嗜热四膜虫五个hsp70基因的表达分析

鉴定得到嗜热四膜虫13个含有完整保守结构域的hsp70基因,对其中5个高度相似且无内含子的hsp70基因进行表达分析。在37、39和41℃热激条件下,实时荧光定量PCR结果表明,hsp70-2基因对热激响应最敏感。在四膜虫生长、饥饿和接合生殖这3种生理或发育状态下,Microarray结果显示,hsp70-4基因恒定且高表达;在热激条件下,hsp70-4基因的表达水平随着温度的升高而略微增加,证实hsp70-4基因为热休克相关蛋白hsc70基因;克隆的hsp70-4基因全长2208bp,开放阅读框长1959bp,编码653个氨基酸。Microarray结果提示,hsp70-3可能参与四膜虫饥饿早期(0～12h)的耐受和接合生殖后期(6～10h)的新大小核形成,老大核凋亡等事件;hsp70-5可能参与四膜虫饥饿晚期(12～15h)的耐受和接合生殖早期(0～6h)的小核减数分裂、小核交换和原核(pronuclear)融合事件。Blast2GO分析表明,与hsp70-3和hsp70-5共表达的基因分别参与不同的生物学过程,进一步反映了hsp70-3和hsp70-5这两个基因在功能上是存在差异的。     

壳聚糖对香鱼溶菌酶活性和hsp70基因表达的影响

壳聚糖是一种理想的水产动物免疫增强剂和饲料添加剂。为了研究壳聚糖对香鱼非特异性免疫机能的影响,探讨其调节机体免疫功能的机理,以香鱼为研究对象,在基础饲料中分别添加0%、0.5%、1.0%、2.0%和4.0%的壳聚糖,连续投喂35 d后测定香鱼肝脏、脾脏和肾脏组织中溶菌酶活性和免疫相关基因hsp70基因表达的影响。结果表明,基础饲料中添加1.0%壳聚糖可使香鱼肝脏、脾脏和肾脏组织中溶菌酶活性显著提高,溶菌酶活性与对照分别提高了0.8倍、3.1倍和5.2倍。定量PCR分析结果表明,添加1.0%壳聚糖可显著促进肝脏、脾脏和肾脏中hsp70基因的表达量,且hsp70基因表达量与溶菌酶活性表现出一定的相关性,表明壳聚糖可通过调节免疫相关基因的表达来调节香鱼的免疫功能。     

一种新的与细胞分化相关的基因在不同组织及细胞系中表达与定位

目的　研究一种新的可能与细胞分化相关的基因在正常组织、肿瘤组织及细胞系中的表达与定位 ,初步探讨该基因的作用机制。方法　利用Northern杂交方法检测 10种人胎儿组织、6种人肿瘤细胞系、4种人的肿瘤组织及癌旁组织中该基因的表达。利用免疫荧光实验检测该基因在细胞中定位。结果　该基因在人的胎儿组织及肿瘤组织和肿瘤细胞中均有高表达 ,在正常组织及癌旁组织中表达明显减弱。癌旁组织和癌组织中的表达差异有显著性 (P <0 0 5 )。该基因在K56 2 细胞中主要定位在膜上。结论　该基因可能在细胞分化及肿瘤发生中起着重要作用     

人胰腺内分泌细胞中CD 57免疫反应性的表达

CD57是一种分子量为110 KD的糖蛋白,它是人类自然杀伤细胞(NK)和杀伤细胞(K)的特异性表面抗原。用它免疫小鼠产生的抗CD57单克隆抗体可特异性识别人的NK 和K 细胞表面抗原。本文应用ABC 免疫组织化学染色结合葡萄糖氧化酶DAB-硫酸镍铵显色技术研究了CD 57在人胰腺的表达和分布。结果发现,CD 57免疫反应(CD 57一IR)细胞主要分布在胰腺的内分泌部(胰岛),偶见于胰腺外分泌部的腺泡和导管上皮中。多数CD 57-IR 细胞呈典型内分泌细胞的形态特征。相邻切片法证明大多数Glu,SS,HPP 和PS 免疫反应细胞呈CD 57阳性。胰腺内神经纤维亦呈CD 57阳性。少数呈CD 57阳性的NK 和K 细胞散布在胰腺结缔组织中。本文对CD 57免疫反应性在人胰腺内分泌细胞中表达的意义进行了讨论。     

