利用早孕绒毛组织和PCR技术检测先天性人巨细胞病毒感染

人的巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)已成为引起宫内感染的重要原因。在新生儿中先天性HCMV的感染率为0.2-2.2％。为了建立一种可行的先天性HCMV感染产前诊断技术,我们利用早孕绒毛组织和聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术对孕早期的先天性HCMV感染进行了研究。现简报如下:     

建立核酸杂交法检查婴儿与肾移殖病人尿标本人巨细胞病毒DNA序列

人巨细胞病毒(简称HCMV)感染能引起新生儿和免疫系统受到损害后的疾病,例如在美国大约有1％的婴儿因HCMV的先天性感染导致丧失听力或影响智力的发育。除此之外,器官移殖病人长期服用免疫抑制药物引起潜伏感染的HCMV的增殖,并导致术后长期发热,甚至引起肺炎,或者术后移殖器官的排斥。目前常用的诊断     

安徽医科大学基础医学院微生物学教研室

近年来微生物学教研室在致先天性感染病毒如HCMV和HSV等方而做了大量有新意的研究工作,先后构建了HCMV和CBV cDNA文库。克隆了HCMV pp65、HSV IE63等表达全长基因,构建了四株基因工程菌并准备应用于发酵工程等方面的研究。     

人巨细胞病毒免疫球蛋白的研制及其临床应用

制备人源性高效价人巨细胞病毒 (HCMV)特异免疫球蛋白 (IgG)。采用ELISA从检定合格的血浆中筛选出滴度≥ 1∶5 0 0 0的血浆 ,合并后按低温乙醇法制备HCMV IgG ,再次检定后应用于临床。结果显示 ,按人免疫球蛋白标准检定 ,所制备的HCMV IgG全部合格 ,HCMV IgG滴度为 1∶15 0 0 0 0。临床应用结果表明 ,2批高效价HCMV IgG均可明显降低先天性HCMV感染率。     

利用PCR技术检测孕早期先天性沙眼衣原体感染

先天性感染已成为引起出生缺陷的重要原因,据调查,约有２—８％的新生儿受到先天性感染的影响〔１〕。由风疹病毒等感染引起的先天性感染已逐步为人们所重视,但由沙眼衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ,Ｃｔ）引起的先天性感染尚鲜为人知。本研究利用...     

孕妇尿液人巨细胞病毒DNA筛查及血液HCMV抗体测定的对照研究

目的对于孕妇尿液进行HCMV—DNA筛查,减少和有效地避免胎儿及新生儿的HCMV感染。HCMV．DNA筛查同时进行HCMV抗体检测,明确诊断HCMV感染的灵敏、准确方法。方法应用荧光定量PCR（FQ．PCR）方法进行尿液HCMV-DNA测定。血液HCMV IgM、IgG抗体检测应用酶联免疫（ELISA）方法。结果筛查6568例孕妇尿HCMV．DNA,阳性273例,阳性率为4．2％。孕妇在12—20周者,阳性率为10．3％;孕妇在21～30周者,阳性率为33．3％;孕妇在31～39周者,阳性率为56．4％。在273例尿液HCMV—DNA阳性者中,56例同时进行血液HCMV IgM、IgG抗体检测,Igi抗体阳性者2例,IgG抗体阳性者22例。结论在孕妇HCMV感染的筛查与诊断中FQ．PCR是灵敏准确的方法。孕妇中HCMV—DNA筛查是保证母婴健康,提高人口素质的保障。     

巨细胞病毒感染的治疗研究进展

人巨细胞病毒(HCMV)为DNA双螺旋病毒,属疱疹病毒科β亚科,是疱疹病毒科中基因组最大的病毒。HCMV通常呈隐性感染,正常人感染HCMV并无临床症状,一旦人体的免疫机能发生变化(如肿瘤、AIDS、妊娠、新生儿和器官移植),HCMV即从潜伏态转化为原发性或继发性的增殖感染,引起严重的临床症状甚至死亡。因此,HCMV的预防和治疗越来越受到关注,就CMV感染的预防及治疗方法进行了综述。     

