口服活性AdipoRon对2型糖尿病小鼠肝脏氧化应激的干预作用

目的：研究口服活性AdipoRon对2型糖尿病小鼠肝脏氧化应激是否有干预作用,为临床应用提供基础资料。方法：将健康雄性C57BL/6小鼠分为正常组（n=8）,糖尿病组（n=8）,AdipoRon高剂量治疗组（n=8）,Adi-poRon低剂量治疗组（n=8）,以高脂饲料喂养6周后腹腔注射40 mg/kg链脲佐菌素（STZ）诱导2型糖尿病模型,用高、低剂量的口服活性AdipoRon分别对治疗组灌胃治疗10 d后,检测相关生化指标,Western-blot法检测肝脏组织中IRS-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测胰腺组织中PDX-1 mRNA的表达。结果：DM组小鼠血糖值明显高于NC组（P < 0.05）,DM+L组和DM+H组小鼠血糖值显著低于DM组。DM组小鼠肝脏组织中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性显著低于NC组（P < 0.05）,丙二醛（MDA）及一氧化氮合酶（NOS）活性显著高于NC组（P <0.05）;DM+L组和DM+H组SOD、CAT活性明显高于DM组（P < 0.05）,MDA及NOS活性显著低于DM组（P <0.05）。肝脏组织中IRS-1的蛋白表达及胰腺PDX-1 mRNA表达显著升高,存在统计学意义（P < 0.05）。结论：口服活性AdipoRon对糖尿病小鼠肝脏组织氧化应激有一定的干预作用,能降低小鼠的血糖水平。     

AdipoRon对2型糖尿病小鼠肾脏损伤的干预作用

目的：研究脂联素受体激动剂（AdipoRon）对2型糖尿病小鼠肾脏损伤的干预作用。方法：将40只SPF级雄性C57/BL6小鼠随机分为正常对照组（n=10）和实验组（n=30）：实验组给予高糖、高脂饲料喂养,联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素（STZ）建立2型糖尿病（T2DM）小鼠模型,再随机分为3组（n=10）：模型对照（DM）组、低剂量AdipoRon治疗（DM+L）组及高剂量AdipoRon治疗（DM+H）组。检测血清中葡萄糖含量的变化;采用酶联免疫法检测小鼠血清中胰岛素受体（INSR）、胰岛素受体底物-1（IRS-1）以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的蛋白质含量;HE染色镜下观察肾组织形态学变化;实时荧光定量PCR法检测肾组织胰岛素促进因子-1（PDX-1）和胰岛素（insulin）mRNA的表达;Western blot检测肾组织内磷酸化胰岛素受体底物-1（p-IRS-1）蛋白质;ELISA试剂盒检测小鼠血胰岛素含量。结果：病理学检查表明,AdipoRon可减轻2型糖尿病所致小鼠肾脏损伤。与DM组小鼠比较,DM+H组和DM+L组小鼠血糖、TNF-α水平均显著降低（P<0.05）,INSR、IRS-1和p-IRS-1表达显著上升,PDX-1和insulin mRNA表达显著上升（P<0.05,P<0.01）。结论：给予AdipoRon治疗的小鼠血糖和血清TNF-α水平显著降低,INSR,IRS-1和p-IRS-1蛋白质含量,PDX-1和insulin mRNA表达均显著上升,表明AdipoRon对2型糖尿病小鼠肾脏损伤有一定的干预作用。     

