棉铃虫核型多角体病毒Hind III-K片段的核苷酸序列及其分析

测定了棉铃虫（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａａｒｍｉｇｅｒａ）核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄＩＩＫ片段核苷酸序列。该片段全长３２５５ｂｐ,含可编码大于４０个氨基酸残基的多肽的开放阅读框（ＯＲＦ）１５个,包括多角体蛋白（ｐｈ）基因编码区３′端４８９ｂｐ和蛋白激酶ＨａｖＰＫ基因编码区８０１ｂｐ。在ｐｈ和ＨａｖＰＫ两基因之间鉴定出一个可编码４１２个氨基酸残基的ＯＲＦ１２３６,转录方向与ｐｈ和ＨａｖＰＫ基因相反。同源分析表明,ＯＲＦ１２３６与谷实夜蛾（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａｚｅａ）核型多角体病毒（ＨｚＳＮＰＶ）的ＯＲＦ８推导的蛋白氨基酸序列有９５．９％同源性,与苜蓿丫纹夜蛾（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ）ＯＲＦ１６２９只有２４．８％同源性,但三者均含有二组由多个脯氨酸残基串联而成的特征基序。     

粘虫核型多角体病毒多角体蛋白基因结构和序列和研究

测定了粘虫核型我角体病毒两个ＥｃｏＲＶ片段共１２０１ｂｐ序更,发现一个７１４ｂｐ的开放阅读框（ＯＲＦ）,根据其与ＮＰＶ多角体收白基因同源性的比较和５端典型的１４ｂｐ保守序列。说明此ＯＲＦ即为ＬｓＮＰＶ的ｏｃｕ基因。根据核苷邓列预测的多角体蛋白有２４６个氨基酸,其中酸性和碱性氨基酸数相符,疏水氨基酸含理很高,氨基酸组成中以谷氨酸含量最高,谷氨酰胺和半胱氨酸含量最低。编码区碱基同源性与ＭｂＮＰＶ最高,     

谷子核酮糖1,5—二磷酸羧化加氧酶大亚基基因的核苷酸序列

谷子（Ｓｅｔａｒｉａ ｉｔａｌｉｃａ）叶绿体ＤＮＡ 含有ｒｂｃＬ基因的３．０ ｋｂ Ｂｇｌ Ⅱ＋ ＸｂａⅠ酶切片段被克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ （－ ）质粒载体上,并构建了该基因的限制性酶切图谱,测定了该基因的１９９０ ｂｐ 全序列。其中基因的编码区长１４３１ ｂｐ,共编码４７６ 个氨基酸,推测其分子量为５２６７９ Ｄ。其３８９ ｂｐ 的５′上游区含有类似于原核生物的－ １０ ｂｏｘ、－ ３５ ｂｏｘ 和ＳＤ序列。其１７０ ｂｐ ３′下游区含有３ 个茎环结构。对Ｃ４ 植物和Ｃ３ 植物中的ｒｂｃＬ基因序列进行比较,表明在编码区、启动区和３′下游区没有差别。由此认为Ｃ４ 植物中ｒｂｃＬ基因的细胞特异性表达与其序列无关     

树Qu载脂蛋白CI cDNA序列及其组织表达

分离提取树Ｑｕ肝组织ｍＲＮＡ,经皮为模板,反转录构建了ＴＳ肝组织ｃＤＮＡ文库。利用制备的兔抗ＴＳ载脂蛋白ＣＩ多抗血清为探针筛选该文库,获得两个阳性克隆。测序及序列分析表明：两个克隆均为ＴＳａｐｏｉＣＩｃＤＮＡ基因。大的克隆由３８０个核苷酸要成,包括２１ｂｐ,９５ｂｐ组成的５’和３‘非编码区,２６４ｂｐ组成的一个完整开放阅读框架,编码８８个氨基酸的ａｐｏＣＩ前体,含２６个氨基酸构成的信号肽和６２肽的     

抗人CD3单抗重、轻链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因５’端序列和Ｊ区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的ＯＫＴ３杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ,反转录生成ｃＤＮＡ,以ｃＤＮＡ为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行ＰＣＲ,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入ｐＵＣ１９质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行ＤＮＡ序列测定。所测重链可变区基因全长３５７ｂｐ,编码１１９个氨基酸,轻链可变区基因全长３２１ｂｐ,编码１０７个氨基酸。     

