红色诺卡氏菌细胞壁骨架辅助治疗肿瘤作用的研究个例分析及文献复习

摘要 目的：探究红色诺卡氏菌细胞壁骨架(Nocardia rubra cell wall skeleton, N-CWS)辅助治疗肿瘤作用的研究。方法：在北京协和医院肿瘤内科近5年收治的实体肿瘤患者中,选取愿意接受N-CWS辅助治疗的患者,皮下注射红色诺卡氏菌细胞壁骨架（商品名艾克佳）,200～400 μg/次,每周2次,监测其肿瘤标志物血清癌胚抗原(serum carcinoembryonic antigen, CEA)、影像学及体力状况评分(eastern cooperative oncology group,ECOG评分)等变化,评估N-CWS疗效。结果：病例1加用N-CWS后CEA下降并保持低值4月左右,ECOG评分保持在0~1分。病例2加用N-CWS后CEA下降并维持稳定2月,ECOG 0~1分,患者自觉使用后体力较前好转。病例3在化疗6程后CEA保持最低,并保持稳定1个月。ECOG 保持在0~2分。病例1和病例2的CEA保持稳定的时间长于病例3,且ECOG评分保持低于病例3。结论：使用N-CWS辅助治疗肿瘤,患者CEA水平下降,体力状况改善,显著的改善了患者的症状。     

红色诺卡氏菌细胞壁骨架对肺癌细胞的抗癌作用及机制

前人研究发现红色诺卡氏菌细胞壁骨架(N-CWS)具有较好的抗癌活性,然而其对肺癌的抗癌作用机制尚不清楚。本研究旨在揭示N-CWS对肺癌细胞的抗癌作用及机制。通过平板克隆形成实验测定N-CWS对人肺腺癌细胞系A549菌落形成的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低A549细胞的菌落形成能力(p0.05)。通过5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法测定N-CWS对肺癌细胞增殖能力的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低EdU阳性细胞比例(p0.05)。通过Transwell小室和伤口愈合实验评估N-CWS对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,发现N-CWS以A549浓度依赖性方式降低细胞的侵袭和迁移数量及伤口愈合百分比(p0.05)。通过qRT-PCR和Western blotting检测N-CWS对A549细胞E-cadherin、IL-6和MMP-9表达的影响,发现N-CWS以浓度依赖性方式上调了A549细胞的E-cadherin mRNA和蛋白表达(p0.05),但以浓度依赖性方式下调了IL-6和MMP-9的m RNA和蛋白表达(p0.05)。本研究证实红色诺卡氏菌细胞壁骨架可按照浓度依赖性方式降低肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其抗癌机制与上调E-cadherin和下调IL-6和MMP-9有关。     

对胞必佳生产菌株的重新鉴定

主要是从形态学观察、菌株脂肪酸成分和16S rRNA基因全序列3个方面出发,重新对胞必佳生产菌株红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)进行鉴定。结果表明,该菌株并非诺卡氏菌属中的红色诺卡氏菌,而属于红球菌属。16S rRNA序列相似性比较和系统进化树进一步说明,该菌株与Rhodococcus ruber(AY114117.1)的同源性最高,是1株红色红球菌。     

蛋白质粉对小鼠免疫功能的影响

目的探讨蛋白质粉对正常小鼠免疫调节作用。方法将BALB/c小鼠随机分为3批,每批分为4组,分别进行了小鼠免疫器官/体质量比值测定和小鼠碳廓清实验;绵羊红细胞诱导小鼠DTH、抗体生成细胞检测和血清凝血素测定（HC50）;ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验和乳酸锂脱氢酶法（LDH）测定NK细胞活性;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。结果10.00 g/kg剂量的蛋白质粉可增强绵羊红细胞诱导小鼠DTH能力（P〈0.05）,促进抗体生成细胞数的生成（P〈0.01）。3.33 g/kg和10.00 g/kg剂量组能促进ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力（P〈0.05或P〈0.01）和血清凝血素的生成（P〈0.05）;三个剂量组均能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力（P〈0.05或P〈0.01）;3.33 g/kg和10.00 g/kg剂量组能提高NK细胞活性（P〈0.05）;但对小鼠碳廓清能力和免疫器官/体重比值无明显影响。结论蛋白质粉对正常小鼠的细胞、体液免疫和单核-巨噬细胞功能和NK功能有促进作用,即具有增强免疫力功能。     

