流行性乙型脑炎病毒皮下感染小白鼠后脑组织中抑制物质的初步观察

继Issacs&Lindenmann二氏发现用灭活的流感病毒处理鸡胚绒毛尿囊膜能产生干扰素以来,已证明若干人类病毒在组织培养系统或动物亦能产生干扰素或类干扰素(病毒抑制物质)。其中包括大病毒(如牛痘病毒)和小病毒(如脊髓灰白质炎病毒);含DNA的病毒和含RNA的病毒。这说明病毒引起细胞产生这种抵抗感染发展的物质的性能是很普遍的。然而,关于流行性乙型脑炎病毒干扰素尚未见有报告。     

干扰素

1957年,Isaacs等在研究流感病毒的干扰现象时,将灭活的流感病毒与鸡胚绒毛尿囊膜块一同培养,再用活的流感病毒攻击,发现病毒繁殖被抑制。说明灭活的流感病毒作用于细胞后,细胞产生了一种干扰病毒繁殖的物质,当时称此物质为干扰素。     

干扰素研究及应用进展

1957年,英国科学家Isaacs和Lindenmann利用鸡胚绒毛尿囊研究流感干扰现象时,发现一种能够干扰病毒繁殖的物质,称之为干扰素（IFN）,由于干扰素对许多疾病有很好的治疗作用,一直是医学领域研究的重要物质之一。现在干扰素已成功地用于肝炎、肿瘤治疗等方面。为了充分发挥干扰素的作用,人们稍用基因工程的方法来对干扰素的产量及功效进行改进,已达到更好的应用,因此基因工程干扰素越来越多地成了研究的重点。     

疫苗

<正> 考虑了用鸡细胞生产人病毒疫苗问题。使用30个11日龄Spafas Cofal种的无马立克病毒的有胚鸡蛋的鸡胚为原始细胞悬液,并使用Cutodex3微载体。培基中含胎牛血清,或胎牛血清、鸡血清和tryptose pho-sphate肉汤,以及组织培养瓶或     

人外源性干扰素的研究——Ⅰ.人全血细胞干扰素诱生条件的研究

以新城鸡瘟病毒为诱生病毒,用制备冻干血浆剩余的血细胞试制干扰素。制备方法为全血细胞法,每200毫升血液的血细胞可制备200毫升粗制干扰素,效价大多数在每毫升1000—2000单位之间。用人肺纤维母细胞 SL?株为检定细胞,以滤泡性口腔炎病毒为被干扰病毒,建立了干扰素的检测系统,可较稳定地测定干扰素效价。并对制备干扰素的条件包括诱生病毒剂量,培养液成分以及加液量等进行了研究。     

禽网状内皮增生病病毒在鸡成纤维细胞培养上的长期无细胞病变感染

鸡胚及鸡胚成纤维细胞(CEF)培养已广泛地用于病毒学研究及许多种病毒疫苗的生产。鸡胚及CEF培养中的潜在病毒感染可干扰病毒学研究及疫苗质量。禽网状内皮增生病病毒(REV)是在免疫学上不同于禽白血病病毒的一群逆转录病毒,该群病毒的成员可分别在火鸡、鸡、鸭等禽类引起肿瘤、免疫缺陷综合症、生长迟缓等病理变化。在美国的一些流行病学调查表明,将近20％的鸡群有REV感染,虽然由其引起的经济损失还不清楚。在江苏省调查的三个鸡场中,也发现有一个存在REV感染。     

流行性乙型脑炎病毒灭活程度与诱发产生干扰素能力间的关系

1．本文报告了乙型脑炎病毒经56—58℃或37℃加热灭活和福尔焉林灭括后,接种鸡胚单层捆胞不能产生干扰素,不表现有自家干扰现象,而只有当灭活材料残留有活病毒 时才能分离到干扰素。 2．由于乙型脑炎病毒经加热灭活后丧失其产生干扰素和引起自家千扰的能力,以及结合干扰素对温度稳定性的特性,这就为采职加热灭活处理此类病毒干扰素提取方法提供了依据。达一方法较pH2透析法快速、简便。     

随机引物PCR扩增鸡胚致死孤儿病毒DNA的研究

在电镜下观察鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒时,另看到一大小为70—80nm,无囊膜,20面体对称的病毒颗粒。为了解该污染病毒,作者挑选了4条随机引物对此未知病毒分别进行反转录PCR和直接PCR扩增,结果共扩增出3条基因片段,经测序(一个反应)后分析与禽腺病毒1型——鸡胚致死孤儿病毒基因组部分序列同源性分别高达99．5％、99．6％和99．5％。从而得知鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒受到了鸡胚致死孤儿病毒的严重污染。     

随机引物PCR扩增鸡胚致死孤儿病毒DNA的研究

在电镜下观察鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒时,另看到一大小为70~80nm,无囊膜,20面体对称的病毒颗粒.为了解该污染病毒,作者挑选了4条随机引物对此未知病毒分别进行反转录PCR和直接PCR扩增,结果共扩增出3条基因片段,经测序(一个反应)后分析与禽腺病毒1型--鸡胚致死孤儿病毒基因组部分序列同源性分别高达99.5%、99.6%和99.5%.从而得知鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒受到了鸡胚致死孤儿病毒的严重污染.     

鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒效果研究

通过PCR从三黄肉鸡的肝脏基因组中扩增了鸡α干扰素(ChIFN-α)全长基因。序列分析表明ChIFN-α基因全长582bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因(489bp),利用基因重组技术构建了E.coli/pET-28a( )-IFNα,使IFN-α置于pET-28a的T7启动子下游并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag融合。经酶切鉴定,DNA测序证实重组质粒构建正确;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE,Western-blot分析证实表达出22kD左右的融合蛋白,表达的蛋白以不溶性的包涵体形式存在并且具有良好的免疫学活性。提纯的包涵体纯度可达70%以上,用镍亲和层析方法纯化蛋白则可达到95%。经透析复性后的蛋白在鸡胚成纤维细胞上能够抑制H9N2禽流感病毒的复制。鸡胚试验中重组干扰素抗病毒效果好在H9N2禽流感病毒攻毒组中,能保护鸡胚并使其孵出率达到100%的重组干扰素最小蛋白含量为2μg;重组干扰素对新城疫病毒复制也有一定的抑制能力,延迟该病毒复制时间为12h至48h;雏鸡试验表明重组干扰素也能较好地抵抗H9N2禽流感病毒对雏鸡的感染。两组试验均表明,亲和层析纯化蛋白是包涵体蛋白活性的20倍左右。     

退热1号口服液抗4种病毒的实验研究

采用病变抑制法和血凝试验在鸡胚和2种细胞培养上测定了中成药退热1号口服液对4种病毒的抑制作用。试验结果表明,退热1号口服液在浓度为1:2(原液浓度为每100毫升含生药量245克)以下时,对鸡胚和细胞无毒性作用。浓度在1:4—1:32时,对流感病毒、呼吸道合胞病毒和巨细胞病毒有较强的抑制作用,但对腺病毒无抑制作用。     

仙苔病毒诱导细胞融合效力的研究

用瓦克(Walker)256-大白鼠未分化腺癌细胞和鸡红血球二种细胞来研究仙苔病毒诱导细胞融合的效力、与鸡胚尿囊液,病毒的血凝单位(HAU),病毒的不同稀释度、病毒在鸡胚中繁殖的时间,分布于不同密度梯度离心带的病毒颗粒,及病毒毒种的关系;并比较了不同细胞系统对仙苔病毒融合效力的影响,提出了融合因子存在于病毒颗粒本身,而不似存在于尿囊液中。文中从细胞融合这一角度,认为同一病毒毒种繁殖出来的子代是不同质的,有高融合效力的和低融合效力的病毒颗粒。HAu不能反映各种不同融合效力病毒颗粒的含量,因而其与融合效力不直接相关。病毒在鸡胚中繁殖的时间及毒种的质量,影响病毒子代的融合效力。病毒的不同稀释度和不同细胞系统影响病毒的融合效力,但这种影响不是绝对的,而是相对。     

重水（D2O）对流行性乙型脑炎病毒在鸡胚细胞繁殖的作用及其机制的研究

在流行性乙型脑炎病毒——鸡胚单层细胞系统研究了重水（D2O）对病毒的作用和作用的机制。在经30—40%重水处理的细胞繁殖的病毒感染滴度有明显的增高。实验证明,这种感染滴度的增高不是由于细胞敏感性的增加。发现有两个因素与重水的上述作用的机制有关:1)重水处理的细胞繁殖的病毒对热（50℃）稳定性有明显的增高;2)重水处理的细胞产生干扰素的滴度有一定的下降。重水处理的细胞中繁殖出的病毒对热稳定性增加这一事实指出,病毒结构中的氢原子被氘原子取代后,病毒的结构趋向于稳定。这一结果将有助于阐明热灭活病毒的机制和病毒结构与功能的关系,对于提高病毒的感染滴度和保存病毒亦可能有实际用途。     