黑苦荞茎叶对2型糖尿病小鼠的治疗作用及其对其胰腺、脾脏的影响

目的:观察黑苦荞茎叶(BBL)对2型糖尿病小鼠治疗作用及其对胰腺、脾脏的影响。方法:将40只SPF级雄性C57/B16小鼠随机分为正常对照组(n=10)和实验组(n=30),实验组给予高糖高脂饲料喂养1个月后,每只小鼠在禁食12h后腹腔注射链脲佐菌素35mg/kg,注射后72h取尾血测血糖≥13.8mmol/L为糖尿病小鼠。成功建立2型糖尿病(T2DM)模型的30只小鼠随机分为3组(n=10):模型对照组(DM组)、低剂量黑苦荞茎叶治疗组(DM+L)组、高剂量黑苦荞茎叶治疗(DM+H)组。对照组和模型组小鼠每日给予生理盐水灌胃,两个黑苦荞茎叶组分别给予0.21g/kg·d-1和0.42g/kg·d-1的黑苦荞茎叶灌胃,14d后杀死小鼠,取血和胰腺、脾脏,检测血清中葡萄糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、胰岛素和脾脏组织中TNF-α蛋白的含量,观察胰腺组织形态学,称量小鼠体重和脾脏重量、计算脾脏系数,检测胰腺组织中IRS-1mRNA的表达和胰腺组织内胰岛素受体底物IRS-1蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠血清FBG、TC、TCH水平明显升高,使血胰岛素水平明显下降,脾脏组织TNF-α蛋白表达水平显著升高,胰腺组织中IRS-1mRNA表达和IRS-1的蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组小鼠的血清FBG、TC、TCH水平明显降低,血胰岛素水平显著升高,小鼠脾脏系数、脾脏组织TNF-α蛋白表达水平、胰腺组织IRS-1mRNA表达和IRS-1的蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。高剂量黑苦荞茎叶(0.42g/kg·d-1)治疗作用更加明显。结论:黑苦荞茎叶对2型糖尿病小鼠具有显著的降血糖、降血脂的治疗效果,对糖尿病小鼠胰腺、脾脏具有一定的保护作用。     

AdipoRon对2型糖尿病小鼠的治疗及其可能的肝脏机制

目的：观察口服脂联素受体激动剂（AdipoRon）对2型糖尿病小鼠的治疗效果及对肝脏的影响。方法：40只SPF级雄性C57/BL6小鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组给予高糖高脂饲养联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素建立二型糖尿病（T2DM）小鼠模型,随机分为模型对照（DM）组,低剂量AdipoRon治疗（DM+L）组,高剂量AdipoRon治疗（DM+H）组（n=10）。检测血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）的变化;HE染色镜下观察肝细胞形态学变化;实时定量荧光PCR法检测肝脏中肝糖类相关基因（PEPCK）的表达。结果：与DM组小鼠比较,DM+H组和DM+L组小鼠ALT、AST、ALP、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）水平均降低（P<0.05）;与DM组小鼠比较,DM+H组小鼠和DM+L组小鼠血清游离脂肪酸（FFA）浓度显著下降（P<0.05）,而肝组织葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-P）活性DM+L组小鼠显著下降,DM+H组小鼠无显著差异;与DM组小鼠比较,DM+H组小鼠肝组织磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK） mRNA表达显著降低（P<0.05）,而DM+L组小鼠无显著差异。结论：给予AdipoRon治疗的小鼠血糖降低,ALT、AST、ALP的水平及G-6-P和PEPCK的表达下降,表明AdipoRon对2型糖尿病具有显著的治疗效果,对糖尿病小鼠肝脏有一定的保护作用。     

二氢杨梅素对2型糖尿病小鼠认知功能障碍的影响

目的：观察二氢杨梅素（DHM）对2型糖尿病（T2DM）小鼠认知功能障碍及海马中BDNF蛋白表达的影响。方法：将40只C57BL/6J小鼠首先随机分为两组：正常对照组（n=8）：普通饲料喂养;2型糖尿病模型组（n=32）：高糖高脂联合100 mg/kg的STZ处理（造模过程中死亡5只,不成功3只）。24只建模成功的小鼠随机分成3组：T2DM组、T2DM+L-DHM组和T2DM+H-DHM组,3组小鼠高糖高脂喂养,同时分别用等体积生理盐水、125 mg/（kg·d）的DHM和250 mg/（kg·d）的DHM （1次/天,灌胃）处理16周。正常对照小鼠继续普通饲料喂养,同时用等体积生理盐水（1次/天,灌胃）处理16周。16周后测定小鼠体重、空腹血糖、进行腹腔注射葡萄糖耐量实验和相关行为学实验。最后,Western blot检测各组小鼠海马中BDNF蛋白的表达。结果：高糖高脂联合100 mg/kg的STZ成功建立2型糖尿病小鼠模型。16周后,与正常对照组相比,T2DM组小鼠体重明显下降,空腹血糖显著升高,糖耐量显著异常;而T2DM+DHM组相比T2DM组小鼠体重却显著增加、空腹血糖降低,且H-DHM可显著改善T2DM小鼠糖耐量异常。行为学实验结果显示：与正常对照组相比,T2DM组小鼠学习记忆能力明显下降;与T2DM组相比,T2DM+DHM组小鼠学习记忆能力得到改善,且H-DHM组更为明显。Western blot结果显示：与对照组相比,T2DM组小鼠海马中BDNF蛋白表达显著下降,而DHM组相比T2DM组小鼠其BDNF蛋白的表达明显增加。结论：二氢杨梅素可改善2型糖尿病小鼠认知功能障碍,其机制可能通过降血糖作用,并激活海马中BDNF蛋白表达。     