人巨细胞病毒感染的实验室诊断及进展

巨细胞病毒(CMV)属疱疹病毒β亚科,分布广泛,在人及其他哺乳动物中感染非常普遍。在人类中,人巨细胞病毒(HCMV)感染率约为40—100%,但多数为隐性感染。新生儿中,平均有1%受感染,在经济条件较差的国家,感染率更高(2—3%)。无论是显性还是隐性先天性HCMV感染,都可造成婴儿不同程度的损害。免疫损害的病人可发生严重的或致死性的HCMV感染。目前,随着新的抗病毒药物的发现及其在临床上广泛应用,H{CMV感染的实验室诊断就显得愈加重要。由于HCMV在人纤维母细胞中产生细胞病变(CPE)慢,病毒分离不符合临床早期诊断的要求,需要有新的、快速、敏感的方法取代。本文就HCMV感染的实验诊断及新近进展作一概述。     

人巨细胞病毒在包皮细胞培养中的潜伏性感染

用具有特异性抑制蛋白质糖基化作用的含氨基葡糖的衣霉素Tunicamycin(TM)处理人胚包皮细胞(HEF)建立起人巨细胞病毒(HCMV)的潜伏性感染模型。观察了TM对HEF细胞及HCMV的毒性作用,当TM浓度大于500ng/ml时对单层细胞生长有影响;在TM浓度为500ng/ml时,细胞生长虽受一定程度的影响,但仍然逐步生长扩增;不同浓度的TM对HCMV有不同程度的影响,但不能将全部HCMV在短期内完全抑制,在TM含量1000ng/ml的维持液中处理5日的HCMV感染细胞培养物中未检出感染性病毒。感染HCMV的HEF单层细胞保持在含TM500ng/ml的维持液中于37℃培养7日,然后换加不含TM的维持液并改置40.5℃中培养,可保持HCMV以非感染性的病毒状态潜伏于HEF细胞内长达135日;在此潜伏期间如将细胞培养物由40.5℃再移置37℃中培养,HCMV能被激活为可检测到高滴度的感染性病毒。定期取在40.5℃中培养的HCMV潜伏感染细胞培养物进行感染中心测定(Infections Center Assays),感染中心滴度(Infectous Center Titer)为0.0004％～0.005％,只有很低的病毒重激活率。对潜伏性感染及TM引起疱疹病毒的潜伏性机理结合文献作了简要讨论。     

利用接种人体组织的SCID小鼠研究疱疹病毒的发病机理

人细胞巨化病毒(HCMV)和带状疱疹病毒(VZV)属于疱疹病毒家族。对于有免疫力的宿主,HCMV很少引起疾病症状,但对于有免疫损害和成长中的胎儿,HCMV是引起感染性疾病和死亡的主要病因。VZV感染可引起水痘和带状疱疹。由于这些种属特异性疱疹病毒不能感染其他动物,没有动物模型可用于发病机理的研究。移植了人免疫组织的严重联合免疫缺陷小鼠(SCID-hu)为这项研究提供了一个有价值的模型。我们用HCMV或VZV感染SCID-hu以调查在人胎儿胸腺/肝脏组织的发病机理。HCMV临床分离株能在SCID-hu小鼠的移植组织中复制达到较高的滴度。然而…     

人巨细胞病毒编码miRNA功能及其作用机制

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）是疱疹病毒β亚科中的代表成员之一,是一种具有囊膜包裹的DNA双链病毒,对免疫耐受群体和先天性感染的婴幼儿具有很高的发病率。HCMV具有潜伏感染和裂解感染两种感染状态。这两种感染过程中均有不同的miRNA表达模式。这些miRNA不仅参与胞内宿主或病毒自身基因表达调控与病毒复制,也能调节胞内物质的转运和病毒感染状态的转变等过程。本文就HCMV编码的miRNA,其生物合成机制和生物学功能进行简要综述,为深入研究其生物功能和作用机制奠定基础。     

HPV和HCMV在慢性宫颈炎病人中的分布及相关性研究

本文采用DNA-DNA分子杂交技术对病理组织学确诊的87例慢性宫颈炎患者和25例健康宫颈的宫颈活检组织DNA进行了HPV 6、11、16、18型DNA及HCMV HindⅢE片段检测。结果表明,对照宫颈检出率全部为0,慢性宫颈炎检出率HPV 6为16％,HPVll为12.6％,HPV16为11.5％,HPVl8为5％,总的HPV DNA相关序列为29.0％,HCMV为12.64％。经显著性检验,HPV DNA相关序列检出率在慢性宫颈炎与对照组间具显著性差异,HPV DNA相关序列阳性者患慢性宫颈炎的危险性为HPV DNA相关序列阴性者20.81的倍。本实验结果还表明HCMV阳性患者中72.7％的病人同时有HPV感染,提示HCMV感染与HPV感染有关。     

抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备及性质研究

人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中感染比较常见,但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志,也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体作为临床免疫检测HCMV感染的关键原料,本研究采用重组表达的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠淋巴结细胞与sp2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆与效价测定,再用Western blotting进行抗体特异性鉴定,最后用免疫捕获PCR和免疫荧光法评价其应用前景。最终获得了1株能稳定分泌高效价的抗HCMV Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8D6。Western blotting及间接ELISA检测其效价分别达1∶4 000和1∶105;细胞免疫荧光与免疫捕获PCR实验结果说明,该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力和特异性,具有作为外周血细胞免疫荧光细胞化学和免疫捕获PCR检测HCMV临床感染的关键原料,也可作为双抗体夹心法检测HCMV临床感染的关键原料,为建立HCMV感染快速灵敏的临床诊断试剂打下了重要的基础。     

孕中期巨细胞病毒宫内感染与血Free-β-HCG水平的相关性研究

目的:通过检测孕中期妇女人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染、宫内感染以及血Free-β-HCG水平,分析血Free-β-HCG水平与HCMV宫内感染的相关性,初步探讨其可能影响机制.方法:通过酶免法测孕妇血HCMV-IgM和定荧光定量PCR对孕中期妇女血清和羊水中HCMV-DNA的检测以及DILFIA法(时间分辨免疫荧光法)定量检测孕中期妊娠妇女血Free-β-HCG的含量,研究HCMV感染状况与Free-β-HCG之间的相关性,探讨HCMV对母血Free-β-HCG水平的影响.结果:718例样本中共检出HCMV-IgM阳性和(或)HCMV-DNA阳性者共43例并进一步行产前诊断羊水HCMV-DNA阳性14例.孕中期HCMV活动性感染率为5.98％,HCMV宫内感染率为2.22％.孕中期感染组Free-β-HCG含量:7.32± 2.25 ng/ml,非感染组:8.47± 3.17 ng/ml,对照组:10.10± 3.67 ng/ml.结论:HCMV宫内感染组比非感染组孕中期外周血Free-β-hcG的测定水平降低,两者结果之间的差异具有统计学意义.HCMV可通过损伤胎盘绒毛滋养层细胞,使Free-β-hcG的分泌减少.     

人巨细胞病毒PP71基因序列分析与表达

人巨细胞病毒(Human cytomegalo virus)在人群中存在非常普遍,大多数呈临床不显性或潜伏感染,孕妇HCMV复发感染或新的感染均可引起新生儿宫内或围产期感染,导致胎儿畸形、智力低下和发育迟缓等.人是HCMV的唯一宿主,病毒可通过人与人间的直接或间接接触传播.近年来对HCMV的致病机理的研究已日趋深入,已有多项研究证实,     

黄芩素抑制人巨细胞病毒感染星形胶质细胞的实验研究

目前对人巨细胞病毒(human cytomegalovirous,HCMV)感染尚无特异有效的治疗和预防手段,研究通过观察黄芩素(baicalein,BAI)抑制HCMV体外感染人星形胶质细胞引起的IE、pp65 mRNA及蛋白表达的变化,探讨黄芩素抗HCMV感染的机制。运用MTT法检测BAI组、HCMV组、HCMV+BAI组和对照组细胞的细胞活性,观察BAI对HCMV感染致人星形胶质细胞增殖异常的抑制作用;Real-time PCR检测不同组之间IE、pp65 mRNA表达的变化;免疫荧光、Western blot技术检测IE、pp65蛋白表达的变化。MTT结果显示,20μmol/L BAI+HCMV组的吸光值在24、48、72 h均高于HCMV组(P0.05);形态学观察病毒感染48 h时,HCMV组细胞出现明显的细胞病变效应(CPE),而20μmol/L BAI+HCMV组细胞状态较好,CPE不明显;Real-time PCR结果显示在感染48和72 h时20μmol/L BAI+HCMV组IE、pp65的mRNA表达明显低于HCMV组(P0.05);免疫荧光、Western blot结果显示20μmol/L BAI+HCMV组细胞的IE、pp65蛋白表达明显低于HCMV组(P0.05)。以上结果显示,适当浓度的黄芩素能抑制HCMV感染所致的细胞增殖异常,同时降低IE及pp65的mRNA和蛋白表达量。     

