小麦花药培养中花药密度效应的初步研究

在大麦花药培养中,花药密度对花粉愈伤组织产量有明显影响。欲得大量的愈伤组织,每毫升液体培养基上需接种60枚甚至更多的花药。利用条件培养基,可提高单位体积培养基上花药有效密度,进而提高大麦花粉愈伤组织的产量。在水稻花药培养中,花粉愈伤组织产量也有随花药密度而提高的趋势。     

大麦花药培养中若干因素对愈伤组织形成的影响

在大麦花药培养中,提高花粉愈伤组织产量的关键在于低温预处理(Huang and Sunderland 1982)及花药因子(许智宏等1984)的利用。后者包括使用条件培养基或较高的接种密度。在培养基中附加较高浓度的肌醇(0.1％)亦能大幅度地提高花粉愈伤组织的产量(Xu and Sunderland 1981)。在     

在低温预处理及花药培养期间高氯酸汞处理对大麦花药生产力的影响

在春大麦(sabarlis品种)幼穗低温预处理过程中,使用乙烯的吸收剂高氯酸汞溶液处理,明显提高花药培养中花药的诱导率,以及每个花药形成的愈伤组织数目。在花药培养中,此种处理仅增加花粉愈伤组织的形成,而对花药的诱导率影响不明显。     

红掌花药培养

研究了发育时期、基因型、培养基、低温预处理等因素对红掌花药愈伤组织诱导的影响.结果表明,小孢子中晚期是红掌花药培养的适宜时期;基因型对花药膨大率有显著的影响;不同培养基上的Sweet Dream和Jungle Bush的花药膨大率差异显著;低温预处理明显提高Sweet Dream的花药膨大率.从Sweet Dream花药诱导出致密和疏松两种愈伤组织,两种愈伤组织芽分化率和生根率存在明显差异,致密愈伤组织的小苗生根率为95.00%,而疏松愈伤组织的小苗生根率为30.00%.Sweet Dream的花药再生植株与叶片再生植株在形态特征上有差异,染色体鉴定结果表明,花药再生植株均是二倍体.     

改进水稻花药培养方法的途径

用液面漂浮方式培养水稻花药,研究了培养基的蔗糖浓度、激素成分、附加秋水仙碱对花粉愈伤组织的诱导、分化及花粉植株倍性的影响。提出改进水稻花药培养方法的途径,其要点是:用液体培养基培养花药;在培养初期,调整培养条件以增加对等核分裂花粉数和提高染色体加倍频率;在多细胞团花粉突破花粉壁生长之前,将其从开裂的花药中分离出来进行单花粉固着培养形成愈伤组织,并使愈伤组织在生长的早期转向分化。     

油菜花药培养研究(初报)

试验了不同培养基配方和不同的激素及附加成分对油菜花药培养的影响。结果表明,对于诱导油菜花药形成愈伤组织,Miller和B_5,配方较好。但在大多数情况下,愈伤组织易从花丝及药隔组织形成。在MS培养基中加入适量的BA和NAA以诱导芽的分化,明显优于用激动素及IAA的组合。诱导培养基的组或对形成的花药愈伤组织随后的分化有明显的影响。温度是提高小苗移栽成活率的关键因素。由甘蓝型油菜×白菜型油菜的F_1植株的花药培养诱导形成的部分植株中出现了明显的分离现象。对花药培养诱导形成的植株的第二代群体的观察表明少数植株的后代群体表现整齐一致。这些结果说明在油菜的花药培养中可能有少数花粉植株的形成。讨论了油菜花药培养中存在的问题。     

BA对大麦花药培养中药壁的衰退和植株再生频率的影响

用含20ppm 6-BA的0.1％吐温-80溶液喷施花粉为单核前期的大麦上部叶片和穗部,明显影响大麦花药培养效率。实验结果表明:1)BA处理可明显延缓培养花药的药壁衰退进程。2)BA处理后的花药,在培养期间,其死亡的花粉数比对照大大减少,相反其双核或多核的花粉数比对照明显增加。3)BA处理虽然没有促进大麦花粉愈伤组织的诱导率,但显著地促进愈伤组织的生长。提高愈伤组织成长率,增加可转入分化培养的愈伤组织块数。4)BA处理促进愈伤组织的再分化,尤其是绿苗的分化。     

