中国汉族人群MASP2基因单核苷酸多态性的连锁不平衡和单体型分析

目的：探讨中国汉族人群甘露糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶（MASP2）基因单核苷酸多态性（SNP）的连锁不平衡和单体型,为相关研究提供更为详实的数据。方法：选取30例广州汉族无关个体,用重新测序的方法进行MASP2基因SNP的发掘,构建连锁不平衡（LD）模式,与HapMap公布的其他4个人群数据相比,并选择4个标签SNP（tagSNP）在232例北京汉族个体和291例广州汉族个体中分析MASP2的多态性和单体型。结果和结论：对MASP2的重测序共检测出16个SNP,LD分析显示来自中国不同地区人群的LD模式基本相同,与来自美国和日本的人群存在差异;北京和广州地区汉族人群tagSNP的等位基因和基因型频率分布不存在显著差异。     

重组人MASP2蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化

目的:获得酶原形式的重组人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)。方法:在大肠杆菌中诱导表达重组人MASP2全长蛋白,包涵体裂解后,经复性、透析、浓缩、考马斯亮蓝染色、SDS-PAGE及Western印迹,鉴定纯化结果及酶活性。结果:复性后的MASP2蛋白经考马斯亮蓝染色未见杂带。自激活实验表明,当MASP2浓度在1μmool/L以下时,无论在4℃还是37℃,都能较稳定地保持酶原形式;蛋白浓度为3.5μmool/L时只能在4℃保持稳定,37℃发生自激活;蛋白浓度达到12μmool/L后,在4℃时已不能稳定存在。结论:获得了较纯的重组人MASP2蛋白,且具有自激活活性。     

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶

甘露聚糖结合凝集素（MBL）是一种重要的天然免疫防御分子,通过激活MBL相关丝氨酸蛋白酶（MAST）而启动补体激活凝集素途径来清除病原体。本文就MASP的基因、分子结构及功能等方面研究概况作一介绍。     

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。     

单核苷酸多态性检测技术的研究进展

单核苷酸多态性是指在基因组水平上单个核苷酸变异引起的一种DNA序列多态性。因其具有密度高,遗传稳定,易于进行自动化、规模化分析等优势它已成为第三代分子标记,因此其检测技术也在近几年得到了快速的发展。将对未知单核苷酸突变位点的检测方法和已知单核苷酸突变位点的检测方法这两部分的研究进展作一综述。     

MBL在结肠直肠癌中的基因分型

目的：MBL是补体激活凝集素途径的关键因素。MBL基因多态性影响MBL血清水平。结肠直肠癌患者血清MBL水平升高。低水平的MBL则预示着术后肺炎的发生,目前还不清楚此相关性是否与遗传相关。本实验分析调查了结肠直肠癌患者和健康对照者的MBL基因分型,评估基因分析和复发率、生存率之间潜在的相关性。方法：使用TaqMan基因分型分析法和实时定量PCR分析MBL基因的4个SNP、启动子区2个SNP、非编码区1个SNP;ELISA测定标本血清MBL含量。结果：所有标本中发现了8种不同的MBL单体型,它们在患者和健康者中出现频率几乎是完全一样的;YA/YA基因型与高水平的MBL相关,YO／YO与低水平的MBL水平相关,6种不同基因型CRC患者的MBL水平存在着明显不同。结论：MBL基因型与血清MBL浓度显薯相关（P〈0．0001）;突变型B,C,D和启动子单体型Y,X对MBL含量的影响起主要作用;MBL基因型和术后感染并发症没有明显相关性（P=0．33）,与复发癌和存活时间也没有明显相关性（P=0．74）。因此,从基因水平还不能解释为何结肠直肠癌患者血清MBL水平增加。对比已经检测出的血清MBL水平,其基因型还不能预测结肠直肠癌患者的疾病进程。     