BmNPV蛋白激酶基因核苷酸序列,转录和缺失分析

家蚕核型多角体病毒ＺＪ８株蛋白激酶（ＢｍｖＰＫ－１）基因编码区全长８２８个核苷酸,可编码２７６ａａ的多肽,推测分子量为３２ｋＤ。ＲＮＡ杂交显示病毒感染细胞后１８ｈ,该基因已开始转录,感染后４８ｈ达高峰,为一种晚期或极晚期基因。删除该基因编码区中最保守的３６５ｂｐ,在缺失部位插入ｌａｃＺ基因构建转移载体。与野生型病毒ＤＮＡ共转染ＢｍＮ细胞。同源重组后检测到表达ｌａｃＺ基因的重组病毒蓝斑。但空斑纯化方     

免疫球蛋白变区基因的体外扩增及人—鼠嵌合抗体的表达

应用聚合酶链反应法体外扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的变区基因,经核苷酸序列分析,轻链变基因为３２４ｂｐ,编码１０８个氨基酸,重链变区基因为３１５ｂｐ,编码１１７个氨基酸,将重变区基因克隆至ｐＳＶ２△ＨｇｐｔＨｕγ３质粒,经一系列克隆,筛选,得一插入方面正确的表达人－鼠嵌合重链抗体的载体－ｐＳＶ２△Ｈｇｐｔ２Ｆ７ＶＨＨｕγ３。用电穿孔方法将该粒导入鼠源骨髓瘤细胞Ｊ５８８Ｌ,用霉酚酸进行初步筛选,最终     

抗人黑色素瘤单链抗体基因的克隆和分泌型表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从分泌抗人黑色素瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞ＨＢ８７６０中克隆了抗体轻、重链可变区基因,然后用（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３连接肽基因将ＶＨ、ＶＬ连接成ＳｃＦｖ基因,并进行了序列测定．计算机分析表明ＶＨ,ＶＬ均符合小鼠抗体可变区的特征,为功能性重排的抗体可变区基因．ＶＨ、ＶＬ、ｌｉｎｋｅｒ拼接正确．ＳｃＦｖ基因全长７２９ｂｐ,其中ＶＨ基因长３６０ｂｐ,编码１２０个氨基酸,ＶＬ基因长３２４ｂｐ,编码１０８个氨基酸．在噬菌粒表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中表达了可溶性的ＳｃＦｖ蛋白,表达产物经流式细胞仪检测可特异地与黑色素瘤细胞结合,不与肝癌、胃癌及良性黑痣细胞结合     

葡萄叶绿体rbcL基因的结构分析

以玫瑰香葡萄（Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ Ｌ．）为材料,克隆了含有叶绿体ｒｂｃ Ｌ基因的３．１ ｋｂ Ｂａｍ ＨⅠ片段,构建了该基因的限制性酶切图谱,测定了该基因的核苷酸序列。所测的核苷酸序列总长度为２００４ ｂｐ,其中基因的编码区为１４２８ ｂｐ,编码一个含４７５ 个氨基酸的蛋白质,其分子量约为５３ ｋＤ;测定基因的５上游含启动子的部分共３５８ ｂｐ,包括－ １０ 区（ＴＡＡＡＡＴ）、－ ３５区（ＴＴＧＣＧＣ）和ＳＤ 序列（ＧＧＡＧＧ）;基因的３下游区共２１８ ｂｐ,含有３ 个转录茎环终止结构。玫瑰香葡萄ｒｂｃ Ｌ基因编码区的核苷酸序列与烟草、矮牵牛、菠菜、苜蓿、水稻和玉米之间的同源性分别为９１．５％ 、９１．４％ 、９０．２％ 、８９．８％ 、８６．３％ 和８４．５％ ;推导出的氨基酸序列的同源性分别为９２．２％ 、９１．６％ 、９２．２％ 、９３．７％ 、９３．５％ 和９０．１％ 。     

棉铃虫核型多角体病毒p35基因的PCR扩增和克隆及其在原核细胞中的 …

用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒凋亡抑制基因ｐ３５的合成引物,从棉铃虫核型多角体病毒基因组中用ＰＣＲ扩增到１ｋｂ片段。采用ＰＣＲ－双脱氧核苷酸链终止银染法,测定了所扩增到的１０１０ｂｐ全序列,发现其开放阅读框完整,长８９７ｂｐ,编码２９９个氨基酸。     