人巨细胞病毒IE1蛋白功能研究进展

人巨细胞病毒(HCMV)在人群中多数呈隐性感染,但对免疫功能低下者可引起严重的疾病甚至死亡。HC-MV IE1蛋白为一种多功能调节蛋白,是HCMV感染后表达最早且表达量最丰富的蛋白,它可影响病毒和细胞启动子的转录活性,调控HCMV基因的时序性表达,并通过参与不同的信号转导通路,在细胞中发挥促进凋亡或抑制凋亡作用,IE1蛋白与HCMV在体内持续性感染以及肿瘤的形成密切相关。     

HCMV感染对胶质瘤细胞U87自噬的影响

研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对神经胶质瘤U87细胞自噬的影响。通过观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬相关基因Beclin1及其蛋白表达的变化,从而探讨HCMV与神经胶质瘤发生、发展的关系及意义。用HCMV AD169(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞,同时将未感染HCMV的U87细胞作为对照组。分别在6、12、24、48 h用RT-PCR检测Beclin1的表达,Western-blot和免疫荧光检测Beclin1和LC3编码蛋白的表达,最后用CCK-8检测细胞的增殖活性。结果显示,HCMV感染的U87细胞LC3-II蛋白表达水平逐渐下降(P<0.05);同时,HCMV感染的U87细胞Beclin1基因及蛋白的表达水平也逐渐下降(P<0.01),且HCMV感染U87细胞增殖显著(P<0.01)。以上结果表明,HCMV感染抑制胶质瘤U87细胞自噬,并会引起Beclin1表达水平下调,进而导致胶质瘤细胞增殖。     

人巨细胞病毒感染与肠道疾病相关性研究的新进展

人巨细胞病毒(HCMV)普遍感染人类,通常以潜伏感染的状态持续在体内存在。近年来越来越多的研究报道,在肠道疾病患者的肠道内发现HCMV,同时常规激素治疗无效,最终导致严重临床症状,甚至引起死亡。因此,HMCV感染与肠道疾病之间的关系受到高度关注。本文着重对国内、外最新研究进行综述,并进一步阐述HCMV与肠道疾病的关系。     

肾移植术后HCMV感染与淋巴细胞亚群及肾功能的相关性

目的：肾移植患者由于术前透析及术后服用免疫抑制剂,显著增加了人巨细胞病毒（Humancytomegalovirus,HCMV）原发感染和潜伏感染被激活的机会。观察HCMV感染情况与血T淋巴细胞亚群及肾功能的变化,以探讨其相关性及临床意义。方法：跟踪收集40例肾移植患者术前、术后血标本,应用RT-PCR技术检测HCMV,流式细胞术检测淋巴细胞亚群,结合肾功能判断是否发生急性排斥或移植肾功能恢复延迟。结果：肾移植术后HCMV感染率为52．5％,10例出现症状性感染（25％）,出现阳性时间35．7±15．3天。症状性感染组CD3-bCD4＋的水平和CD4＋／CD8＋的比值较无活动性感染组和正常对照组均降低,CD8＋水平较其他组升高,差异有显著性意义（P〈0．05）。无症状性活动感染者与无活动性感染者各指标比较差异无显著性。活动性感染组急性排斥或移植肾功能恢复延迟发生8例（38．1％）,无活动性感染组发生1例（5．2％）,差异具有统计学意义（x^2=6．15,P〈0．05）。结论：肾移植术后HCMV感染能显著引起T淋巴细胞亚群变化,尤其是CD4＋／CD8＋。并与急性排斥或移植肾功能恢复延迟密切相关联,在其发生发展中可能起着重要的作用。三者相互联系、相互作用、互为因果,对进一步机制的研究及临床诊断治疗、预后方面有一定意义。