MLD-STZ诱导1型糖尿病小鼠胰腺比较蛋白质组学研究

目的：通过对小剂量多次链脲佐菌素（multiple low doses of streptozotocin MLD-STZ）诱导的1型糖尿病模型小鼠胰腺与正常小鼠胰腺蛋白的比较分析,拟从蛋白水平上对1型糖尿病发病机制进行探讨。方法：将20只雄性昆明鼠,按体重随机分为MLD-STE模型组和正常对照组（n=10）,应用二维凝胶电泳技术获得胰腺的二维电泳图谱,经ImageMaster2D 5．0软件分析获得差异蛋白,结合质谱（MALDI-TOF-MS）与MASCOT网络数据库进行匹配鉴定蛋白。结果：与正常对照组比较,模型组胰腺中有23个蛋白表达改变,其中15个蛋白表达下调,8个蛋白表达上调。经肽质量指纹图谱分析及蛋白数据库检索,最终鉴定出15个差异蛋白,根据其功能可分为：①代谢相关蛋白;②氧化应激相关蛋白;③催化酶类;④细胞骨架蛋白;⑤伴侣蛋白;⑥免疫相关蛋白;⑦其他蛋白。结论：研究结果表明模型组胰腺蛋白表达存在明显改变,提示1型糖尿病的发生是多途径多靶点的共同作用,同时这些改变蛋白为研究和治疗糖尿病等相关疾病提供了新靶标。     

X线全身照射对2型糖尿病KKAy小鼠造血免疫系统功能的影响

目的观察X线全身照射对2型糖尿病模型KKAy小鼠的造血免疫系统功能的损伤作用,并与对照C57小鼠进行比较。方法KKAy小鼠,分为对照组和照射组,照射组小鼠经X线全身照射,剂量4Gy,C57小鼠作为对照。照射后15d检测小鼠的外周血常规,流式细胞术检测骨髓中造血祖细胞、造血干细胞和长期造血干细胞的比例,脾中B细胞和T细胞的比例,胸腺中CD4CD8双阳性T细胞、CD4单阳性T细胞和CD8单阳性T细胞的比例。通过粒细胞集落形成能力实验评价小鼠造血祖细胞的功能。结果照射前KKAy小鼠的HSC和LT-HSC的比例低于C57小鼠。4Gy全身照射后,KKAy小鼠的外周血WBC、RBC、PLT、HGB和LYM%分别下降了68.42%、12.17%、8.78%、30.12%、70.84%;骨髓中HPC、HSC和LT-HSC的比例分别下降了34.02%、29.49%、35.74%;脾B细胞和T细胞的比例分别下降了57.85%、58.81%;胸腺CD4CD8双阳性细胞的比例下降了51.70%。KKAy小鼠的骨髓HSC、LT-HSC、外周血RBC和HGB的降低幅度显著低于C57小鼠。结论4Gy全身照射损伤KKAy小鼠的造血免疫系统功能,KKAy小鼠可能比C57小鼠表现出对电离辐射较强的耐受性。     

禁食与非禁食处理对构建2型糖尿病小鼠模型血糖的影响

为探讨禁食与非禁食处理对构建2型糖尿病小鼠模型血糖变化的影响,分别以普通饲料和高脂饲料喂养3周龄的C57BL/6J雄性小鼠5周,于第5周末采取禁食与非禁食处理,16 h后分别注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)100 mg/kg体重或相应体积的柠檬酸缓冲液.于第5周末(禁食前)和注射后3周测定非空腹血糖浓度.普通饲料与高脂饲料注射STZ前禁食组血糖水平均显著升高,达到并超过糖尿病小鼠非空腹血糖成模标准(11mmol/L).高脂饲料注射STZ前非禁食组血糖水平表现为缓慢持续升高,其余各组血糖水平均低于糖尿病小鼠非空腹血糖成模标准.结果 表明,高脂饲料联合STZ诱导2型糖尿病小鼠血糖变化是有效的,但注射STZ前的禁食处理不是必需的;单纯注射STZ同样可以诱导糖尿病小鼠血糖升高,但注射前的禁食处理是必要的.     

