异硫氰酸胍法快速提取二球悬铃木组织总RNA的研究

针对二球悬铃木组织中多酚物质含量较高的特点,采用异硫氰酸胍法从二球悬铃木花序和叶片中提取到质量高、完整性好的总RNA,28S rRNA的亮度约为18S rRNA的2倍,通过RT-PCR克隆到二球悬铃木中与拟南芥Leafy基因同源的部分编码区。高质量的RNA为Northern杂交和利用同源序列法克隆二球悬铃木的相关基因提供了前提条件。     

改良异硫氰酸胍一步法提取红豆杉细胞RNA

将Chomczynski建立的RNA一步分离法加以适当改进,用以提取红豆杉细胞株E2、TC、H21的总RNA,所获RNA样品的A260/A280比值分别是1.82±0.03、1.85±0.04、1.74±0.03;A260/A230比值分别为2.02±0.03、2.15±0.03、2.03±0.05;得率分别为51.36±0.05μg/g、52.40±0.04μg/g、51.08±0.06μg/g新鲜细胞.变性琼指糖凝胶电泳图谱显示每一样品均具有完好的28S和18S两条亮带.     

三七总RNA提取方法的对比研究

比较利用改进的异硫氰酸胍一步法、异硫氰酸胍高盐法、CTAB法和Thomas’RNA提取法等4种方法提取三七根茎2个部位总RNA的可行性。结果表明,改进的异硫氰酸胍一步法和异硫氰酸胍高盐法能有效地抑制酚类物质、多糖及皂苷等次级代谢产物对总RNA的影响,可从三七根茎中获得质量高、完整性好的总RNA。RT—PCR分析显示提取的总RNA具有反转录活性。这2种方法具有快速、简单、有效的特点。     

一种丹参高质量总RNA的提取方法

高质量RNA的获得是开展丹参分子生物学研究的基础。采用异硫氰酸胍(Guanidine Thiocyanate,GT)法、尿素法、CTAB法、苯酚法和热硼酸改良法等五种方法．以丹参组织培养的幼苗为材料,进行丹参RNA的分离试验,发现所采用的几种方法获得的RNA都有不同程度的降解。分析可能是由于丹参中含有大量的多糖以及各种次生代谢成分造成的。在分析现有结果的基础上对GT法进行了改良,在第二次沉淀前附加低浓度乙醇(10％～20％)沉淀20min对于高质量总RNA的获得效果较好。琼脂糖凝胶电泳检测改良后的GT法无论对于组织培养中幼嫩的根、茎、叶还是大田两年生的丹参根、茎、叶和种子均具有很好的RNA分离效果。mRNA电泳检测发现所得mRNA集中分布在500b～3kb之间且质量较高,完全可以满足丹参各种RNA相关的分子生物学实验要求,为丹参RT—PCR、Northern杂交等分子生物学实验提供了良好的基础。     

斑马鱼总RNA提取和纯化

采取异硫氰酸胍法从斑马鱼的3个样品中提取和纯化RNA,结果表明,RNAA260分别为0、587、0．719、0．151.A260/A280比值分别为1．89、1．92、1．82。电泳条带也清晰可见,可以用于进一步的分子生物学研究。     

一种小量提取植物总RNA的有效方法

以水稻、玉米、辣椒为材料 ,摸索出了一套改良的异硫氰酸胍提取植物总RNA的方法 ,该方法简单、快速、纯度高、完整性强 ,方便有效 ,值得推广。     

非洲菊花瓣总RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒（RNeasy Plant Mini Kit）提取非洲菊（Gerbera hybrida）花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步法提取总RNA,在RNA沉淀后,再次加入适量变性液,冻融2次,再加热至45 ℃使RNA完全溶解;试剂盒提取时,适当延长各提取步骤的离心时间,并增加DEPC H2O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。     

改良Trizol法快速提取棉叶片总RNA

棉叶片组织中存在含量较高的棉酚、多糖等次生代谢物质,使用单纯的Trizol很难获得高质量的RNA。首次采用改良Trizol法成功从棉叶片中快速的提取了总RNA,其所提的总RNA完整性好、纯度高,能进一步满足分子生物学的试验要求。     

干种子高质量总RNA的快速提取方法

高效快速提取高质量的种子RNA是种子分子生物学研究的基础。现有的提取方法难以高效快速地从种子中得到高质量的总RNA。本试验有机地将改进SDS法和异硫氰酸胍法相结合,采用改进的酸性SDS提取液、不溶性PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)阻止酚类氧化、KAc去除多糖、异丙醇沉淀RNA,可以高效地从0.01～0.1g水稻、大豆、蚕豆、芸豆、花生等干种子中提取到高质量总RNA。此法提取的总RNA,能够满足分子生物学研究的要求,可以进行反转录和RT-PCR反应,用于基因表达研究,并为从具相似成分的其他物种干种子提取总RNA提供参考方法。     

非洲菊花瓣RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒（RNeasy Plant Mini Kit）提取非洲菊（Gerbera hybrida）花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步叶提取总RNA,在RNA沉淀后,再次加入适量变性液,冻融2次,再加热至45℃使RNA完全溶解;试剂盒提取时,适当延长各提取步骤的离心时间,并增加DEPC H2O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。     

独行菜属植物玛咖(Lepidium meyenii)的微形态研究

利用光学显微镜和环境扫描电子显微镜,对不同颜色、不同产地玛咖(Lepidium meyenii)的叶表皮、花粉粒以及种皮进行了微形态学研究。结果表明:(1)不同颜色玛珈的叶表皮、花粉粒微形态具有高度的一致性,但与我国部分独行菜属植物有着明显的差异;(2)不同产地、不同颜色玛珈的种皮微形态有明显的差异。该研究为新植物资源玛咖的种质鉴定、分类提供了一些新的依据。     

一种快速提取小麦叶片总RNA的方法

从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键.同种植物不同器官的组织由于组成分的差异,提取RNA的方法也存在不同的难点.在苯酚法和氯化锂沉淀法的基础上,改进并提出了一种适合小麦叶片总RNA的快速提取方法,消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染.该方法提取的小麦叶片总RNA,完整性好、纯度高,可用于RT-PCR、N orthern杂交、RACE等实验操作,而且简单经济、快速、实验结果稳定,重复性好,还适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取.     

