NDV CN株对几种人肿瘤细胞的杀伤作用及其机理的分析

本文研究了NDV-CN株对5株不同的人肿瘤细胞的体外杀伤作用。结果表明5株肿瘤细胞对NDV-CN敏感,于感染早期出现细胞收缩变圆,失去贴壁性,感染第5天时细胞存活率低于10％。其中尤以HEP3B细胞最敏感。但NDV-CN株对人二倍体细胞2BS有弱杀伤性。病毒感染早期可检测到感染细胞中有病毒核酸的复制、感染细胞表面有病毒蛋白的表达,脑浆内有病毒粒子存在。NDV-CN株主要诱导HEP3B及T24细胞产生凋亡,主要诱导Hep2、Hela及A549细胞产生坏死。     

蓝舌病毒HbC3对几株人和动物肿瘤细胞的感染特性研究

用BTV-HbC3感染人肺癌SPC-A-1细胞,人宫颈癌HeLa细胞,人星型胶质瘤U251细胞,小鼠星形胶质瘤C6细胞及人胚肺HEL细胞后,观察细胞病变效应(CPE);运用透射电镜技术及琼脂双扩散试验检测BTV-HbC3对各种不同肿瘤细胞及人胚肺HEL细胞的感染性;并用RT-PCR技术检测蓝舌病毒的增殖情况.结果显示,BTV-HbC3对正常HEL不感染,但能在不同来源的某些肿瘤细胞中选择性增殖,产生不同程度的细胞病变效应(CPE)及调亡现象,终致肿瘤细胞死亡.其中以人肺癌SPC-A-1细胞对其最为敏感.因此,初步认为BTV-HbC3株能靶向性杀死某些肿瘤细胞,从而为深入开展BTV-HbC3靶向性抗肿瘤的研究提供了第一手实验室依据.     

蓝舌病毒HbC3株诱导人肝癌细胞Hep-3B的凋亡

采用MTT法检测BTV-HbC3对Hep-3B细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测BTV-HbC3诱导Hep-3B细胞的凋亡情况,透射电镜观察感染BTV-HbC3的Hep-3B细胞超微结构变化.结果表明BTV-HbC3对Hep-3B细胞具有抑制效应,并呈浓度和时间依赖性;BTV-HbC3作用下Hep-3B细胞呈现凋亡特征;BTV-HbC3能有效感染人肝癌细胞株Hep-3B,并在其中有限地复制,同时抑制该细胞增殖,诱导其进入凋亡.本研究证实了蓝舌病毒HbC3株对人肝癌细胞Hep-3B的杀伤及其诱导凋亡作用,结合本室已反复证实该病毒不感染人源正常细胞的事实,提示了该病毒具有抗人肝癌之潜能.     

蓝舌病毒HbC3对几株人和动物肿瘤细胞的感染特性研究

用BTV-HbC3感染人肺癌SPC—A-1细胞,人宫颈癌HeLa细胞,人星型胶质瘤U251细胞,小鼠星形胶质瘤C6细胞及人胚肺HEL细胞后,观察细胞病变效应(CPE);运用透射电镜技术及琼脂双扩散试验检测BTV-HbC3对各种不同肿瘤细胞及人胚肺HEL细胞的感染性;并用RT-PCR技术检测蓝舌病毒的增殖情况。结果显示,BTV-HbC3对正常HEL不感染,但能在不同来源的某些肿瘤细胞中选择性增殖,产生不同程度的细胞病变效应(CPE)及调亡现象,终致肿瘤细胞死亡。其中以人肺癌SPC-A-1细胞对其最为敏感。因此,初步认为BTV-HbC3株能靶向性杀死某些肿瘤细胞,从而为深入开展BTV-HbC3靶向性抗肿瘤的研究提供了第一手实验室依据。     

重组新城疫病毒Anhinga株与TRAIL蛋白协同杀伤肿瘤细胞

将新城疫病毒（Newscastle disease virus, NDV）Anhinga株的全 长基因组cDNA克隆质粒、pTM1-L、pTM1-P、pTM1-NP表达质粒共转染稳定表 达T7 RNA聚合酶的BSRT7/5细胞,得到拯救NDV病毒．通过PCR、酶切法、测 序证明拯救病毒中存在引入的分子标签.通过血凝实验、蚀斑测定证明成功 拯救病毒.并研究了该重组病毒对4种不同人肿瘤细胞的体外杀伤效果．首 次证明重组Anhinga株对SMMC-7721细胞、A549细胞、HepG2细胞和SH-SY5Y 细胞均有杀伤作用．该重组病毒主要诱导SMMC-7721细胞和A549细胞凋亡, 诱导HepG2细胞和SH-SY5Y细胞坏死．TNF家族成员TRAIL蛋白可以显著增强 NDV杀伤肿瘤细胞的效果.本实验为进一步研究重组NDV用于肿瘤治疗奠定基 础．     