黄芪注射液对2型糖尿病动物模型KKAy小鼠脑微血管病变的影响

目的：观察黄芪注射液对2型糖尿病动物模型KKAy小鼠脑微血管病变的影响,探讨黄芪注射液对糖尿病脑血管病变的保护作用。方法：饲养至14周龄的雄性KKAy小鼠随机分成模型组和黄芪注射液治疗组（每日腹腔给药,剂量为3mL／kg）,同龄雄性C57BL／6J小鼠作为对照组。血糖仪测量20、24、28周龄时各组小鼠的空腹血糖水平。28周龄时处死各组小鼠,放射免疫法检测血清6-酮-前列腺素-F1α（6-Keto-PGF1α）和血栓素B2（TXB2）的含量。透射电子显微镜观察脑组织超微结构变化。结果：模型组KKAy小鼠从20周龄开始血糖水平明显高于正常组小鼠（P〈0．01）;黄芪治疗组小鼠从20周龄开始血糖水平明显高于正常组小鼠（P〈0．01）,但低于模型组小鼠（P〈0．05或P〈0．01）。模型组小鼠血清6-Keto—PGF1α水平较正常组降低（P〈0．01）,TXB2含量增高（P〈0．01）;与模型组相比,黄芪注射液治疗组小鼠6-Keto—PGF1α水平升高（P〈O．01）,TXB：含量下降（P〈0．01）。透射电镜显示模型组小鼠神经细胞胞核染色质疏松,线粒体肿胀,粗面内质网缩小,核糖体减少;治疗组小鼠以上病变明显改善。结论：黄芪注射液可以有效改善2型糖尿病动物模型KKAv小鼠脑微血管病变,保护神经细胞结构。     

2型糖尿病小鼠模型构建的研究进展

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)的病因主要在于细胞控制动态平衡能力的缺失,以及这些细胞所构成的组织或器官功能的失调。为了更好地研究和治疗2型糖尿病,人们借助不同动物模型去了解不同细胞、组织和器官的功能。在动物模型的选择上,小鼠因为其基因和表型能很好地模拟2型糖尿病而被广泛使用。2型糖尿病小鼠模型种类繁多,包括:自发突变性模型、热量过量性模型、外科和化学诱导性模型、常用转基因小鼠模型、专门用于研究环境对基因影响性的模型、CRISPR-Cas9构建模型以及特定的糖尿病肾病模型。本文就2型糖尿病现有的小鼠动物模型及其构建的方式给予简要综述,以期帮助广大科研工作者了解并更好地选择2型糖尿病小鼠实验模型。     

AdipoRon对小鼠骨骼肌细胞胰岛素敏感性的影响及其机制

目的：观察脂联素受体激动剂AdipoRon对小鼠成肌细胞株（C2C12）胰岛素敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法：使用马血清将C2C12诱导分化为成肌细胞,分为6组（9个复孔）：空白对照组、AdipoRon （脂联素受体激动剂）高剂量组、AdipoRon低剂量组、胰岛素组以及AdipoRon低剂量+PI3K （磷脂酰肌醇3激酶）抑制剂组和胰岛素+PI3K抑制剂组,作用12 h,收集上清检测葡萄糖消耗量,使用CCK8测定细胞增殖。六孔板中将C2C12诱导分化为肌管细胞,加入药物作用12 h,并用RT-PCR法检测GLUT4的mRNA水平。结果：与空白对照组相比,AdipoRon高剂量组、AdipoRon低剂量组、胰岛素组耗糖量均有所增加,具有统计学意义（P<0.05）。加入PI3K抑制剂组后,耗糖量与空白对照组无统计学意义。与空白对照组相比,AdipoRon高剂量组、AdipoRon低剂量组、胰岛素组细胞均有增殖,但只有胰岛素组具有统计学意义（P<0.05）。与对照空白组相比,AdipoRon高剂量组、AdipoRon低剂量组、胰岛素组GLUT4mRNA水平均有所提高,具有统计学意义（P<0.05）。加入PI3K抑制剂组后,GLUT4mRNA水平与空白对照组无统计学意义。结论：AdipoRon能够不影响细胞增殖的情况下增加葡萄糖的消耗量,这可能是通过提高胰岛素敏感性发挥作用的,但具体机制尚待进一步的研究。     