橡胶延伸因子基因及3'端非编码区的克隆与序列分析

橡胶延伸因子ＲＥＦ（Ｒｕｂｂｅｒ Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ）是橡胶生物合成中最重要的酶之一．作者利用ＲＥＦ基因序列设计并合成引物． 通过提取胶乳总ＲＮＡ 用ＲＴ法合成ｃＤＮＡ 后,通过ＰＣＲ技术扩增并克隆了ＲＥＦ基因和３端非编码区． 序列测定结果表明,ＲＥＦ基因全长４１４ 个碱基,编码１３８ 个氨基酸,３端非编码区长１１２ ｂｐ． 与Ｇｏｙｖａｅｒｔｓ Ｅ 等人发表的序列比较：ＲＥＦ基因同源率为１００％ ,３端非编码区有２ ｂｐ 的差异,同源率为９８％ ． 将所克隆的ＲＥＦ基因及３非编码区进行地高辛标记, 对胶乳和叶片总ＲＮＡ 进行点杂交分析,结果表明,胶乳总ＲＮＡ 呈阳性反应,叶片总ＲＮＡ 则呈阴性反应．     

人端粒酶RNA基因的克隆与鉴定

以人血基因组ＤＮＡ为模板,合成两段２０个寡聚核苷酸为引物,经过ＰＣＲ扩增,得到４８０ｂｐ的片段,克隆到ｐＭＤ１８－Ｔ载体中,经电泳、酶切、ＰＣＲ鉴定后测定序列。序列分析表明氙克隆的人端粒酶ＲＮＡ（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅａｓｅ ＲＮＡ,ｈＴＲ）基因含有４８０ｂｐ,包括约４５０ｂｐ的编码模板区主序列和约３０ｂｐ的上游调控区序列,其中模板区的１１个核苷酸（５’－ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ－３’）合成端粒亚     

免疫球蛋白变区基因的体外扩增及人－鼠嵌合抗体的表达

应用聚合酶链反应法体外扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的变区基因,经核苷酸序列分析,轻链变区基因为３２４ｂｐ,编码１０８个氨基酸;重链变区基因为３５１ｂｐ,编码１１７个氨基酸。将重链变区基因克隆至ｐＳＶ_２△ＨｇｐｔＨｕγ_３质粒,经一系列克隆、筛选,得一插入方向正确的表达人－鼠嵌合重链抗体的载体－ｐＳＶ_２△Ｈｇｐｔ２Ｆ７ＶＨＨｕγ_３。用电穿孔方法将该质粒导入鼠源骨髓瘤细胞Ｊ５５８Ｌ,用霉酚酸进行初步筛选,最终用兔抗人免疫球蛋白ＩｇＧＦｃ片段的抗体筛选得七株阳性克隆,免疫印迹法结果表明在与人ＩｇＧ相同位置上有一阳性条带。     

炭疽杆菌水肿因子基因的克隆与序列测定

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）从炭疽芽孢杆菌减毒株ＹＢ１中扩增其水肿因子（ＥＦ）的编码区基因,将其克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体中,并分步测定其序列。序列测定表明,该基因长２ ３０１ ｂｐ,编码７６７个氨基酸,与已报道的Ｓｔｅｒｎｅ标准株的ＥＦ基因完全一致。     

炭疽杆菌保护性抗原基因的克隆与序列测定

采用聚合酶链反应从炭疽芽孢杆菌减毒株ＹＢ１中扩增其保护性抗原（ＰＡ）的编码区基因,将其克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体中,并分步测定其序列。序列测定表明,该基因长２２０５ｂｐ,编码７３５个氨基酸残基,与献报道的标准菌株Ｓｔｅｒｎｅ株的ＰＡ序列只有４个碱基的差异。     

生物信息学技术克隆人类神经髓鞘蛋白零家族基因

为克隆新的髓鞘蛋白相关基因,将ＭＰＺ基因编码区ｃＤＮＡ与ＥＳＴ数据库进行同源性比较,得到与ＭＰＺ显著相似的２个ＥＳＴ,构建成８０１ｂｐ的重叠群。此重叠群与定位在１ｑ２４的１２８ｋｂ ｇＤｎＡ的相似性为１００％。计算机分析有ｂｐ和重叠群可能存在一个４３５ｂｐ的阅读框架。在重叠群上设计两个引物与文库载体臂上的引物配对,扩增各种ｃＤＮＡ文库ＤＮＡ作巢式ＰＣ拓所得ｃＤＮＡ上再设计引物进行巢式ＰＣＲ,最终克     

