红曲霉DNA提取及其RAPD-PCR反应体系的建立

采用改进的氯化苄法对红曲霉DNA进行提取纯化,探讨了提取液中EDTA的浓度以及其他因素对提取结果的影响。同时,以该法提取的DNA为模板,采用正交实验优化RAPD分析最佳反应条件。结果表明,当提取液中EDTA浓度为125mmol/l时,所得的红曲霉DNA的质量和数量均较理想,每克红曲霉菌丝体（湿重）能提取到50μg的DNA,分子量约为25kb,以此DNA为模板进行PCR扩增,其最佳反应体系为：Mg^2 2.0mmol/l,dNTPs 0.15mmol/l,Taq 0.05U/μl,模板DNA 1.2ng/μl,随机引物0.36μmol/l,Tris-HCl 10mmol/l pH9.0,KCl 50mmol/l,Nonidet P40 0.1%。另外,通过对比RAN酶消化前后的模板扩增结果证明了本实验酶的消化的必要性,对比了不同预变性时间处理模板对RAPD－PCR扩增的影响,发现不经过预变性的模板扩增结果最理想。     

猕猴桃干叶片DNA的提取及叶绿体基因PCR-RFLP反应

采用CTAB法猕猴桃干叶片提取总DNA,运用PCR技术扩增出rbcL和psbA两个叶绿体基因片段,分别用两种限制性内切酶对它们进行酶切分析,实验结果表明,当CTAB提取液体积数为750ul,猕猴桃叶片质量为10mg时,所得到的猕猴桃DNA的质量较为理想：DNA模板量为250ng时,扩增到的特异性条带明亮,无拖尾,2个基因的酶切结果共得到25个限制性位点,其中24个具有多态性,为从cpDNA水平探讨猕猴桃属植物的系统发育打下了坚实的基础。     

南瓜属植物RAPD-PCR反应体系的建立与应用

采用混合DNA样品池,利用正交法对南瓜属植物RAPD反应条件进行了探讨,并利用建立起来的优化体系,从35条引物中筛选出7条引物,对供试中国南瓜、印度南瓜和黑籽南瓜3个栽培种的7个品种进行了RAPD分析,结果均获得了较多的多态性位点。RAPD-PeR反应扩增结果还显示,日本南瓜兼有中国南瓜和印度南瓜的特征带,聚类分析的结果则表明,它与中国南瓜的亲缘关系更近。     

一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法

在总核酸提取方法(PS法)的基础上,经多次实践改进,得出一种以高盐低pH的HAc-NaAc缓冲体系提取总核酸的简便方法,可以从富含多糖、多酚时猕猴桃叶片和花蕾中提取同时含有DNA和RNA的总核酸.所得的总核酸在LiCl溶液中选择性沉淀RNA,从而有效地分离出DNA和RNA样品.紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳分析表明,所提取的DNA和RNA具有较高的纯度和完整性.通过样品DNA的PCR和样品RNA的RT-PCR,认为所提取的DNA样品和RNA样品能够满足分子生物学试验的基本要求.     

小叶锦鸡儿基因组DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以小叶锦鸡儿幼嫩叶片为材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,通过优化AFLP技术体系中的几个主要因素,建立了适合小叶锦鸡儿的AFLP银染反应体系。改良的SDS法能通过在提取液中加入β-巯基乙醇防止氧化、加入PVP去除酚类等物质,获得满足AFLP分析要求的纯度高、完整性好的基因组DNA;用EcoRⅠ和MseⅠ37 ℃双酶切4 h后可以将500 ng的基因组DNA完全切开。酶切产物和接头经16℃连接过夜后,用带有1个选择性碱基的引物和带有3个选择性碱基的引物分别进行预扩增和选择性扩增,扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,用AgNO₃染色,得到了清晰的指纹式样。小叶锦鸡儿AFLP反应体系的建立为利用该技术研究小叶锦鸡儿的遗传多样性奠定了实验基础。     