一种同时提取细胞总RNA和总蛋白的方法

应用TRIzol法分步提取总RNA和总蛋白,提取的总RNA亮度强、完整,提取的总蛋白与经常规RIPA裂解液提取的全蛋白的质量相当。验证了从同一批次处理的细胞中同时提取总RNA和总蛋白进行检测分析是可行的,而且确保了实验条件的一致性,缩短了实验周期。     

改良的大鼠脑组织总RNA抽提方法

目的:建立一种简单方便、结果稳定的抽提大鼠脑组织总RNA的方法。方法:在传统一步法抽提动物组织总RNA的基础上,通过增加抽提步骤使总RNA与细胞DNA、蛋白质、细胞残片等干扰总RNA质量的杂质有效分离。结果:建立了可以快速、稳定地获得高纯度、未被降解的大鼠脑组织总RNA的方法。结论:采用改良的方法抽提到的总RNA比用传统的一步法得到的总RNA的完整性和均一性好,可直接应用于分子生物学操作。     

从血液中提取总RNA的一种快速高效方法

血液中含有大量的RNA酶 ,可引起RNA的降解 .防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键 .目前提取RNA的方法较多 ,但有些方法尚不能完全防止RNA降解 .将TRIZOL方法稍加改进 ,将TRIZOL与异硫氰酸胍联用提取血液淋巴细胞总RNA .琼脂糖凝胶电泳结果表明 ,其 2 8SRNA与 18SRNA的比值为 2∶1,优于单独使用其中任何一种试剂者 .此方法同样适用于从其它细胞中提取RNA .     

红果人参叶片RNA的提取

提取高质量的RNA是进行人参植物分子生物学研究的必要前提.利用CTAB法、Trizol法、Bizol法和SDS法,从红果人参叶片中提取了总RNA,通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测,结果显示:四种方法得到的纯度都比较高,OD260/OD280值都在1.7～2.0之间;SDS法提取的RNA,凝胶电泳显示28S条带是18S条带亮度两倍,而且无污染,好于其他三种方法.通过KT-PCK,ds cDNA片段条带弥散分布大小在0.2～3.0kb,从而进一步验证了SDS法提取的RNA质量,完全可以进行下一步的分子生物学研究     

台湾牛樟总RNA提取方法的建立

以牛樟Cinnamomum kanehirae根、茎、叶为材料,在RNAprep Pure Plant Kit (Polysaccharides & Polyphenolics-rich)方法的基础上进行改良,建立台湾牛樟总RNA的提取方法。经琼脂糖凝胶电泳、Nanodrop和Aglient 2100检测发现,牛樟根、茎、叶所得RNA的28S和18S比值介于1.7～2.1之间,RNA完整性较好,浓度均在50 ng·μL-1以上,RIN值均大于7。该方法提取的RNA纯度、浓度和完整性均合格,可满足后续分子生物学实验要求。     

一种新型的油樟叶片总RNA提取方法

以油樟叶为试材,比较Trizol法、皂土法、CTAB法、Tris-SDS-异硫氰酸胍法等传统方案提取总RNA,发现效果都不理想.本文针对油樟叶片富含油脂、多酚、多糖的特点,开创性地使用了一种改良的总RNA提取流程:首次增加预处理液、乙酸乙酯抽提来减少油脂、多酚和多糖对裂解液粘稠度的影响,提取过程中使用二氯甲烷代替三氯甲烷增加对疏水性杂质的清除效果,使用混合型高盐溶液多次脱糖,结果表明使用改良的新型方法获得的油樟叶片总RNA条带清晰无明显降解,测得的A260/A280和OD260/OD230均在2.0左右,产物得率约580 μg/g,通过RT-PCR扩增出了油樟18S rRNA基因序长为113bp的特异条带,说明这种改良的新型方法获得的RNA完整性、纯度和产率都远高于常规RNA提取方法,研究探索出一种新型油樟叶片总RNA的提取方法.     

核桃楸叶片中总黄酮的最佳提取工艺研究

利用超声波法对核桃楸叶片中总黄酮的提取工艺进行了研究,在单因素试验的基础上,采用正交试验法,确立最佳提取条件,考察乙醇浓度、提取温度、液料比和提取时间对核桃楸叶片总黄酮提取率的影响。结果表明：超声波法辅助提取核桃楸叶片总黄酮的最适工艺参数是浸提剂乙醇浓度为70%,提取温度为50℃,液料比为20：1,提取时间为20 min,且总黄酮提取率可达4.458%。     

玛咖引种气候适宜区域的选择

运用灰色系统理论和方法对影响玛咖引种的温度、湿度、降雨量、日照时数等因素进行分析,以选择玛咖引种可能的气候适宜区域,为引种栽培工作的顺利实施提供理论指导．