凝集素与细胞凝集 Ⅳ.肝癌细胞ConA“受体”的分析

用放射受体法测定正常鼠肝细胞和腹水型肝癌(HepA)细胞表面膜的ConA“受体”,两者的Scatchard 图形迥异,正常肝细胞为一直线,而HepA 细胞为一凹面向上的曲线。本文用加热、稀释及葡萄糖竞争解离试验,结果均不支持此凹形曲线是由于负协同效应所引起,而提示存在两类不同亲和力的“受体”。50℃加热处理后,高亲和力“受体”消失,仅留下低亲和力“受体”。加热前后细胞表面的ConA“受体”数基本不变。HepA 细胞凝集效应强度与高亲和力“受体”的丧失有平行关系。此外,温度对“受体”的影响有一骤变过程,48℃时尚保持有高亲和力“受体”,50℃处理后则全部消失,这一骤变类似膜脂质的相变。究竟是“受体”蛋白质的变性还是膜脂质的相变造成高亲和力“受体”的消失,尚需进一步研究。     

在膜蛋白分子侧向运动中细胞骨架的作用

本实验采用体外培养的人胃癌细胞,利用免疫荧光技术和FRAP技术研究细胞骨架和膜表面ConA受体复合物的侧向扩散运动.实验分成5组:①用CB处理细胞5小时;②CB处理5小时后,除去药物,换正常培养液培养1小时;③用秋水仙素处理5小时;④秋水仙素处理细胞5小时后,除去药物,换正常培养液培养2小时;⑤对照组.经CB处理细胞后,胞质微丝减少或消失,但是膜ConA受体复合物的侧向扩散运动增加〔D〕=1.05×10~(-1)cm~2/sec,当除去CB后,微丝重新出现,膜ConA受体复合物的侧向扩散运动又减慢〔D〕=0.81×10~(-1)cm~2/sec,与对照组相似.而无论是用秋水仙素处理细胞,还是撤药后微管收复,都不能看到膜表面ConA受体复合物侧向扩散运动的变化.以上结果表明:影响膜表面ConA受体复合物的侧向扩散运动主要在于微丝的作动.     

ABC法在膜受体流动性测量中的应用

本文首次把ABC法应用于受体流动性测量中的膜表面受体荧光标记,利用FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)技术实现了细胞内吞过程中膜受体流动性变化的测量.实验用Con A—Biotin和Avidin—FITC(ABC法)标记巨噬细胞ConA受体,测量ConA刺激不同时间细胞膜表面受体的荧光强度、扩散系数和荧光恢复率的变化.结果显示ABC标记法适合于测量细胞内吞过程中膜表面受体的流动性变化,且具有较高的灵敏度高;巨噬细胞受ConA刺激后,膜表面ConA受体的扩散系数和荧光恢复率较静息状态时明显降低.     

一种高效率细胞同步化方法的改良与运用

本实验改良了Rao的高压N_2O气阻断方法,获取高同步率和收获率的4个周期时相细胞,并进行了测定分析。将指数生长的细胞用过量TdR(2.5mmol/L)预处理后,放在新设计的高压罐内,并直接将罐放入恒温箱内,经高压N_2O气处理,细胞被阻断在有丝分裂中期。收集M期细胞在37℃下孵育释放2小时,细胞即可进入G_1期;在中G_1期再次用过量TdR处理与释放,于不同时间分别收集S期与G_2期细胞。各时相细胞通过膜表面ConA受体再分布也表现进显著的时相差异性。每个时相细胞均能继续贴壁生长,活力高,适于各种相关实验研究。     

db-cAMP对转化细胞钙调素基因表达与细胞骨架的影响

转化的C_3H_(10)T_(1/2)细胞表现增殖速度加快、表面微绒毛增加,细胞变圆,叠层生长,ConA受体呈帽状分布,微管、微丝、纤粘蛋白分布明显减少。与增殖有关的癌基因c-fos表达增强,同时发现与细胞增殖、转化和细胞骨架调节有关的钙调素(CaM)基因表达加强。用1mmo/Ldb-cAMP处理转化细胞,观察到CaM基因和原癌基因c-fos的表达分别在处理后1小时和2小时急剧下降。处理后4—5天,转化细胞表型趋正常化,大部分细胞恢复单层生长。细胞表面微绒毛和泡状物减少,ConA受体帽状分布消失,恢复分散分布在细胞膜上的特点。细胞生长明显被抑制,用优先在G_1期表达的4F_1 cDNA为探针进行分子杂交,证实了经db-cAMP处理后的细胞被阻抑在G_1期。经db-cAMP处理6天的转化细胞中微管、微丝、纤粘蛋白基本恢复正常分布。实验表明CaM的表达增强与转化细胞表型变化和细胞骨架组装减弱密切相关,db-cAMP作用后CaM表达下降是抑制转化细胞增殖并使细胞表型和细胞骨架分布趋于正常的关键事件之一。     