细胞源与鸡胚源传染性支气管炎病毒激活JAK-STAT信号通路的差异性研究

鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)对鸡的呼吸道、肾脏和输卵管等器官造成严重损伤,主要引起鸡产蛋率下降和雏鸡死亡.目前通过鸡胚传代获得IBV疫苗株和流行毒株.IBV Beaudette株是目前实验室研究的经典毒株,已经适应人源和猴源细胞,可利用Vero细胞进行制备.有研究表明,IBV感染延迟干扰素的表达,并对JAK-STAT信号通路具有拮抗作用.本研究中发现,通过Vero细胞制备的IBV Beaudette株,在感染早期激活STAT1,通过鸡胚制备的IBV Beaudette,则不能有效激活STAT1.进一步研究发现,鸡胚传代的IBV QX株和新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)亦不能有效刺激JAK-STAT信号通路.两种制备病毒的方式分别得到不同的试验结果,推测是由于在病毒感染条件下,Vero细胞分泌到培养液中的细胞因子所致.进一步研究揭示,病毒感染条件下,细胞分泌的因子,瞬时激活了 STAT1.本研究对于病毒的制备方式对天然免疫信号通路的影响,具有一定的参考和借鉴作用.     

茜素红活体染色制作鸡胚透明骨骼标本

在筛选致畸胎药物试验中,骨骼是重点的检查项目之一。过去制作透明鸡胚骨骼标本的传统方法是:先将鸡胚浸在茜素红染液中染色24小时,再用透明液使着了色的软组织退色24小时,经脱水透明24小时后,置于纯甘油中保存,整个制作过程至少需3天时间。 为对大批实验材料同时作处理,这种整胚染色法的操作不仅麻烦,费时间和药品,而且对幼龄胚的骨化中心标本制作,更显有不足之处。染色后,再用透明液进行退色时,若时间短,软     

应当制止生产“粗制干扰素”

自从卫生部关于“粗制干扰素”的文件下达后,全国各地血站、生物制品所和许多省市县医院纷纷上马,以政府许可的形式生产这种制剂(其最低含量要求仅为每毫升1万单位)大量流入市场,用于治疗肿瘤和多种病毒病。 这种“粗制干扰素”,是鸡胚尿囊鸡瘟病毒与人血细胞(含大量红细胞)在37℃混合培养18～20小时后的上清液,再经pH2～3处理后的产物。其中除含血清蛋白外,主要成份是鸡胚尿囊蛋白和新城鸡瘟病     

用化学试剂灭活时病毒悬液感染性测定的一些特点

<正>病毒感染性灭活和在制备死疫苗时灭活控制的首要条件就是要有一适当的方法来测定灭活过程中病毒材料的感染性。对于动物病毒,广泛使用鸡胚的滴定方法。 结果可用Reed和Muench的方法测算。该法是将每一稀释度的病毒材料接种若干个鸡胚并记录感染鸡胚的数量。随着稀释度增加,受感染的鸡胚数量在一定稀释度时开始减少。从而可以计算出原始材料中病毒的滴度。     

H3N2v疫苗病毒的鸡胚适应性突变能提高病毒收量,而又不失去抗原性和免疫原性

<正>最近发现的人畜共患H3N2型变异甲型流感病毒(H3N2v)已导致有记录的343例与猪接触相关的人类感染。需要研制针对病毒的有效疫苗,这些病毒可能获得了在人群中的遗传稳定性。然而,从人体中分离的病毒在鸡胚中不能良好复制,这构成了基于鸡胚的疫苗生产的障碍。为了解决这个问题,我们想得到表面蛋白的鸡胚适应性突变以在保留免     

正常状态和抗病毒状态的HeLa细胞翻译小鼠干扰素mRNA能力的比较

从NDV病毒诱导的Lpa细胞中分离的小鼠干扰素mRNA能在完整的HeLa细胞中翻译,而且翻译时小鼠干扰素在HeLa细胞中的生产有较好的重复性,平均产量为72单位/毫升。然而在用人的干扰素处理HeLa细胞后,处在抗病毒状态的HeLa细胞就不能再翻译小鼠的干扰素mRNA。这一现象可能与干扰素的抗病毒机制有关。     

甲型流感病毒各代表株在鸡胚腎组培养上的表现

一、甲型流戚病毒各代表栋均能良好地在鸡胚肾组织培养氅殖：PR8、FMl、洛57—4、兰生60—2等株EID∞一般可达到5．0—6．0个对数,但沪防60一l梢低;多数毒株均能产生明显的细胞病变;病毒在戚染鸡胚肾组织培养后32—48小时为繁殖高壅。 二、甲型流戚病毒各代表株均能良好地在端胚肾组织培养中传代适应,在最初几代EID,。及血凝湔虔逐渐增高,以后维持在一定的水平。 三、利用血球吸附试验测定流戚病毒在鸡胚肾组织培养的繁殖滴度,是一种比较敏感和可靠的方法。 四、在鸡胚肾组织培养传代适应的病毒株与原株之同的抗原性及对非特异性抑制素的敏感性无显著的差别。 五、关于鸡胚肾组织培养与人胚肾、猴肾组织培养之间对流成病毒的敏感性的差异及鸡胚肾组织培养的实用价值进行了讨论。