大麦花药培养技术研究进展

花药培养的原理是将雄配子由正常发育转向一个异常发育途径,促进愈伤组织或胚状体的形成,最终再生绿色小植株。花药培养再生的小植株往往是单倍体,经染色体加倍可形成可育的纯合二倍体。因此,花药培养提供了一个对育种很有价值的快速诱导纯系的方法(Lrz等1988)。通过花药培养诱导产生大麦单倍体植株的成功报道最早见于七十年代初期。一直以来,特别是近几年来,一些学者已就影响大麦花药培养技术的基因型、预处理、培养基以及培养方法等诸因素作了许多探索性研究,使大麦花药培养技术得到了明显的改进。目前,已有人能从任何一个品系或品种(包括几年前仅产生白化苗的品种“Bonanza”)得到绿色小孢子植株,并且获得了每100个被培养花药生产100株绿色植株的产量(Kao等1991)。     

低温处理对水稻花药愈伤组织的诱导、分化的影响

近年来,花药培养工作在我.国广泛开展并取得一定的成果。但总的说来,培养水稻花粉植株的成功率还不高,这就直接影响花药培养单倍育种工作的效率,因此需进一步提高水稻绿苗分化率。目前一些单位采用低温处理各种作物的花药,以提高花药愈伤组织的诱导率。但具体做法和效果并不一致。胡忠等认为在10℃低温下(48—62小时)存放稻穗是暂时保存材料的有效方法,但并不能显著提高愈伤组织诱导率。钟华鑫等认为4～5℃低温对提高小麦花药愈伤组     

盾叶薯蓣花药培养及单倍体植株的获得

以处于单核期的盾叶薯蓣花药为材料,经愈伤组织途径成功获得单倍体盾叶薯蓣新材料。对盾叶薯蓣花药培养、植株再生过程的研究表明:来自不同居群的外植体对花药愈伤组织诱导有显著影响;W14是适合花药愈伤组织诱导的基本培养基;花药愈伤组织增殖和分化的适宜培养基为:MS基本培养基 BA2.0mg/L IAA0.2mg/L;生根培养基为添加了IBA2.0mg/L、NAA0.4mg/L和0.5g/L活性碳的MS培养基。以流式细胞仪和根尖染色体压片法检查花培植株的结果表明,有8%～12%的个体为单倍体。实验结果为进一步开展单倍体育种及相关理论研究提供了材料和技术基础。     

水稻花粉植株的诱导及其后代观察

研究了水稻(Oryza sativa)花药的离体培养及其花粉植株后代的表现,得到如下结果: 1.用加有2,4-D 1—5毫克/升的Blaydes培养基培养水稻花药,诱导出水稻花粉愈伤组织。采用花粉处于单核期的花药进行培养比较合适。 2.诱导愈伤组织成苗,以二次诱导法效果较好。即将愈伤组织种植在低浓度激素的培养基上(IAA 0.05—0.5毫克/升,激动素1—2毫克/升),在此培养基上分化快,芽点多,但芽不易伸长;芽点出现后再移到激素浓度较高的培养基上(IAA 2毫克/升,激动素4毫克/升),很快出现幼苗。 3.水稻花粉植株二代,田间表现和室内分析结果表明基本整齐一致,没有分离。杂种F_1花粉植株后代在许多性状上超过双亲,有选种价值。说明水稻花药培养用于育种是可能的。     