高温胁迫下B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70表达量的变化

为了探讨热激蛋白在B型烟粉虱Bemisia tabaci B-biotype抵抗高温中的作用,以含有B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70片段的质粒为模板,用TaqMan-MGB探针和特异性引物构建了B型烟粉虱hsp70实时荧光定量RT-PCR检测体系,并检测了37℃～45℃高温胁迫及气温变化时B型烟粉虱成虫体内hsp70表达的情况。结果表明：缓和的高温对B型烟粉虱成虫hsp70表达具有诱导作用,在37℃～41℃范围内,hsp70的表达量随着温度的升高从8.78×10⁵±6.41×10⁴ 拷贝数上升到1.99×10⁷±1.45×10⁵拷贝数,在41℃时达到最高峰;而当温度升高到43℃和45℃,hsp70表达量迅速降低。B型烟粉虱成虫hsp70的表达与昼夜气温变化有关,当上午气温从34℃上升到41℃时,hsp70的表达量从1.16×10⁵±1.48×10⁴拷贝数上升到6.29×10⁶±1.80×10⁵拷贝数;当傍晚气温下降到33℃时,hsp70表达量也下降到2.32×10⁵±7.69×10³拷贝数。因此推测,hsp70在B型烟粉虱抵抗高温胁迫方面可能具有重要作用。     

坛紫菜hsp70基因真核表达载体的构建与转化

坛紫菜是极具经济效益的大型海藻,生活在环境多变的潮间带,易受到温度、渗遗压和辐射等因素剧烈变化的影响,经常处于逆境胁迫中.热休克蛋白70(HSP70)是生物体内一种重要且高度保守的应激因子,作为分子伴侣在胁迫条件下首先被诱导出来,在逆境胁迫调节中起着重要的作用.构建紫菜hsp70基因真核表达体系对于了解该基因在紫菜抗逆过程中的作用有重要意义.利用PCR技术扩增得到大小为1.89 kb的坛紫菜hsp70基因,将其克隆至pMD18-T载体上测序.从测序正确的菌株中提取质粒,经限制性内切酶Sma Ⅰ和Not Ⅰ进行消化,将目的基因与真核表达质粒p181AINE连接,获得重组真核表达质粒p181-hsp70.通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,结果表明重组真核表达质粒p181-hsp70构建成功.制备酵母感受态,将重组质粒电激转入酿酒酵母中,酵母菌落PCR结果显示电激转入成功.     

急性出血坏死性胰腺炎早期细菌易位规律及生长抑素的头孢噻 …

目的；探讨急性出血坏死性胰腺炎细菌易位规律及生长抑素与头孢噻甲羧肟对其的影响。方法：应用去氧胆酸钠逆行胰管注射致大鼠ＡＨＮＰ模型。１，将ＳＤ大鼠随机分为模型组和对照组，１２及２４小时后采样。二，将ＳＤ大鼠模型随机分为；生理盐水治疗组，Ｓｔｉｌａｍｉｎ治疗组，Ｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅ治疗组，对照组同上。     

微生态调整疗法防治急性坏死性胰腺炎肠道细菌易位的初步观察

目的：观察双歧杆菌合剂对急性坏死性胰腺炎（ＡＮＰ）时肠道细菌易位的影响。方法：杂种犬２３只,分３组：对照组（ｎ＝７）仅作剖腹探查,另１６只复制ＡＮＰ模型后,分为微生态调理组（ｎ＝８）和ＡＮＰ组（ｎ＝８）。测定血中胰淀粉酶、内毒素,作脏器细菌培养、病理检查和肠粘膜菌群分析。结果：ＡＮＰ组胰、肠病理损害严重,血淀粉酶（ＡＭＹ）和内毒素（ＬＰＳ）持续升高。肠粘膜大肠杆菌及类杆菌数量增加,双歧杆菌和乳杆菌减少,脏器细菌培养阳性率１００％。与ＡＮＰ组比较,微生态组胰、肠病理损害减轻,肠粘膜类杆菌、大肠杆菌数量减少,双歧杆菌和乳杆菌增加,肠道微生态趋于平衡,脏器中细菌移位率由１００％降为６２．５％,数量减少１０－４０倍,血淀粉酶及内毒素水平下降２～３倍。结论：双歧杆菌合剂可减轻ＡＮＰ后肠粘膜的损害,调整菌群失调,保护肠屏障功能,对防治ＡＮＰ后肠道细菌易位和肠源性感染具有重要作用。     

