的精确测定,以替代当前常用的CCU(变色单位)测定法。【方法】参考病毒滴度TCID50(半数组织细胞感染量)的标准测定方法,对早期学者提出的支原体活菌滴度指标—CCU50(半数变色单位)的测定方法进行改进,并做了重复性、敏感性试验以及与CCU的比对验证试验。为进一步验证该方法的适用性,使用其对猪肺炎支原体和鸡滑液支原体培养物进行了活菌滴度精确测定和评价。【结果】该方法可重复性良好,并具有较强的敏感性和适用性。【结论】CCU50测定法能对支原体活菌滴度进行精确评估,有望成为支原体培养工艺研究、支原体疫苗研发等方面的有效工具。     

XTT四唑鎓盐试验快速检测卡介苗活性

卡介苗生产中最重要的质检指标—活菌含量测定 ,传统固体培养计数方法时间需 2 1天以上 ,且结果有时不稳定、操作复杂。使用XTT[2 ,3 bis (2 methoxy 4 nitro 5 sulphenyl) (2H) tetrazolium 5 carboxanilide]做底物的四唑钅翁盐试验在活卡介菌的还原下快速显色 ,很好地反映出卡介苗活菌的浓度差异。实验观察在微孔培养板中反应经酶标仪测定的XTT试验非常简便易行 ,不受死亡细菌的影响 ,不受培养基的影响 ,实验重复性非常好 ,检测活性单位时间惊人地缩短为 2 4小时左右 ,检测活性范围大。此方法有潜力代替传统活菌计数法用于卡介苗生产中的活性单位测定。     

牛种布氏菌天然半抗原用于放免试验

<正> 人和动物布病的诊断,主要基于标准试验,如玻片血清凝集试验、虎红平板试验、补体结合试验和牛奶环状试验对抗体的测定。预防措施包括血清学测定和阳性动物的捕杀以及用牛种布氏菌B_(10),45/20或羊种布氏菌H_(38)、Rev-1进行预防接种。但是,接种产生的抗体不能与实际感染相区别。这     

植物根际促生菌的筛选及其对玉米的促生效应

[目的]以不同植物根及根际土壤为研究材料,进行植物根际促生菌(PGPR)的筛选,并探索其植物促生作用机制.[方法]以解磷、固氮、产氨、产IAA和拮抗3种常见病原真菌为筛选标准,测定了初筛菌株的多项促生能力,并通过对这些菌分别单独回接和多菌混接的玉米盆栽试验,测定了其对玉米的促生效应.[结果]从渭南、成阳、安康、商洛和榆林5地分离得到的158株菌中有17株茵具有上述多种植物促生作用的菌株.盆栽试验的测定结果表明:单独接种和多菌混合接种在玉米株高、根长、茎长、茎平均直径和干重方面与对照组相比较都有所增加,尤其是在多个指标上,多菌混合接种所显示出的促生效应均明显优于单菌接种.[结论]所筛选到的具有多种促生能力的菌株,可以为进一步构建植物根际促生菌(PGPR)菌群提供良好的种质资源.     

鹿血对小鼠肠道菌群及免疫功能的影响

本实验以肠道菌群检测与免疫不腹腔Ｍψ吞噬功能测定,溶血空斑试验,淋巴细胞转化试验,ＮＫ细胞活性测定等方法,初步研究了中药鹿血对抗生素造成的菌群失调性腹泻小鼠肠道菌菌及免疫功能的影响。     

羊肚菌免疫调节作用研究

观察DNFB诱导小鼠迟发型变态反应、血清溶血素测定（血凝法）、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验,结果表明,羊肚菌可以促进小鼠细胞免疫功能提高液免疫功能,促进小鼠体内抗体的产生,具有增强小鼠腹巨噬功能,是一种比较有效的免疫调节剂。     

高羊肚菌菌丝球液体培养的研究

本文探讨了高羊肚菌菌丝球在不同液体培养基中的生长情况。结果表明,在黄豆芽玉米玢培养基中菌丝球最多,大小均匀,菌丝生长量最大,在麦麦夫蛋白胨培养基上菌丝的糖含量最高。     

羊肚菌白霉病发生对土壤真菌群落结构的影响

【目的】了解羊肚菌白霉病发生对土壤真菌群落结构的影响。【方法】采用Illumina Mi Seq高通量测序技术,对未栽培羊肚菌土壤、正常生长羊肚菌和染白霉病羊肚菌根际土真菌群落结构进行研究。【结果】9个样品共得到393 347条有效序列。未栽培羊肚菌土壤真菌多样性指数和丰度显著大于羊肚菌根际土,染病羊肚菌根际真菌丰度和多样性大于正常生长的羊肚菌,各样品的群落组成和优势类群有较大差异。【结论】羊肚菌栽培后真菌多样性降低,白霉病发生后根际真菌种类增多,土壤真菌群落结构发生变化,优势真菌类群也产生了较大变化。     

Phylogeny and historical biogeography of true morels (Morchella) reveals an early Cretaceous origin and high continental endemism and provincialism in the Holarctic