小黑麦花药培养的研究

对八倍体小黑麦(Triticale)的花药培养条件进行了研究,得到如下结果:1.基本培养基N_6和 B_优于 MS。2.培养基中的蔗糖浓度在6—9%为最好。3.2,4-D 浓度用0.5—10毫克/升,一般采用2毫克/升。4.培养基中加入0.5%的活性炭有利于提高花粉愈伤组织的频率。5.花药在不加琼脂的液体培养基上漂浮培养,比在固化培养基上培养效果更好。6.光照或黑暗培养对花粉愈伤组织的形成并无显著地影响。7.在接种前将穗子插入 N_6培养基(无琼脂)中进行冷冻处理,和插入水中的对照相比花药的出愈率更高。     

小麦不同发育时期花药对离体培养的反应

花药的发育时期是决定花药培养时诱导频率高低的重要因素。据文献报道,绝大多数植物只在花药中小孢子处于单核期至二核期时才对离体培养有反应(即产生愈伤组织),只有少数植物能从四分体时期的花药获得花粉胚,如烟草、毛地黄、油菜、大麦、野生二粒小麦、玉米     

灯盏花花药培养初报

对灯盏花花药培养诱导单倍体植株进行了研究。结果显示：灯盏花花药愈伤组织培养以附加60 g·L^-1蔗糖较好,B5和MS培养基相比较,MS培养基较适宜,在MS+NAA 1.0 mg·L^-1+BA 0.5 mg·L^-1+蔗糖60 g·L^-1的培养基中,花药愈伤组织诱导率可达36.03%。将愈伤组织转移到MS+6-BA 1.0 mg·L^-1中继代增殖后,经芽苗分化、生根后可得到完整植株。再生植株根尖细胞经细胞学鉴定存在单倍体。     

毛白杨优良无性系‘LM50’花药培养植株再生体系建立*

毛白杨‘LM50’具有速生、抗逆、不飞絮等优良特性,是木本植物进行遗传转化的理想材料。长期无性繁殖会导致优良性状衰退,在进行组织培养时,往往出现外植体不定芽分化和生根困难等问题。通过花药培养可以在较短时间内使毛白杨复幼,从而消除因外植体老化带来的负面影响,为转化研究提供理想的材料。与此同时,期望通过花药诱导创制单倍体植株,为基因组学研究和倍性育种提供材料。以山东冠县毛白杨基因库的‘LM50’为试验材料,对其花药发育时期与花芽形态的关系进行鉴定,选择单核靠边期的花药进行试验,探究了生长素和细胞分裂素在花药愈伤组织形成、不定芽分化及不定芽生根中的作用,建立了毛白杨花药离体再生体系,采用流式细胞仪和染色体压片计数法对诱导获得的再生植株进行了倍性鉴定。进一步利用花药培养再生植株的叶片建立了分化率高、生根率高的植物再生体系。小孢子发育时期与花芽外部形态特征对比表明,花芽长度为(1.98 ± 0.06) cm,1/4花序露出芽鳞的花芽,此时小孢子大部分处于单核靠边期;选择处于此时期的花药诱导形成愈伤组织,愈伤组织诱导率最高的培养基为H + 1.00 mg/L NAA + 1.00 mg/L BA,诱导率约为28.89%;愈伤组织进一步分化为不定芽,最佳分化培养基为MS + 0.05 mg/L NAA + 0.50 mg/L BA,分化率约为22.23%;不定芽接种至生根培养基,最佳生根培养基为1/2 MS + 0.30 mg/L IBA,生根率约为93.30%;利用流式细胞仪和染色体压片法对花药培养的27株再生植株进行倍性鉴定,鉴定植物均为二倍体;再生植株叶片分化成芽的最佳培养基为MS + 0.10 mg/L TDZ + 0.10 mg/L NAA + 0.50 mg/L BA,分化率高达92.23%。该叶片分化产生的不定芽的生根培养基与愈伤组织诱导不定芽生根的培养基相同,生根率一致。研究获得了毛白杨‘LM50’花药诱导再生植株,并建立了再生植株的叶片培养体系,可用于该优良无性系的快速繁育和毛白杨的遗传转化研究,为毛白杨的分子设计育种奠定了基础。     