MBL 在结肠直肠癌中的基因分型

目的:MBL是补体激活凝集素途径的关键因素。MBL基因多态性影响MBL血清水平。结肠直肠癌患者血清MBL水平升高,低水平的MBL则预示着术后肺炎的发生,目前还不清楚此相关性是否与遗传相关。本实验分析调查了结肠直肠癌患者和健康对照者的MBL基因分型,评估基因分析和复发率、生存率之间潜在的相关性。方法:使用TaqMan基因分型分析法和实时定量PCR分析MBL基因的4个SNP、启动子区2个SNP、非编码区1个SNP;ELISA测定标本血清MBL含量。结果:所有标本中发现了8种不同的MBL单体型,它们在患者和健康者中出现频率几乎是完全一样的;YA/YA基因型与高水平的MBL相关,YO/YO与低水平的MBL水平相关,6种不同基因型CRC患者的MBL水平存在着明显不同。结论:MBL基因型与血清MBL浓度显著相关(P<0.0001);突变型B,C,D和启动子单体型Y,X对MBL含量的影响起主要作用;MBL基因型和术后感染并发症没有明显相关性(P=0.33),与复发癌和存活时间也没有明显相关性(P=0.74)。因此,从基因水平还不能解释为何结肠直肠癌患者血清MBL水平增加。对比已经检测出的血清MBL水平,其基因型还不能预测结肠直肠癌患者的疾病进程。     

单核苷酸多态性检测分析技术

单核苷酸多态性(SNP)作为第三代遗传标记已经广泛用于基因作图、疾病相关性分析、群体遗传学及药物研究等领域。 文中系统地介绍了目前国内外主要的SNP检测技术,任何一种SNP的检测方法都可将之看成由两部分组成,即区分SNP位点的原理方法和数据的检测分析手段,文章对这两部分做了较详细的介绍,并对SNP检测技术的发展进行了展望。 Abstract :As the third generation of genetic markers SNPs（single nucleotide polymorphisms）has been used extentively in gene mapping,disease-correlativity analysis ,population genetics and drug research.Here methods for detection are reviewed.Most SNP genotyping are a combination of method for interrogating SNPs and analysis tecnique.It described both parts and give a outlook for detection.     

单核苷酸多态性检测方法的研究进展

单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）的研究已成为人类后基因组时代的主要内容之一。因此建立高度自动化和高通量的SNP检测分析技术十分重要。文章系统地介绍了最新发展的几种SNP检测技术的原理和检测平台,详细阐述了等位基因特异性杂交、内切酶酶切技术、引物延伸法、寡核苷酸连接反应等SNP检测原理,以及平板读数仪、基因芯片、微球阵列技术和质谱仪等检测平台,并对SNP高通量检测技术的发展进行了展望。     

人类基因组中单核苷酸多态性的检测技术

随着人类基因组测序工作的完成,单核苷酸多态性作为继限制性片段长度多态性和微卫星多态性这2种遗传标记之后的第3代遗传标记,已成为人类后基因组时代的主要研究内容之一。系统地介绍了人类基因组中单核苷酸多态性的传统检测方法、新的方法以及基于生物信息学的方法,并对SNP检测技术的发展进行了展望。     

Characterization of the complex between mannose-binding lectin trimer and mannose-binding lectin-associated serine proteases

Mannose-binding lectin (MBL) is an oligomeric serum lectin involved in innate immunity. Human MBL is complexed with three types of serine proteases (MASP-1, MASP-2 and MASP-3) and two types of their truncated forms (sMAP and MAp44). When an MBL complex binds to carbohydrates of pathogens, the complement system is activated via the lectin pathway. Human MBL is a mixture of different sized oligomers that range mainly from trimers to hexamers. It has been suggested that different MBL oligomers may have distinct MASP compositions. In the present study, an MBL trimer (MBL-I) exclusive of other oligomers was isolated from human serum by chromatography. Immunoblot analysis of MBL-I revealed that it had been co-purified with MASP-1 and sMAP. This suggests that MASP-1 and sMAP are bound to each other in MBL-I. The MBL-I complex was found to activate C2, but to lack the ability to activate C4 due to the absence of MASP-2.     

GWAS在2型糖尿病相关基因研究中的应用

2型糖尿病(type 2 diabetes,T2D)是一种常见的复杂疾病,其发病受到遗传和环境因素的共同作用.全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)是一种可在全基因组范围筛查疾病相关的序列变异的新型群体关联研究方法.近年来,采用GWAS以及在此基础上展开的meta分析,已分别在TCF7L2、HHEX-IDE、SLC30A8、CDKAL1、CDKN2A-CDKN2B、IGF2BP2、NOTCH2、CDC123-CAMK1D、ADAMTS9、THADA、TSPAN8-LGR5、JAZF1等12个基因区域鉴定出多个T2D相关的多态位点.已有的研究提示,上述多个基因可能在胰岛β细胞发育和功能维持方面扮演着重要角色.本文集中介绍了GWAS的原理及其在T2D研究中的优势;回顾了GWAS在T2D研究中的主要发现;并对运用GWAS在T2D研究中尚需解决的问题进行了总结和展望.     