True morels (Morchella, Ascomycota) are arguably the most highly-prized of the estimated 1.5 million fungi that inhabit our planet. Field guides treat these epicurean macrofungi as belonging to a few species with cosmopolitan distributions, but this hypothesis has not been tested. Prompted by the results of a growing number of molecular studies, which have shown many microbes exhibit strong biogeographic structure and cryptic speciation, we constructed a 4-gene dataset for 177 members of the Morchellaceae to elucidate their origin, evolutionary diversification and historical biogeography. Diversification time estimates place the origin of the Morchellaceae in the middle Triassic 243.63 (95% highest posterior density [HPD] interval: 169.35-319.89) million years ago (Mya) and the divergence of Morchella from its closest relatives in the early Cretaceous 129.61 (95% HPD interval: 90.26-173.16) Mya, both within western North America. Phylogenetic analyses identified three lineages within Morchella: a basal monotypic lineage represented by Morchella rufobrunnea, and two sister clades comprising the black morels (Elata Clade, 26 species) and yellow morels (Esculenta Clade, 16 species). Morchella possesses a Laurasian distribution with 37/41 species restricted to the Holarctic. All 33 Holarctic species represented by multiple collections exhibited continental endemism. Moreover, 16/18 North American and 13/15 Eurasian species appeared to exhibit provincialism. Although morel fruit bodies produce thousands of explosively discharged spores that are well suited to aerial dispersal, our results suggest that they are poorly adapted at invading novel niches. Morels also appear to have retained the ancestral fruit body plan, which has remained remarkably static since the Cretaceous.     

尖顶羊肚菌菌丝体水提液对实验型胃溃疡的作用

研究尖顶羊肚菌菌丝体水提液对4种实验型胃溃疡模型的治疗作用。以大鼠幽门结扎致胃溃疡为模型,测定各组胃粘膜损伤指数、胃液分泌量和胃酸浓度;以大鼠乙酸烧灼、小鼠乙醇致胃粘膜损伤和小鼠水浸应激胃溃疡为模型,分别测定溃疡面积。结果表明尖顶羊肚菌菌丝体水提液可以不同程度抑制胃酸的分泌,减少胃液量,减少溃疡面积,促进溃疡面积的愈合,因此尖顶羊肚菌菌丝体水提液具有抗实验型胃溃疡的作用。     

基于遗传算法的羊肚菌液体发酵动力学模型的建立

发酵动力学研究是实现发酵过程最优化控制及发酵过程放大的前提条件。本研究对羊肚菌液体深层发酵动力学进行了研究, 在Matlab软件平台上, 应用遗传算法对比了真菌生长较常用的Monod与Logistic方程在描述羊肚菌生长动力学时的优劣, 并对羊肚菌的生长、胞外多糖产生和基质消耗模型进行了参数估计。结果表明, Logistic方程与试验数据拟和情况更好, 并给出了羊肚菌液体深层发酵的动力学模型具体形式, 经验证, 模型的平均误差为5.8%。利用遗传算法选择羊肚菌动力学模型, 并进行参数估计与其他方法相比具有快速、搜索面广、接近全局最优解的特点, 在处理分批发酵动力学问题上具有不可比拟的优势, 发酵动力学模型的建立为发酵过程优化及放大奠定了基础。     

免疫酶染色法对羊肚菌菌丝特异性靶位的初步定位与分析

为了解羊肚菌(Morchella esculenta)菌丝抗原物质的识别特征及其在菌丝上的分布,利用免疫酶染色法(Immunoenzyme assay,IEA)对两株抗羊肚菌单克隆抗体(W8C9,C6A8)在羊肚菌菌丝上对应的特异性结合靶点进行定位研究。初步确定了两株单克隆抗体对应的羊肚菌菌丝抗原在菌丝上的位置,并确定了W8C9、C6A8和兔多克隆抗体稀释后适合工作的体积分数分别为5.0%、4.5%、4.0%。     

羊肚菌属分子系统学研究进展*

简要介绍羊肚菌属系统学研究现状,概述了当前国内外羊肚菌属分子系统学研究进展。     

国产羊肚菌菌株的RAPD鉴别

对国内各地收集和采集分离到的 15个羊肚菌菌株和 1个子实体对照进行了RAPD分析 ,实验筛选的 6个引物对宽圆羊肚菌 (MorchellarobustaBond .)子实体及其分离菌株的DNA指纹完全相同 ,引物OPD - 0 8扩增的RAPD谱带能够将 15个供试羊肚菌菌株完全区别开来 ;聚类分析结果显示 :其中一菌株与别的菌株相似系数极低 ,可能为一杂菌菌株 ;其余菌株在相似系数 0 75 44时 ,可分为 6个大的类群 ,说明供试菌株间存在较大的遗传差异。     

尖顶羊肚菌液体培养基质与条件的研究

通过对尖顶羊肚菌液体培养基质与条件的研究,明确其菌丝生长的最适pH值、最适温度、适宜光照条件、适宜葡萄糖和蛋白胨浓度、适宜培养基,以便应用于尖顶羊肚菌液体菌种的生产和工业发酵。结果表明:菌丝的最适生长温度为2 5℃;最适生长pH值为6 ;葡萄糖和蛋白胨最适浓度分别为2 0 0g/L和10g/L ;菌丝在黑暗环境下生长良好,光照对菌丝生长具有抑制作用;用胡萝卜酵母膏培养基振荡培养形成的菌丝球多,菌丝生长量大;菌丝球在不同培养基中生长,可引起培养液pH值的上升或者下降;菌丝球可利用培养基内的氨基酸,使氨基酸降解,在胡萝卜酵母膏培养基中振荡培养8d的菌液总氨基酸含量较原液减少了36 71% ,亮氨酸、异亮氨酸和甲硫氨酸含量的下降幅度最大