牡蛎肽对小鼠免疫功能影响的研究

目的：研究牡蛎肽对小鼠免疫功能的影响。方法：将牡蛎肽按0.5、1、2g/kgBW配置为不同浓度,ICR雌性小鼠按0.2 mL/10 g BW经口灌胃30d后,测定免疫器官重量、迟发型变态反应（足趾增厚法）、抗体生成细胞、血清溶血素含量,并镜观察胸腺组织形态。结果：牡蛎肽可以增加免疫器官相对重量和血清溶血素含量,并能显著增加抗体生成细胞和迟发型变态反应（P<0.05）。结论：牡蛎肽可在一定程度上增强小鼠免疫功能。     

红色诺卡氏菌的生物活性

为了考察红色诺卡氏菌菌体(NC)的生物活性, 通过一定浓度的NC对小鼠灌胃给药, 检测其毒性及对免疫器官、巨噬细胞(MΦ)吞噬功能的影响和对肉瘤S180抑制作用。结果表明小鼠口服NC, LD50>10 g/kg; NC明显增加小鼠胸腺脾脏重量、提升白细胞数量和提高小鼠MΦ的吞噬活性; 对小鼠腹腔MΦ具有明显的激活作用, 激活了的MΦ能增强抑杀白色念珠菌作用, 正常的小鼠MΦ也有一定的杀菌作用, 两者差异显著; 对小鼠S180腹水型转实体瘤具有明显的抑制作用。由此得出的结论是, NC毒性低, 能显著增强机体     

基于SecA基因的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法的建立及进化分析

为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法应用于临床样品的检测。结果表明,优化后,引物和探针终浓度分别为0.3和0.1μmol/L,退火延伸温度60℃时,qPCR在9.85×10¹⁰—9.85×10⁰ copies内呈良好的线性关系,灵敏度最高达9.85 copies;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于1%;特异性结果表明,对无乳链球菌、弗氏柠檬酸杆菌和维氏气单胞菌等13种病菌均无扩增曲线;临床对42份大口黑鲈样品进行检测,结果表明,qPCR检出率比普通PCR提高14.24%;对发病大口黑鲈的组织及结节部位检测显示,结节部位菌载量大幅高于非结节部位,最高相差1000倍;SecA基因分析结果显示,SecA基因在传代中和种内高度保守,种间具有一定的离散性,是个很好的用于诺卡氏菌种鉴定的靶基因。研究建立的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方...     

发酵灵芝菌粉抑制小鼠肿瘤及对正常小鼠免疫功能影响的研究

研究了发酵灵芝菌粉对接种S-180瘤细胞后的实验小鼠肿瘤的抑制作用、发酵灵芝菌粉对正常的实验小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力以及脾脏自然杀伤细胞活性的影响,结果表明发酵灵芝菌粉对小鼠移植性肿瘤的生长有明显的抑制作用,但对正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力以及脾脏自然杀伤细胞的活性无明显的免疫促进作用。     

地鳖虫对小鼠免疫功能的调节作用

研究中华真地鳖Eupolyphaga sinensis Walker免疫调节作用。经口给予小鼠1.89、3.78、7.56g/kg/d地鳖虫水煎萃取物,观察其对4周喂养小鼠免疫调节作用。地鳖虫水煎萃取物对小鼠廓清指数和吞噬指数明显增高;血清溶血素抗体滴度水平增加,小鼠脾细胞抗体生成有促进作用;中、高剂量组NO含量极显著高于空白对照组,碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性只有高剂量组高于对照。试验结果表明地鳖虫对机体免疫有提高的作用,说明地鳖虫具有免疫调节功能,具有较高的资源开发利用价值。     

纯大鲵粉对小鼠抗疲劳作用及免疫功能的影响

目的 考察纯大鲵粉对小鼠免疫功能的影响和抗疲劳作用.方法 纯大鲵粉小鼠灌胃,检测免疫器官指数、血清溶血素含量、脾抗体细胞生产数、碳粒廓清指数、耳肿胀度,研究对小鼠免疫功能的影响.测定小鼠负重游泳时间,检测血乳酸、血清尿素氮及肝糖原含量,研究其抗疲劳作用.结果 纯大鲵粉能增加小鼠免疫功能,延长小鼠游泳时间,降低血乳酸变化幅度,提高肝糖元储备,降低尿素氮含量.结论 纯大鲵粉具增强小鼠免疫功能和抗疲劳作用.     