紫茎泽兰DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以紫茎泽兰叶片为材料,用改进的CTAB法,在提取液中加入2%PVP40(V/V)、0.4%BME(V/V),提取到了高质量的基因组DNA,OD260/OD280在1.7~1.9之间,蛋白质、多酚类、多糖、RNA等去除较彻底,适于AFLP分析。通过对紫茎泽兰DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等实验过程中各关键因素的比较研究,建立了一套优化的AFLP分子标记体系,得到了清晰的AFLP银染指纹图谱,实验结果重复性好。     

棉花高质量DNA的提取及SRAP反应体系的优化

建立一种简便、快速、经济、有效的gDNA提取方法,并以得到高质量的gDNA为模板摸索棉花SRAP反应体系的最优条件。在提取棉花DNA之前对样品进行预除酚处理,采用CTAB法并加以改进,摸索了一种简便、快速、经济、有效的gDNA提取方法。结果表明预处理除酚法提取天然彩色棉的gDNA为白色,OD260 nm/OD280 nm平均值达到1.900,OD260 nm/OD230 nm平均值1.659,琼脂糖电泳检测表明所提取的DNA较完整,RNA含量少;通过对重要参数进行摸索和优化试验,建立一套稳定可靠、扩增效果好、可重复性强的适用于棉花的SRAP反应体系：25μL的反应体系中,模板DNA量30ng、2.5mmolm/L Mg2＋浓度、0.8μmol/L的上下游引物、200μmol/L的dNTPs以及Taq酶1U。     

芒果DNA提取方法比较及ISSR反应体系的优化

为从芒果幼叶中提取高质量的核总DNA,比较了5种DNA提取方法提取芒果叶片核DNA的效果,结果表明:改良CTAB法1提取的DNA A260/A280值最好,ISSR-PCR扩增效果最佳,是有效提取芒果基因组DNA的方法。为得到最佳的芒果ISSR-PCR反应体系,以(ATG)6为引物,采用单因素实验法,优化了ISSR-PCR反应体系:在总体积25μl的反应体系中,含1×反应缓冲液,0.20mmol.L-1dNTPs,0.20μmol.L-1引物,0.60 UTaqDNA聚合酶,30-50 ng DNA模板,不足体积用无菌超纯水补足。     

山茶花叶片DNA提取及RAPD反应体系的研究

山茶花（Camellia japonica L.）是我国特产的名贵花卉之一,由于其品种繁多,在系统分类和品种鉴定上存在一定的难度。本研究针对山茶花的DNA提取方法和RAPD扩增体系进行了摸索,旨在为山茶花在DNA水平的分类鉴定和分子生物学方面研究打下一定的基础。实验采用改进的CTAB法提取山茶花叶片DNA,得到的DNA纯度较高,OD₂₆₀/OD₂₃₀值为1.90～2.0,OD₂₆₀/OD₂₈₀值为1.80～1.83,得率也较高,一般在150～200 μg·g^-1左右,片段完整性较好,大于20 kb,符合分子遗传实验的要求;在山茶花RAPD扩增条件的研究中,发现20 μL反应体系中加入100 ng DNA、125 μmol·L^-1 dNTP(each)、1.2 μmol·L^-1 Mg²⁺、1×Buffer、0.5 μmol·L^-1引物、1 U Taq酶最为合适,退火温度一般设为37℃左右,扩增产物的电泳条带数多、清晰、明亮。     