巨噬细胞细胞内吞过程中膜受体流动性的测量——两种标记受体方法的比较

本文首次实现了细胞内吞过程中膜受体流动性的测量。实验选择巨噬细胞膜和伴刀豆凝集素A(ConA),分别用Con A-Biotin Avi-din-FITC(ABC法)和Con A-FITC(直接法)两种方法标记巨噬细胞膜Con A受体,比较了这两种方法标记的巨噬细胞Con A受体的荧光强度;利用FRAP(Fluorescence RecoveryAfter Rhotobleaching)技术,分别用两种标记方法测量了巨噬细胞Con A受体的流动性。结果显示Con A-Biotin Avidin-FITC标记的巨噬细胞受体的平均荧光强度比用Con A-FITC标记的平均荧光强度高大约3倍;直接标记法应用于细胞内吞过程中受体流动性的测量在方法学上存在着很大的缺陷,ABC标记法适合于测量细胞内吞过程中膜表面受体的流动性的变化,且灵敏度高、误差小;ABC方法标记受体的测量结果显示,Con A刺激后巨噬细胞膜表面Con A受体的扩散系数和荧光恢复率与静息状态相比呈下降趋势。     

小鼠HepA腹水型肝癌细胞核转录活性的研究

本文对小鼠HepA腹水型肝癌(简称HepA,下同)细胞核与正常小鼠肝细胞核的转录活性进行了一些比较研究,发现HepA细胞核的转录活性比正常肝细胞核升高约80%,其中,依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱ(简称RPase Ⅱ,下同)的活性比RPase Ⅰ有更显著的增加,转录活性的升高以起始速率的增强为主。两种细胞核内的RPase Ⅱ的性质有明显的差别。     

小鼠HepA腹水型肝癌细胞核转录活性的研究

本文对小鼠HepA腹水型肝癌(简称HepA,下同)细胞核与正常小鼠肝细胞核的转录活性进行了一些比较研究,发现HepA细胞核的转录活性比正常肝细胞核升高约80%,其中,依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱ(简称RPase Ⅱ,下同)的活性比RPase Ⅰ有更显著的增加,转录活性的升高以起始速率的增强为主。两种细胞核内的RPase Ⅱ的性质有明显的差别。     

人胃癌细胞在丁酸钠的诱导下膜分子运动与膜相关骨架的关系

体外培养的人胃癌细胞,用丁酸钠处理后,显示细胞表面FN及细胞胞质微丝的变化,同时用荧光漂白恢复方法对细胞膜ConA受体复合物侧向扩散运动进行测定。结果表明,经丁酸钠处理后的细胞,胞质微丝及细胞膜表面FN均较对照组增加,而细胞膜分子侧向扩散运动减慢,说明与细胞膜相连的细胞骨架的变化对膜分子侧位运动具有牵制作用。     

凝集素与细胞凝集 Ⅲ.放射受体法测定正常鼠肝及腹水型肝癌细胞的ConA受体

近年来,用放射受体法研究激素与受体的相互作用取得不少进展。用同位素标记的凝集素测定细胞表面膜的凝集素受体,文献也有不少报道,其中尤以ConA为材料者较多,但多数结果不能说明受体与凝集素强度之间有对应关系。不过,这些数据都是用饱和分析法测定细胞与ConA的最大结合量,而未作受体与ConA间结合常数(Ka)的测定,可是Ka是受体分析中最关重要的一项数据。因为专一     

伴刀豆蛋白A与活细胞膜作用的图像分析和多元统计

用图像分析与多元统计研究伴刀豆蛋白A(ConA)与活巨噬细胞膜受体结合时膜变形性随作用时间和ConA浓度的定量变化。结果表明膜面积增大,增大速率与ConA速度呈正相关。ConA浓度加大,膜园形系数减小,变形性增加,此等变化反应了细胞的活化。     

两种人胃癌细胞M期与间期时相质膜表面Con A受体复合物分布及侧向运动

利用荧光标记和荧光漂白恢复方法研究了两种人胃腺癌细胞M期与间期时梠中,细胞膜表面ConA受体复合物分子的分布与侧向运动.结果表明:MGC80-3细胞M期时相与SGC7901细胞间期时相膜表面ConA受体复合物分布近似,其侧向运动方式呈扩散型;SGC 7901 M期时相细胞膜表面ConA受体复合物的分布与MGC80-3细胞间期时和相基本类似,其侧向运动主要是流动型.凡是受体复合物是流动型运动的细胞.其膜上可动分子的百分比都寓于扩散型运为的细胞,P值小于0.01.     