玛咖醇提物对正常小鼠免疫功能的影响

本文采用小鼠碳粒廓清、植物血凝素(PHA)诱导淋巴细胞转化,以及血清溶血素和抗体生成细胞测定等实验,研究南美植物玛咖的乙醇提取物对正常小鼠免疫功能的影响。结果表明,玛咖醇提物显著提高PHA诱导的淋巴细胞转化,促进血清溶血素生成,并增加抗体生成细胞的产生,而对单核巨噬细胞的吞噬功能无显著影响。因此,玛咖醇提取物可提高正常小鼠细胞和体液免疫功能,增强机体抵抗力。     

新加良附方对移植性小鼠肝癌抑制率及其凋亡影响研究

目的:观察新加良附方对移植性小鼠肝癌(H22)生长抑制作用及其对肿瘤组织中Bcl-2和Bax表达影响。方法:建立移植型H22动物模型,并将动物模型随机分模型对照、环磷酰胺(CTX)与新加良附方大、中、小剂量5组。新加良附大、中、小剂量组给药量分别为10g/kg、5g/kg和2.5g/kg;CTX组给药计量为17mg/kg;模型组给予等量无菌生理盐水。连续给药、给水12天处死模型小鼠分离肿瘤,检测肿瘤大小、称重计算肿瘤抑制率,并将肿瘤组织切片,免疫组化法检测Bcl-2和Bax基因。结果:新加良附大剂量组肿瘤抑制率为48.5%,与模型对照组比较,有统计学意义(P<0.01);新加良附大、中剂量可降低肿瘤组织中Bcl-2蛋白基因表达,升高Bax蛋白基因表达,与模型组比较,有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。结论:新加良附方可抑制H22瘤体生长,且下调Bcl-2蛋白基因表达,上调Bax基因,提示新加良附方在抗肿瘤方面具有进一步深入研究价值。     

莫西沙星联合纤维支气管镜药物灌注对耐多药肺结核患者T细胞亚群、肺功能和肝功能的影响

摘要 目的：探讨莫西沙星联合纤维支气管镜药物灌注对耐多药肺结核患者T细胞亚群、肺功能和肝功能的影响。方法：选取2017年2月~2018年12月期间我院收治的90例耐多药肺结核患者,根据随机数字表法分为对照组（n=45,常规基础治疗）和研究组（n=45,莫西沙星联合纤维支气管镜药物灌注）,比较两组患者痰菌转阴率、病灶吸收率、T细胞亚群、肺功能和肝功能。结果：研究组治疗6个月后的痰菌转阴率为88.89%（40/45）,高于对照组的68.89%（31/45）（P<0.05）。研究组治疗6个月后的病灶吸收率为84.44%（38/45）,高于对照组的64.44%（29/45）（P<0.05）。两组治疗6个月后第1 s用力呼气容积（FEV₁）、用力肺活量（FVC）、每分钟最大通气量（MVV）占预计值百分比、总蛋白(TP)、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺均升高,且研究组高于对照组（P<0.05）;丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、CD8⁺均降低,且研究组低于对照组（P<0.05）。结论：莫西沙星联合纤维支气管镜药物灌注治疗耐多药肺结核,可有效阻止疾病进展,同时在改善患者T细胞亚群、肺功能和肝功能方面效果显著。     

Essential Oil from Bark of Aniba parviflora (Meisn.) Mez (Lauraceae) Reduces HepG2 Cell Proliferation and Inhibits Tumor Development in a Xenograft Model

Aniba parviflora (Meisn .) Mez (Lauraceae) is an aromatic plant of the Amazon rainforest, which has a tremendous commercial value in the perfumery industry; it is popularly used as flavoring sachets and aromatic baths. In Brazilian folk medicine, A. parviflora is used to treat victims of snakebites. Herein, we analyzed the chemical composition of A. parviflora bark essential oil (EO) and its effect on the growth of human hepatocellular carcinoma HepG2 cells in vitro and in vivo. EO was obtained by hydrodistillation and characterized by GC-MS and GC-FID. The main constituents of EO were linalool (16.3±3.15), α-humulene (14.5±2.41 %), δ-cadinene (10.2±1.09 %), α-copaene (9.51±1.12 %) and germacrene B (7.58±2.15 %). Initially, EO's cytotoxic effect was evaluated against five cancer cell lines (HepG2, MCF-7, HCT116, HL-60 and B16-F10) and one non-cancerous one (MRC-5), using the Alamar blue method after 72 h of treatment. The calculated IC₅₀ values were 9.05, 22.04, >50, 15.36, 17.57, and 30.46 μg/mL, respectively. The best selectivity was for HepG2 cells with a selective index of 3.4. DNA Fragmentation and cell cycle distribution were quantified in HepG2 cells by flow cytometry after a treatment period of 24 and 48 h. The effect of EO on tumor development in vivo was evaluated in a xenograft model using C.B-17 SCID mice engrafted with HepG2 cells. In vivo tumor growth inhibition of HepG2 xenograft at the doses of 40 and 80 mg/kg were 12.1 and 62.4 %, respectively.     