呼吸道合胞病毒感染不同气道上皮细胞的病变特点及易感性分析

为了比较几种不同气道上皮细胞对呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）感染后病变特点及易感性。采用RSV A2株感染Hep-2、A549、16HBE、BEAS-2B细胞后,奥林巴斯倒置免疫荧光显微镜观察细胞病变效应,免疫荧光检测RSV N蛋白表达及空斑实验测定细胞培养上清液中病毒滴度。结果显示RSV A2株感染Hep-2细胞后最早形成典型的合胞病变,A549细胞次之,16HBE及BEAS-2B形成病变的时间最晚。免疫荧光检测到RSV N蛋白表达特点与细胞病变特点一致。RSV A2在Hep-2上产生的病毒滴度最高,A549细胞次之,在16HBE上产生的病毒滴度最低。提示Hep-2、A549细胞对RSV具有高度易感性,以Hep-2最为敏感。而16HBE、BEAS-2B细胞对RSV感染不敏感,其中16HBE最不敏感。本研究可为选择合适的上皮细胞进行RSV相关研究奠定基础。     

蓝舌病毒HbC3株诱导人肝癌细胞Hep-3B的凋亡

采用MTT法检测BTV-HbC3对Hep-3B细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测BTV-HbC3诱导Hep-3B细胞的凋亡情况,透射电镜观察感染BTV-HbC3的Hep-3B细胞超微结构变化。结果表明BTV-HbC3对Hep-3B细胞具有抑制效应,并呈浓度和时间依赖性;BTV-HbC3作用下Hep-3B细胞呈现凋亡特征;BTV-HbC3能有效感染人肝癌细胞株Hep-3B,并在其中有限地复制,同时抑制该细胞增殖,诱导其进入凋亡。本研究证实了蓝舌病毒HbC3株对人肝癌细胞Hep-3B的杀伤及其诱导凋亡作用,结合本室已反复证实该病毒不感染人源正常细胞的事实,提示了该病毒具有抗人肝癌之潜能。     

不同表型的结核分枝杆菌诱导U937细胞凋亡率差异分析

目的利用流式细胞技术检测耐多药结核分枝杆菌(Multidrug resistant mycobacterium tuberculosis,MDRTB)临床分离株和结核分枝杆菌一、二线药物敏感株分别感染U937细胞后的凋亡率及其时相性变化。方法用两组细菌分别感染U937细胞,在感染后2、4、8及12 h用流式细胞技术检测各组感染U937细胞的凋亡率,并分析其时相性变化。结果结核分枝杆菌MDR株和敏感株均能诱导U937细胞凋亡,两组细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P0.01),MDR株诱导U937细胞凋亡率显著低于敏感株诱导的凋亡率,且在诱导后2、4、8及12 h各时间点的凋亡率都显著低于敏感株组,诱导早期凋亡率升高显著,特别是诱导后2 h凋亡率升高最显著,4 h以后凋亡率升高逐渐变慢。结论结核分枝杆菌临床分离株感染U937细胞后能快速诱导其凋亡,凋亡率与诱导菌株的耐药表型相关,敏感株诱导的凋亡率显著高于MDR株,诱导早期凋亡率升高最显著,4 h以后凋亡率升高减慢。     

新城疫病毒FMW株体外溶瘤作用及其机制分析

[目的]筛选出能高效抑制多种人肿瘤细胞生长增殖的新城疫(New Castle disease virus,NDV)毒株,为进一步构建重组高效靶向溶瘤毒株奠定基础.[方法]以体外噻唑蓝法测定NDV对A549、SMMC7721等肿瘤细胞及人胚干细胞L-02、人胚肾细胞HEK293等的生长抑制率,空斑试验确定病毒滴度及感染复数.利用形态学观察、Hoechst荧光染色、流式细胞术及免疫印迹等分析了NDV-FMW诱导肿瘤细胞凋亡的细胞生物学变化及其机制.[结果]从近50株NDV中筛选出NDV-FMW,以20 MOI病毒作用A549、SMMC7721等肿瘤细胞48 h,细胞生长抑制率达60%,NDV-FMW诱导肿瘤细胞发生凋亡,效应呈时间和剂量的依赖性,凋亡细胞出现核染色质断裂、浓缩及二倍体亚峰,细胞周期阻滞于GO/G1期,此外,病毒感染A549细胞16 h后开始检测到活化的Caspase-3裂解片段及PARP裂解大片段.[结论]NDV-FMW株体外能高效抑制肿瘤细胞的增殖,并经Caspase-3途径诱导肿瘤细胞凋亡.FMW株具有自主知识产权,其良好的体外溶瘤能力为进一步探讨体内抗肿瘤及临床试验的进行奠定了基础,并有可能为恶性肿瘤的治疗提供新的生物制剂.     

HCMV在基因转染细胞中复制的研究

用人喉上皮细胞癌细胞系(HEP_2)的DNA转染人胚肺细胞(HEL),得到了5株基因转染细胞(GTC),命名为A5、B3、G8、D3和H3.这些GTC的染色体数在HEL的染色体数与两个亲代细胞(HEP-2和HEL)染色体的和数之间,感染人巨细胞病毒ADI69株后4d,D3比A5、B3、G8和H3有更多的荧光阳性细胞和更高的病毒滴度.在D3中HCMV复制随感染剂量的增大而增速.不同代数的D3对HCMV具有相似的敏感性,HCMV感染传至100代的D3,电镜证实仍可象原代D3复制大量的HCMV.永生性的D3可以用作分析调控HCMV复制的宿主细胞因子、分离培养HCMV等的工具.