急性胰腺炎大鼠腺泡细胞凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白XIP的表达

目的:研究急性胰腺炎(AP)大鼠腺泡细胞凋亡,X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达及其与疾病严重程度的关系。方法:通过胰胆管逆行注射不同浓度的牛黄胆酸钠,制备急性水肿型胰腺炎(AEP)和急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠模型,同时设假手术(SO)组为对照。收集各模型组3,6和12h标本,对胰腺组织进行病理学评分,并测定血清淀粉酶和腹水量;用TUNEL染色检测胰腺腺泡细胞的凋亡,分别RT-PCR和Western Blotting法测定大鼠胰腺组织XIAP mRNA及蛋白的表达。结果:成功建立了大鼠AP模型。同SO组相比,ANP和AEP组胰腺组织在各时间点均有不同程度的病理损害,血清淀粉酶也显著增高(P均<0.01)。且ANP组显著高于AEP组(P均<0.01)。造模成功3h后,各组大鼠胰腺腺泡细胞均出现少量凋亡,但ANP和AEP组凋亡显著多于SO组(P<0.05),ANP和AEP组间没有差别(P>0.05)。同SO组相比,ANP和AEP组在6h和12h时凋亡均增多(P<0.01),且AEP组显著高于ANP组(P<0.01)。造模成功3h后,各模型组XIAP mRNA表达没有差异(P>0.05);6h和12h时AEP组XIAP mRNA表达明显下降,而ANP组明显升高,两组间差异有显著性(P<0.01)。XIAP蛋白表达水平与mRNA表达水平相一致。结论:急性胰腺炎大鼠胰腺组织XIAP表达与腺泡细胞凋亡情况相反,且与疾病严重程度平行。XIAP可能负性调控AP大鼠胰腺腺泡细胞的凋亡。     

胰腺外分泌细胞的适应性细胞保护作用

用5％牛磺胆酸钠-胰蛋白酶溶液作为强刺激物直接注入大鼠胰导管系统,制成急性出血坏死性胰腺炎模型。若于48h前向胰导管内预先给予0.1％、0.2％或0.4％的低浓度牛磺胆酸钠-胰蛋白酶溶液作为弱刺激物,能使随后给予的强刺激物所致的损伤大大减轻,使病鼠死亡率由对照组的100％分别降低到27％、17％和17％;血清淀粉酶浓度升高的幅度由对照组的4680U/100ml血清降低到1990、2180和2710U/100ml血清。胰腺组织学切片检查可见,病变由急性出血坏死性胰腺炎转变为轻度急性胰腺炎或向慢性胰腺炎转化。这项结果提示:预先给予弱刺激可使胰腺外分泌细胞对随后给予的强刺激产生适应性细胞保护作用,其机制尚待探索。     

SPECIFIC CHANGES IN THE PANCREACTIC EXPRESSION OF THE INTERLEUKIN 1 FAMILY OF GENES DURING EXPERIMENTAL ACUTE PANCREATITIS

Interleukin 1β (IL-1β) is produced in large amounts during acute pancreatitis and is believed to play a primary role in determining pancreatitis severity and the degree of pancreatic tissue destruction. This study was undertaken to characterize intrapancreatic production of IL-1β and the remainder of the IL-1 family of genes during sterile acute pancreatitis. Moderate or severe necrotizing pancreatitis was induced by the intraperitoneal injection of a cholecystokinin analogue or the feeding of a choline deficient diet, respectively. Animals were killed during the progression of pancreatitis with severity scored by histological grading and serum amylase concentration. The expression of IL-1β, IL-1 Receptor 1 (IL-1R1), Il-1R2, IL-1R antagonist (IL-1Ra), and ICE mRNA within the pancreas was examined by quantitative differential RT-PCR. Corresponding intrapancreatic and serum proteins were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). There was constitutive expression of pancreatic IL-1R1, IL-1R2, IL-1Ra, and ICE but not IL-1β. As pancreatitis developed, mRNA for IL-1β, IL-1Ra, and ICE increased in parallel with the degree of pancreatitis severity (allP<0.001 vs baseline) while mRNA for both receptors remained stable (P=NS). Intrapancreatic and systemic IL-1β and IL-1Ra protein also increased as pancreatitis developed (bothP<0.001) with tissue levels being continuously greater than serum. This study demonstrated that sterile, endotoxin-free acute pancreatitis induces the upregulation of specific members of the IL-1 family of genes including production of large amounts of IL-1β and its receptor antagonist within the pancreatic parenchyma. These changes are indicative of pancreatitis severity and are not model dependent.     

大鼠自发性高血压与HSP70基因关系的研究

本实验采用热休克蛋白７０核酸分子杂交方法,检测了自发性高血压大鼠和正常血压大鼠离体培养的主动脉平滑肌细胞受热刺激后ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平的变化以及整体动物肝组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的水平,并对肝组织基因组ＤＮＡ进行了限制性酶切片段长度多态性分析。结果表明：３７℃培养的ＳＨＲ ＡＳＭＣ及整体ＳＨＲ肝组织ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ的基础表达水平均低于ＷＫＹ鼠,ＳＨＲ ＡＳＭＣ受热刺激（４２℃ １５ｍｉｎ）后２     