顺铂联合VEGF抗体对食管癌移植瘤小鼠免疫调节以及癌细胞增殖和肺转移的影响

摘要 目的：研究顺铂联合血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）治疗对食管癌移植瘤小鼠免疫功能、癌细胞增殖以及肺转移的影响。方法：30只BALB/c小鼠通过皮下注射食管癌移植瘤模型。一周后,30只食管癌移植瘤模型小鼠被随机均分为3组,即模型组、顺铂组和联合组。模型组不进行治疗,顺铂组腹腔注顺铂治疗,联合组腹腔注射顺铂联合尾静脉注射VEGF抗体进行治疗,共治疗7周。比较各组小鼠体重,食管癌移植瘤体积和重量,卵巢癌细胞肺组织转移结节数、癌细胞转移面积和转移病灶总数,以及食管癌移植瘤外周血CD4⁺、CD8⁺以及CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞比例。结果：（1）顺博组和联合组小鼠体重均显著高于对照组,而联合组小鼠体重显著高于顺铂组（P<0.05）;（2）顺铂组和联合组小鼠CD4+和CD8+细胞比例均显著低于对照组（P<0.05）,而CD4⁺/CD8⁺却显著高于对照组（P<0.05）;（3）联合组小鼠CD4⁺和CD8⁺细胞比例均显著高于对照组（P<0.05）,而CD4⁺/CD8⁺却显著低于顺铂组（P<0.05）;（4）顺铂组和联合组小鼠食管癌肿瘤组织体积和重量,肺转移结节数、转移面积和转移病灶数均显著低于对照组（P<0.05）,而联合组小鼠显著低于顺铂组（P<0.05）。结论：VEGF抗体可以显著增强顺铂在体内对食管癌的抗癌特性,并有助于增强食管癌移植瘤小鼠免疫功能、抑制癌细胞体内增殖和肺部转移。     

金复康口服液联合培美曲塞对非小细胞肺癌患者免疫功能、肿瘤标志物及血清VEGF、MMP-9水平的影响

摘要 目的：观察金复康口服液联合培美曲塞对非小细胞肺癌（NSCLC）患者免疫功能、肿瘤标志物及血清血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平的影响。方法：研究所涉及的60例NSCLC患者均为2017年8月至2020年8月期间我院收治的患者。根据随机数字表法将患者分为对照组和观察组，分别为30例。其中对照组给予培美曲塞联合顺铂化疗，观察组在对照组的基础上联合金复康口服液治疗，均以21 d为1个疗程，治疗4个疗程。对比两组治疗4个疗程后的疗效，对比两组治疗前、治疗4个疗程后的免疫功能、肿瘤标志物[细胞角质素片段抗原21-1 (CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)]及血清VEGF、MMP-9水平，对比两组毒副反应。结果：观察组的疾病控制率高于对照组（P<0.05）。治疗4个疗程后，两组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺下降，但观察组高于对照组（P<0.05）。治疗4个疗程后，两组CA125、CYFRA21-1、CEA水平下降，且观察组低于对照组（P<0.05）。治疗4个疗程后，两组血清MMP-9、VEGF水平下降，且观察组低于对照组（P<0.05）。两组的毒副反应总发生率对比无差异（P>0.05）。结论：金复康口服液联合培美曲塞治疗NSCLC患者，可控制病灶，降低血清MMP-9、VEGF水平，减轻免疫抑制，安全有效。     

骨髓间充质干细胞移植对心衰大鼠心肌结构和功能的影响

研究骨髓间充质干细胞(MSC)移植对心力衰竭(简称心衰)大鼠心肌结构和功能的影响以及在病损心肌体内分化为心肌细胞的情况。将96只Wistar大鼠,用阿霉素成功诱导了54只心衰模型,随机分成3组,移植组为左室前壁注射MSC,对照组注射培养基,心衰组不给予任何干预措施。由彩色超声心动图(TTE)监测左室心功能参数。8周检测完成后取出心脏标本,做冰冻切片脏染色观察病损心肌结构的变化及免疫荧光检查植入MSC心肌肌球蛋白重链(MHC)及心肌特有的连接蛋白(Cx43)表达情况。结果表明植入的MSC存活并表达了MHC及Cx43,其周围宿主心肌细胞肿胀明显减轻。在移植MSC2周后,心功能开始改善,至8周时,心功改善能更明显。由此得出结论：MSC在病损心肌体内不仅能存活、分化为心肌细胞,使病损心肌组织病变减轻。而且可显著改善心衰大鼠的心功能。