棉铃虫核型多角体病毒p35基因的PCR扩增和克隆及其在原核细胞中的表达

用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ Ａｃ Ｎ Ｐ Ｖ） 凋亡抑制基因ｐ３５ 的合成引物,从棉铃虫核型多角体病毒（ Ｈａ Ｎ Ｐ Ｖ） 基因组中用 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增到了１ｋｂ 片段。采用 Ｐ Ｃ Ｒ－ 双脱氧核苷酸链终止银染法,测定了所扩增到的１ ０１０ｂｐ 全序列,发现其开放阅读框完整,长８９７ｂｐ ,编码２９９ 个氨基酸。用 Ｄ Ｎ Ａ Ｓ Ｉ Ｓ 和 Ｐ Ｒ Ｏ Ｓ Ｉ Ｓ 软件分析发现,此片段与 Ａｃ Ｍ Ｎ Ｐ Ｖ ｐ３５ 基因同源区核苷酸同源性为９１ ％ ,氨基酸同源性也达８１ ％ ,证明了所扩增的片段是 Ｈａ Ｎ Ｐ Ｖ 的ｐ３５ 基因。为了研究此ｐ３５ 基因的功能及其效应机制,克隆了这一基因并在大肠杆菌细胞中实现了表达。     

粘虫核型多角体病毒多角体蛋白基因结构和序列的研究

测定了粘虫核型多角体病毒（Ｌｅｕｃａｎｉａｓｅｐａｒａｔａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ,ＬｓＮＰＶ）两个ＥｃｏＲＶ片段的共１２０１ｂｐ序列,发现了一个７１４ｂｐ的开放阅读框（ＯＲＦ）,根据其与多种ＮＰＶ多角体蛋白基因（ｏｃｕ）同源性的比较和５＇端典型的１４ｂｐ保守序列,说明此ＯＲＦ即为ＬｓＮＰＶ的ｏｃｕ基因。根据核苷酸序列预测的多角体蛋白有２４６个氨基酸,其中酸性和碱性氨基酸数相等,疏水氨基酸含量很高,氨基酸组成中以谷氨酸（Ｇｌｕ）含量最高,谷氨酰胺和半胱氨酸含量最低。编码区碱基同源性与ＭｂＮＰＶ最高,为９７．０％;氨基酸同源性与ＭｂＮＰＶ最高,为９７．５％。密码子偏爱选用以第三个碱基为嘧啶的密码子。二级结构分析表明,α－螺旋（Ｈ）和β－折叠（Ｓ）相等,β－转角含量是Ｈ和Ｓ含量之和。     

抗人CD3单抗轻、重链可变区基因的克隆及序列分析

根据抗体基因可变区两端保守序列ＦＲ１和ＦＲ４,设计并化学合成轻重链ＰＣＲ扩增引物。从体外培养细胞ＵＣＨＴ１中提取总ＲＮＡ,反转录成Ｃｄｎａ,以Ｃｄｎａ为模板经ＰＣＲ扩增轻,重链可变区基因片段。将扩增片段克隆至Ｐｕｃ１９质粒,筛选阳性克隆并测序,序列分析结果为重链３６６ｐｂ,编码１２２个氨基酸,轻链３２７ｂｐ,编码１０９个氨基酸     

水稻脂质转移蛋白基因的分离和分析

用水稻脂质转移蛋白（ｌｉｐｉｄｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＴＰ）的ｃＤＮＡ（ｐＦＤＲＳＣ１１０）为探针,从水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）“广陆矮４号”基因文库中筛选出ＬＴＰ基因,完成了１．８ｋｂ长片段的序列测定。该基因编码一个１２１个氨基酸组成的肽,编码区中间有一个９０ｂｐ的内含子,基因的调控区除有２个ＴＡＴＡｂｏｘ和ｐｏｌｙＡ加工信号外,还存在多个回文序列和逆向重复序列。该基因编码的蛋白质Ｎ端是由２８个氨基酸组成的信号肽,同源性比较表明它具有典型的植物ＬＴＰ特征。