SHR和WKY大鼠主动脉hsp 70mRNA水平的比较研究

本工作应用热激蛋白70KD(hsp 70)核酸分子杂交方法,检测了:1.自发性高血压(SHR)主动脉和离体培养的主动脉平滑肌细胞受热激后hsp 70mRNA水平的变化;2.不同细胞培养时间(3个月与6周)的SHR、WKY主动脉hsp 70mRNA水平。结果提示SHR主动脉hsp mRNA水平增加,SHR细胞培养受热激(42℃,15min)后2h,hsp 70mRNA水平明显高于WKY鼠者,6周较3个月的SHR细胞hsp 70mRNA水平高;6周的SHR细胞较同期和3个月的WKY细胞hsp 70mRNA高。推论SHR血管平滑肌细胞对热敏感,原癌基因c-myc和抗癌基因p~(53)可能参与hsp 70表达调控,并共同参与SHR细胞增殖的调节。     

热休克蛋白HSP70在LPS诱导急性肺损伤中的表达

目的检测内毒素诱导急性肺损伤中热休克蛋白70的表达状况,探讨HSP70在急性肺损伤中的作用机制。方法在LPS致Wistar大鼠急性肺损伤动物模型上,采用免疫组织化学(SABC法)和蛋白印迹实验研究各组动物肺组织中HSP70的表达情况。结果LPS处理后1h,大鼠的支气管粘膜上皮及肺泡上皮细胞HSP70的表达与正常对照组相比明显增多,2h的表达达到高峰,6h后与对照组水平一致。Western blot结果显示,LPS处理2h、4h时,HSP70的表达较对照组明显增强。结论LPS诱导的急性肺损伤中可引起支气管、细支气管和肺泡上皮细胞HSP70应激性表达,提示HSP70对肺损伤起保护作用。     

大鼠心脏血压超负荷诱导左心室HSP70基因表达

本工作应用热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）核酸分子杂交方法,测定了大鼠腹主动脉缩窄后左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的水平。结果表明：大鼠腹主动脉缩窄后４ｈ,动脉血压已明显升高,并持续在高水平上;大鼠左心室重／体重比在第三天开始增加,然后持续升高,第４周时比对照组增加５９％;左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ在腹主动脉缩窄后４ｈ已明显升高,１ｄ,２ｄ,１ｗ均维持在高水平,１ｗ后逐渐消失。实验结果提示：大鼠心肌负荷增加早期,左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达明显增加。     

大鼠液压冲击脑损伤热休克蛋白70基因表达的研究

目的：观察大鼠侧位液压冲击脑损伤时ＨＳＰ７０的表达分布特点及时序性变化。方法：雄性ＳＤ大鼠,给以０．２ＭＰａ液压冲击,造成脑损伤,应用免疫组织化学技术观察冲击后不同时间ＨＳＰ７０在脑组织内的表达特点。结果：冲击侧大脑皮层和脑干ＳＨＰ７０阳性神经辊冲击后２ｈ和４ｈ出现,７并逐渐增强直至１２ｈ;冲击后４ｈ,冲击侧海马ＨＳＰ７０免疫阳性细胞开始出现,４￣１２ｈ,海马ＨＳＰ７０免疫阳性细胞数无明显改变。结     

急性白血病的P16基因表达分析

应用免疫组织化学方法．对61例急性白血病患者P16基因表达进行检测和分析。结果表明：AML和ALL患者的P16表达均显著低于对照组（P＜0.001）,ALLP16表达又显著低于AML（P＜0．05）。AL亚型中P16表达率以M2最高,L3最低。比较耐药组和药敏组,P16表达两组间有显著差异（P＜0．05）,但初诊组与复发组、缓解组与未缓解组比较未见统计学差异（P＞0．05）。上述结果提示：P16基因表达异常在急性白血病的发生、发展中起重要作用,但与白血病患者的治疗和预后无明显关系。     

胰多肽对急性胰腺炎大鼠的细胞保护作用

用5%牛磺胆酸钠-胰蛋白酶溶液直接注入大鼠胰导管,制备成急性出血坏死性胰腺炎模型。由腹腔于制备前预防性地和制备后治疗性地结合注射剂量为3μg/kg 的牛胰多肽,能使病鼠的死亡率由对照的100%降到33%,已死鼠平均存活时间由对照的13±3小时延长到20±2小时,血清淀粉酶浓度升高的峰值降为对照的35%,胰腺组织学切片呈轻度急性胰腺炎或向慢性胰腺炎转化。单纯在制备前预防性地注射牛胰多肽或仅在制备后作治疗性注射,也有同样作用,但效果较差。这项结果提示,胰多肽对急性出血坏死性胰腺炎具有预防和治疗两方面的功效,即对胰腺有细胞保护作用。抑制胰酶的分泌和释放可能是它的作用机制之一。