两种人胃癌细胞M期与间期时相质膜表面Con A受体复合物分布及侧向运动

利用荧光标记和荧光漂白恢复方法研究了两种人胃腺癌细胞M期与间期时梠中,细胞膜表面ConA受体复合物分子的分布与侧向运动.结果表明:MGC80-3细胞M期时相与SGC7901细胞间期时相膜表面ConA受体复合物分布近似,其侧向运动方式呈扩散型;SGC 7901 M期时相细胞膜表面ConA受体复合物的分布与MGC80-3细胞间期时和相基本类似,其侧向运动主要是流动型.凡是受体复合物是流动型运动的细胞.其膜上可动分子的百分比都寓于扩散型运为的细胞,P值小于0.01.     

伴刀豆蛋白A与巨噬细胞膜上受体结合后对微丝组装的影响

本文采用流式细胞术(FCM)和荧光显微术研究ConA与巨噬细胞膜上受体结合后细胞骨架微丝组装的变化,实验证明ConA与膜受体结合后巨噬细胞内微丝含量增多,并且与ConA的浓度有关。荧光显微镜下还可见细胞面积增大。本实验成功地用流式细胞术定量研究活细胞内细胞骨架的变化情况。     

伴刀豆蛋白A与巨噬细胞膜上受体结合后对微丝组装的影响

本文采用流式细胞术(FCM)和荧光显微术研究ConA与巨噬细胞膜上受体结合后细胞骨架微丝组装的变化,实验证明ConA与膜受体结合后巨噬细胞内微丝含量增多,并且与ConA的浓度有关。荧光显微镜下还可见细胞面积增大。本实验成功地用流式细胞术定量研究活细胞内细胞骨架的变化情况。     

猪淋巴细胞表面E受体再生表达的免疫电镜观察

本文用酶标免疫电镜技术对猪外周淋巴细胞E受体在细胞表面的分布以及在细胞内合成代谢的状况进行了研究。实验结果表明:E受体在淋巴细胞表面呈点状均匀分布。胰蛋白酶处理使细胞表面E受体消失,经培养后可逐渐自发重建;正常情况下静止的淋巴细胞内E受体的合成水平很低;小牛胸腺肽制剂处理可以促进E受体在细胞质内的合成,加速其表达过程;更生霉素及嘌呤霉素等RNA合成抑制剂可抑制E受体的再生;以ConA活化的猪淋巴细胞内可见E受体活跃的合成;E受体合成部位是在粗面内质网上及散在的核蛋白体上。     

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜上受体作用下膜变形性及细胞吞噬能力变化

本文采用图像分析、相差显微、生物活性测定等技术,研究ConA与巨噬细胞膜受体结合后对细胞行为与功能的影响. ConA与受体结合后巨噬细胞膜面积增大、变形性和吞噬能力增强、细胞产热量增加,表明细胞膜结构与功能发生变化.本实验是将图像分析技术用来研究相对图像采集速度要慢得多的活细胞特性的一次成功尝试.     

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜上受体作用下膜变形性及细胞吞噬能力变化

本文采用图像分析、相差显微、生物活性测定等技术,研究ConA与巨噬细胞膜受体结合后对细胞行为与功能的影响. ConA与受体结合后巨噬细胞膜面积增大、变形性和吞噬能力增强、细胞产热量增加,表明细胞膜结构与功能发生变化.本实验是将图像分析技术用来研究相对图像采集速度要慢得多的活细胞特性的一次成功尝试.     

人肝癌细胞表皮生长因子受体以及佛波酯对它的调变

利用放射受体结合测定证明了两株人体肝癌细胞株7402和7721细胞均有EGF受体的存在。受体数目分别为每细胞6.2×10~4和2.5×10~4,代表它们亲和力的解离常数K_D值分别为1.2 nmol/L和0.80 nmol/L。PMA处理对7721细胞的EGF受体及其亲和力均无明显影响;对7402细胞EGF受体却显示了调变作用。受体数目虽同样没有变化;但亲和力却随药物处理时间有一个下降、恢复的变化过程。在PMA处理1小时,EGF结合抑制达最大,此时受体的解离常数K_D值为3.0 nmol/L;在处理96小时,受体亲和力恢复并略有增高,此时K_D值为0.95 nmol/L。~3H-TdR参入实验表明,在PMA抑制7402细胞EGF受体亲和力的同时,细胞DNA的合成速率也相应下降。对于佛波酯等因子对EGF受体的调变作用,我们认为是属于生长因子启动细胞DNA合成进行细胞分裂的整个生物学过程中感受性因子对进行性因子的调节作用。     

HL-60细胞诱导分化期间细胞表面ConA受体结合量变化的研究

 <正> 在用二甲亚砜(DMSO)诱导人急性早幼粒细胞性白血病细胞系(HL-60 Cell)沿粒系统分化成熟的实验基础上,我们用受体荧光标记技术和荧光分光光度法,进一步观察了HL-60细胞诱导分化期间,细胞膜流动性动态降低对膜上伴刀豆球蛋白(ConA)受体结合量的影响。