模拟高原低氧环境对小鼠脾脏铁代谢的影响*

目的:探讨模拟海拔6 000 m高原低氧环境对小鼠脾脏铁代谢的影响。方法:将C57BL/6小鼠按体重随机分为常压常氧组(Nor)和低压低氧组(HH)。HH组小鼠放置于低压低氧动物实验舱内,模拟急性海拔6 000 m高原低氧环境,控制光照时间比大约12 h∶12 h。Nor组置于同等条件的常压常氧环境。HH组又分为低氧12 h组(HH-12 h)和3 d组(HH-3 d),对照组对应分为(Nor-12 h及Nor-3 d),每组9只小鼠。采用血常规检测、HE染色、组织铁染色、蛋白质免疫印迹(WB)、免疫组织化学(IHC)综合评价模拟高原低氧环境下小鼠脾脏铁代谢情况。结果:与相同时间点Nor组相比:①HH-12 h组小鼠红细胞数(RBC)、血红蛋白量(HGB)、红细胞压积(HCT)均无明显变化。HH-3 d组RBC、HGB及HCT均显著增加(P＜0.05),平均血红蛋白量(MCH)在HH-12 h和HH-3 d组均无显著变化。②与Nor-3 d相比,HH-3 d组小鼠脾脏明显增大,HE染色显示脾窦变窄,铁染色结果显示HH-3 d组脾脏红髓中铁含量明显增加。③WB结果显示,HH-3 d组低氧诱导因子1α(HIF-1α),转铁蛋白受体1(TfR1),铁输出蛋白(Fpn)表达均显著增加,而铁蛋白(Ft-L)的表达显著降低(P＜0.05);IHC结果也与WB结果一致,高原低氧暴露3 d后脾脏红髓TfR1、Fpn表达和分布均明显增多,Ft-L表达分布明显减少。结论:模拟海拔6 000 m高原低氧暴露3 d后小鼠脾脏截留处理RBC增多,脾索铁沉积,脾脏组织细胞内铁动员加速。高原低氧下脾脏铁代谢异常可能是引起高原低氧暴露下红细胞病理性增多甚至造成高原红细胞增多症的主要原因。     

Chronic phosphodiesterase type 5 inhibition has beneficial effects on subcutaneous adipose tissue plasticity in type 2 diabetic mice

Different adipose tissue (AT) depots are associated with multiple metabolic risks. Phosphodiesterase type 5 (PDE5) is involved in adipocyte physiology and PDE5 inhibition may affect adipogenesis and ameliorate white AT quality. The aim of this study is to investigate the distribution of AT and the composition of the stroma‐vascular fraction (SVF) of subcutaneous AT (SAT) in type 2 diabetic mice after prolonged treatment with a PDE5 inhibitor, Sildenafil. 18 db/db mice were treated with Sildenafil or vehicle for 12 weeks. AT distribution was monitored and SAT was processed for isolation of SVF by flow cytometry. Sildenafil induced an overall reduction in AT, mainly in visceral AT (VAT), compared with SAT. In Sildenafil‐treated mice, the mean change in body weight from baseline positively correlated with VAT, but not with SAT. Characterization of SVF of SAT showed an increase in the frequency of M2 macrophages and endothelial cells in treated mice. Sildenafil improved the maintenance of SAT homeostasis and distribution.     

Autophagic adaptations in diabetic cardiomyopathy differ between type 1 and type 2 diabetes

Little is known about the association between autophagy and diabetic cardiomyopathy. Also unknown are possible distinguishing features of cardiac autophagy in type 1 and type 2 diabetes. In hearts from streptozotocin-induced type 1 diabetic mice, diastolic function was impaired, though autophagic activity was significantly increased, as evidenced by increases in microtubule-associated protein 1 light chain 3/LC3 and LC3-II/-I ratios, SQSTM1/p62 (sequestosome 1) and CTSD (cathepsin D), and by the abundance of autophagic vacuoles and lysosomes detected electron-microscopically. AMP-activated protein kinase (AMPK) was activated and ATP content was reduced in type 1 diabetic hearts. Treatment with chloroquine, an autophagy inhibitor, worsened cardiac performance in type 1 diabetes. In addition, hearts from db/db type 2 diabetic model mice exhibited poorer diastolic function than control hearts from db/+ mice. However, levels of LC3-II, SQSTM1 and phosphorylated MTOR (mechanistic target of rapamycin) were increased, but CTSD was decreased and very few lysosomes were detected ultrastructurally, despite the abundance of autophagic vacuoles. AMPK activity was suppressed and ATP content was reduced in type 2 diabetic hearts. These findings suggest the autophagic process is suppressed at the final digestion step in type 2 diabetic hearts. Resveratrol, an autophagy enhancer, mitigated diastolic dysfunction, while chloroquine had the opposite effects in type 2 diabetic hearts. Autophagy in the heart is enhanced in type 1 diabetes, but is suppressed in type 2 diabetes. This difference provides important insight into the pathophysiology of diabetic cardiomyopathy, which is essential for the development of new treatment strategies.