单核苷酸多态性技术在鸡遗传变异中的研究及应用

单核苷酸多态性(SNP)是继限制性片段长度多态性、微卫星标记之后的第三代分子标记,通常呈双等位基因多态。本文从SNP的特点、SNP的发现与检测、SNP数据库、SNP的频率及其与表型的关系等方面简述了SNP在鸡遗传变异中的研究及应用进展。     

补体系统基因单核苷酸多态性及其与疾病的关系

天然免疫系统在病原微生物入侵的初始阶段发挥着重要的防御作用,其中补体系统可快速识别、杀伤和清除病原微生物,对疾病的发生、发展和转归起着重要的作用。文章综述了补体系统各成份单核苷酸多态性与疾病的关联研究进展,在DNA水平上揭示了补体系统遗传多态性对疾病发生、发展和转归的影响,对疾病的预防和个体化治疗具有重要的意义。     

PON基因簇序列变异筛查研究

摘要：系统筛查PON1、PON2及PON3基因编码、剪接及侧翼序列,以期发现所有潜在功能多态基因座,为进一步探讨PON基因家族与心血管疾病的关系做准备。随机选择48例冠心病患者作为筛查对象, 以PCR产物直接测序检测DNA序列变异。扩增片断涵盖整个外显子, 其两侧部分内含子区域及5’和3’侧翼序列。（1）13.9kb测序范围内共发现31个多态性基因座,均为单核甘酸多态（SNP）,其中17个SNP为首次报道。（2）国人中SNP构成和等位基因频率与高加索人群存在显著差异。（3）一个基因内部两个或多个多态性基因座间存在完全或近乎完全连锁不平衡相当常见。中国汉族人群中PON基因簇多个潜在功能多态基因座的识别及这些基因座间的强连锁不平衡状态,为在国人中探讨PON基因簇与心血管疾病关系提供了重要的基础数据。     

hRFT2基因单核苷酸多态性的生物信息学分析

旨在筛选可能与人类疾病有关的hRFT2基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,nsSNPs)和突变位点,从SNP数据库中检索并筛选出395个有效的hRFT2基因SNPs,其中包括30个同义SNPs(synonymous SNPs,sSNPs)和31个非同义SNPs(non-synonymous single nucleotide polymorphisms,nsSNPs)。分别采用SIFT、SNPs3D和PolyPhen-2方法分析nsSNPs引起的氨基酸替换是否可能影响hRFT2的功能。结果表明,5个nsSNPs(rs11477762、rs146302587、rs146492942、rs76947760和rs145431028)可能严重影响hRFT2蛋白的功能,其中rs76947760和rs145431028的影响已得到临床证明,另外3个nsSNPs(rs148387972、rs140391358和rs3746802)也可能对hRFT2有较大的影响。     

一种单核苷酸多态性的单倍型分析技术

运用多步PCR和测序技术,完成基因组中相距较远的单核苷酸多态位点的单倍型构建。通过设计2条等位基因特异性引物,扩增大片段DNA(10kb左右),以此大片段DNA作为下一轮PCR反应的模板,再在该片段中设计待检测区域的PCR引物,进行第2轮PCR。对PCR产物进行测序分析,确定其多态位点处的等位基因。结合第1轮PCR中的等位基因特异性引物,即可确定该大片段DNA中不同单核苷酸多态性构成的单倍型。以脂蛋白脂酶基因为例,应用其启动子区以及第4外显子区的等位基因特异性引物扩增约16kb的DNA片段,然后检测位于该片段中第2、3外显子的多态性。在￡-尸￡-基因第2内含子中发现了 13557G→A多态性。经分析确定出-421G／ 13557G／ 15222A、-421A／ 13557G／ 15222A、-421G／ 13557G／ 15222G、-421G／ 13557A／ 15222A等4种单倍型。等位基因特异性PCR结合小片段测序是一种快捷高效的对相距较远的多个SNP进行单倍型构建的新策略。