籼稻花药培养的研究——提高愈伤组织诱导率与分化率及根芽分化

3年来通过对籼稻(Oryza sativa subsp.hsien)花药培养的研究,愈伤组织的诱导率从0.2%提高到平均为2.85%,最高达18.75%;绿苗分化率从5%以下提高到平均为13.1%最高达到45.5%。在6个籼稻品种、38个籼×籼杂种中成功地诱导出了绿苗。本文着重研究了提高诱导率的有关因素。以单核晚期花粉的花药愈伤组织诱导频率最高。籼稻花粉去分化过程相对地要求较低浓度的培养基,籼稻花药对高浓度的改良 RM-1964培养基完全没反应。用杂种的诱导率较亲本材料为高。以易于诱导愈伤组织或易于分化绿苗的品种作亲本的杂种后代,诱导率与绿苗分化率亦较高。籼稻形成愈伤组织的高峰是在接种后的50—60天之间。愈伤组织分化的高潮是在转移后10—30天之间。籼稻愈伤组织的分化以先分化根的类型最多,在先分化根的愈伤组织中有36.74%能再分化出芽来。     

癸培养基的研制及在小麦花药培养中的应用研究

在多年的小麦(Triticum aestivum L.)花药培养育种及对多种培养基应用研究的基础上,从调整培养基的大量元素和微量元素入手,建立了癸培养基。经过L_(16)(4~5)正交实验,筛选出NH_4N0_3、KNQ_3、MgSO_4、MnSO_4在培养基中较优的配比。在培养基对比实验中,癸培养基的愈伤组织平均诱导率分别比C_(17)、W_(14)、N_6培养基提高了30.31％、50.60％和57.96％,且对不同的杂交组合都能表现出优越性。在癸培养基中附加0.9mg/L REA(rare eaxth addition,稀土元素附加剂),可使小麦花药愈伤组织诱导率提高54.25％～64.07％,并对愈伤组织的生长有促进作用。     

应用多因子试验的方差分析筛选亚麻花药培养基

亚麻花药培养工作与育种工作结合的关键在于筛选亚麻花药培养基,提高亚麻花药出愈率和愈伤组织的成苗率。为了确定培养基中主要因子水平,我们采用了多因子试验方差分析。材料和方法该试验采用品系为Fibra×λ-1120。由我所育种室单倍体组配制,其中Fibra引自荷兰,λ-1120引自苏联。F_1代用4万伦琴钴60照射,其第四代材料用于本试验。该品系为兰花,株     

大豆生物工程研究进展

本文概述了大豆的细胞组织培养、原生质体培养以及遗传转化等方面的研究进展。1.细胞、组织培养尹光初等通过花药培养诱导出完整的花粉植株,并对离体花药的雄核发育进行了研究,认为大豆花粉植株的诱导频率受遗传型、发育状况、培养基、培养条件等因素的影响,低温预处理(3—5℃)5天左右有助于花粉的启动。值得注意的是大豆离体花药的愈伤组织大都起源于体细胞。用 PFP(对氟苯丙氨酸)或活性碳能抑制这些愈伤组织的产生,但几乎也抑制了     

菘蓝花药培养及单倍体的诱导

探讨菘蓝花药处于单核晚期的形态指标,并以适宜发育时期的花药为外植体,进行花药培养及单倍体诱导。实验结果表明,4℃低温处理2d后,在含有6-BA0．5mg·L-1和NAA1．0mg·L-1。的Ms培养基上,花药愈伤组织的诱导率为23．35％;将其转接到Ms附加6．BA1．0mg·L-1,NAA0．5mg·L-1的分化培养基上,80．00％以上的愈伤组织可以诱导产生不定芽;再将分化出的试管苗转接到1／2MS＋NAA1．0mg·L-1的生根培养基上,3d左右即可获得完整植株。经叶边缘压片检查染色体数目,花药培养所得的弱小绿苗为单倍体植株。