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Gag和Env蛋白是人I型免疫缺陷病毒(Human immunodeticiency virus type 1,HIV-1)的结构蛋白,是HIV-1诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的主要抗原。本实验通过多交亚克隆,将env基因以正确的三联密码读框插入gag基因的下游制备了HIV-1 gag-env嵌合基因,并将嵌合基因分别置于痘苗病毒p7.5启动子和牛痘病毒A型包涵体(ATI)启动子的下游,经过同源 相似文献
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HIV—1结构基因与白细胞介素基因在重组痘苗病毒中的共表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
Env糖蛋白是决定HIV病毒粒子感染、穿入、融合及抗原性的主要结构蛋白,并且可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。Gag蛋白是HIV主要结构蛋白之一,氨基酸序列较为保守,抗源决定簇较少变异,也能够诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。利用O把蛋白研制巨分子颗粒化疫苗,可能克服env不有效抵抗异源变异毒株攻击的缺陷,这是近年来HIV疫苗研制新热点。在艾滋病的研究中,已成功地利用痘菌病毒表达了HIV-IGag、Env等蛋白。随着生物技术的发展,人们设想把细胞因子基因与某些外派目的基因在细胞中进行共表达,来增强免疫反应,现已证明多… 相似文献
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将马传贫驴白细胞弱毒疫苗及其亲本株env基因克隆到痘苗病毒表达载体pSC65的pE/L启动子下游,通过同源重组插入到痘苗病毒天坛株基因组TK区,经蓝白斑筛选获得重组痘苗病毒rvv—DINenv和rvv—LNenv,Westem blot检测目的蛋白的表达,结果表明重组痘苗病毒能够有效表达完整的EIAV Env蛋白,其肌肉接种免疫小鼠后,表达的目的蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导机体产生有效的体液和细胞免疫应答,其中以细胞免疫效果更为显著,CTL特异性裂解最高可达28%。本研究为EIAV基因工程疫苗的开发研制奠定了基础。 相似文献
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Gag和Env蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirustype1,HIV1)的结构蛋白,是HIV1诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的主要抗原。本实验通过多次亚克隆,将env基因以正确的三联密码读框插入gag基因的下游,制备了HIV1gagenv嵌合基因,并将嵌合基因分别置于痘苗病毒p75启动子和牛痘病毒A型包涵体(ATI)启动子的下游,经过同源重组和红细胞吸附试验筛选,获得了2株重组痘苗病毒。免疫荧光试验和酶免疫试验证明,两株重组痘苗病毒均能正确地表达HIV1gagenv嵌合基因。动物实验表明,gagenv嵌合基因重组痘苗病毒可诱导小鼠产生抗HIV特异性抗体。这些结果为艾滋病颗粒化疫苗的研制提供了借鉴。 相似文献
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为研制适合我国使用的HIV疫苗,选择具有代表意义的中国流行株HIV CN54(B′/C)病毒gag、pol、nef等基因的合成基因syngpnef,插入到自行构建的能在病毒筛选过程中将标记基因去除掉的双标记基因痘苗病毒载体pVI75的KpnI酶切位点,构建成转移质粒pVI75-syngpnef,与我国的天坛株痘苗病毒共转染鸡胚成纤维细胞,通过蓝白斑筛选得到的重组病毒疫苗株DNA。经PCR鉴定标记基因已被删除并有目的基因的整合,Western blot可检测到目的基因的融合表达。此重组病毒疫苗株有望成为HIV/AIDS候选疫苗。 相似文献
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重组PAI-1在大肠杆菌中的高效表达 总被引:1,自引:0,他引:1
纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)在天然状态下含量很低。为了进行PAI-1的结构与功能的研究,构建了表达重组PAI-1的质粒pBV220/PAI-1,并在大肠杆菌中得到了高效表达。最高表达量为菌体总蛋白量的49%以上,经Western bloting检测,得到了分子量为43.0kDa的反应条带。对形成包涵体的表达产物进行变、复性处理及Sephadex G-75的初步纯化,得到了潜伏态的重组P 相似文献
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为了研制基因工程狂犬病疫苗,我国于1991年首次报道了在痘苗病毒天坛株中表达狂犬病毒糖蛋白,但报道中重组病毒的选择是先经人骨髓瘤细胞(TK-143)在诱变剂5-溴脱氧尿苷(BrudR)作用下通过标记拯救技术筛选出携带有同源基因的重组病毒,然后再利用重组病毒中携带的Lac基因为选择标记,通过噬斑纯化获得重组病毒,用这种选择方式获得的重组病毒,经过了TK-143细胞和BrudR,因此不宜发展成疫苗,本研究探索不经过TK-143细胞和BrudR,仅利用Lac基因为选择标记,直接在鸡胚细胞上通过噬斑纯化获得重组病毒,现将研究结果报道如下。 相似文献
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汉滩病毒A9株M基因片段在重组痘苗病毒中的表达及鉴定 总被引:7,自引:0,他引:7
为发展国产化肾综合征出血热(HFRS)病毒基因工程疫苗,选择了汉滩病毒A9株M基因片段为目的基因,构建转染质粒pJSBA9M。以携带Lac基因的重组病毒为亲本,使表达载体pJSB-A9M上的M片段与痘苗病毒内的Lac基因重组,将Lac置换成A9M片段。用蓝白斑法筛选重组痘苗病毒,经PCR扩增证实A9M片段重组入痘苗病毒基因组内。重组痘苗病毒感染的Vero E6细胞,用抗糖蛋白单克隆抗体(HCO2、 相似文献
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狂犬病毒糖蛋白基因的痘苗病毒表达质粒 pWS 4在鸡胚细胞内与野生型痘苗病毒天坛株 (痘苗病毒 )同源重组 ,经蚀斑纯化 ,获得表达狂犬病毒糖蛋白基因的重组痘苗病毒 (重组病毒 )。该重组病毒DNAdotblot显示强阳性信号 ,间接免疫荧光试验胞膜及胞浆均见到强阳性荧光反应 ,Westernblot分析仅在 6 4ku处呈现一条狂犬病毒非融合性糖蛋白带。免疫小鼠和狗 ,第 2 8d抗狂犬病毒中和抗体滴度分别达 2 4 30和 >6 96。初免后 14d用 5 0~ 10 0LD50 狂犬病毒CVS株对小鼠脑内攻击 ,保护率达 80 %以上。致病性明显减弱。从第 11代起连续传至 30代 ,病毒纯度、病毒滴度、血凝滴度、蛋白的表达、抗原活性和保护性均无差异 ,说明该重组病毒有良好的遗传稳定性。 相似文献
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人重组白蛋白基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达 总被引:10,自引:0,他引:10
The yeast Pichia pastoris was transformed by the multi\|copy Pichia expression vector that can express secreted human albumin.The high level expression of cell line was selected after screening.The expression of human recombinant albumin in Pichia pastoris induced by different methods were compared.The retio of secreted human albumin is 80% in total secreted proteins and the expression level reaches as high as is 10g/L. 相似文献