正交优化法建立奶牛基因组DNA RAPD-PCR最佳反应体系

从 36头荷斯坦奶牛血样中提取基因组DNA ,以相同DNA浓度混成DNA池。以其为模板 ,通过正交设计试验 ,建立了RAPD PCR最佳反应体系。     

改良CTAB法用于多年生植物组织基因组DNA的大量提取*

根据多年生植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对现有的DNA提取方法进行了改进。通过增加提取缓冲液中b-巯基乙醇用量,简化氯仿/异戊醇抽提液步骤,改用经-20℃预冷异丙醇沉淀DNA等,对CTAB法加以改进。改进后方法具有以下优点：（1）获得的DNA质量良好,提取过程无明显的DNA降解,基本上排除了多酚物质的干扰;（2）用获得的DNA进行Southern杂交,可得到理想的杂交信号,可满足相关的分子研究要求;（3）操作简便。Abstract It is a difficult problem to isolate high quality DNA from plants containing a high contents of polyphenolics and polysaccharose, such as Actinidia plant. The protocol described in this paper is a modified CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide) method. High quality genomic DNA can be isolated from Actinidia plant using the improved method. The DNA is good enough for Southern blot and other uses in DNA research. The protocol is also efficient for quick and macro-DNA extraction.     

不同保藏处理的昆虫标本DNA提取及其随机扩增多态DNA反应

实验利用CTAB法对柳二十斑叶甲Chrysomela vigintipunctata (Scopoli)、异色瓢虫Harmonia axyridis Pollas、七星瓢虫Coccinella septempunctata Linnaeus、小地老虎Agrotis ypsilon (Rottemberg)、红蜻Crocothemis servilia Drury、无齿稻蝗Oxya abentata Willemse和中华稻蝗Oxya chinensis (Thunberg)等7种昆虫进行了基因组DNA提取。从自然干燥标本、烘干标本及酒精浸泡标本获得的DNA均可用于RAPD-PCR反应,且烘干标本、酒精浸泡标本提取效果优于自然干燥标本。这种提取方法简便易行,容易掌握,且耗资小于其它分子生物学方法。     

猕猴桃RNA提取与RT-PCR

为了从富含多糖和多酚等物质的猕猴桃幼叶中提取和分离出高质量的RNA,用多个不同品种的猕猴桃叶为材料,比较了3种不同的RNA提取方法所提取的总RNA。结果表明,用胍-酚酸-DEPC法提取的RNA质量最好,提取率达到682.9~780.8μg?g(FW),其R值(A260?A280)接近1.90。用所提取的RNA样品进行RT-PCR,其扩增产物在琼脂糖凝胶上出现明显清晰的扩增cDNA带,说明RNA样品在纯度和浓度上都可以满足PCR等分子生物学实验的基本要求。     

重楼属植物DNA提取的方法研究

为了获得重楼属植物高质量的DNA,以研磨、冻融和细胞溶胀破膜的原理设计了一种DNA提取的方法并与CTAB法和高盐法比较。结果显示该方法提取的重楼属植物DNA纯度（A260/A280=1.792-1.852;A260/A230=2.052-2.267）,产率（6.12-12.84mg/g）较其他两种方法高,降解少,节省药品。所提出的DNA能用于RAPD分析和ITS测序。     

一种蜘蛛基因组DNA的简易提取方法

本文介绍了1种改进的蜘蛛基因组DNA的提取方法.通过与传统DNA提取方法的比较,本方法具有可在常温条件下进行、DNA得率高、简便、经济等优势.     

利用正交设计优化兴安落叶松RAPD-PCR反应体系

以兴安落叶松针叶DNA为模板,对影响落叶松RAPD-PCR 扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立兴安落叶松RAPD PCR反应的最佳体系。通过采用正交设计L₁₆(4⁵)对兴安落叶松RAPD-PCR反应的5因素(Taq酶、Mg²⁺、dNTP、模板DNA、引物)在4个水平上进行优化试验,结果表明兴安落叶松最佳的RAPD-PCR的反应体系(20 μL)中含有模板90 ng,0.5 μmol·L^-1的引物,1×反应缓冲液,DNTP各为0.25 mmol·L^-1,1 U的Taq DNA聚合酶,Mg²⁺ 2.5 mmol·L^-1。在此基础上筛选出20个扩增稳定、多态性丰富的RAPD引物,并通过梯度 PCR试验,确定了引物最佳退火温度。