抗冻蛋白及其在植物抗冻基因工程的应用

从应用的角度系统综述了抗冻蛋白（ＡＦＰs)的特性、活性、用途、生化特征、在细菌中的表达,在植物抗冻生理中的作用及其基因工程,简洁地讨论了抗冻蛋白的研究现状和最新进展。     

植物抗冻蛋白研究进展

抗冻蛋白(AFPs)最初是从极区海鱼中发现的一种适应低温的特异蛋白质, 它能阻止体液内冰核的形成与生长,维持体液的非冰冻状态.对近年来植物AFPs的发现过程,AFP的生化特性,抗冻作用机制,抗冻蛋白基因工程及其应用前景等作了系统的综述.     

人组织型纤溶酶原激活剂（t－PA）突变体FrGGI的构建、表达及特性分析

为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有ＰＡＬ－１抗性的新型ｔ－ＰＡ溶栓剂,利用基因重组及定位突变技术构建了ｔ－ＰＡ的Ｋ１、Ｋ２区糖基化位点消除,ＰＡＩ－１结合位点缺失,Ｆ与Ｅ区连接序列Ｈｉｓ４４～Ｓｅｒ５０置换为纤粘蛋白Ⅰ型Ｆ区间连接序列ＧｌｕＳｅｒＬｙｓＰｒｏＧｌｕＡｌａＧｌｕＧｌｕ的ｔ－ＰＡ组合突变体ＦｒＧＧＩ,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明,ＦｒＧＧＩ在大鼠血浆中的半衰期延长了１５倍,并获得了ＰＡＩ－１抗性,是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）突变体FrGGI的构建,表达及特性…

为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有ＰＡＩ－１抗性的新型ｔ－ＰＡ溶性剂,利用基因重组及定位突变技术构建了ｔ－ＰＡ的Ｋ１、Ｋ２区糖基化位点消除,ＰＡＩ－１结合位点缺失,Ｆ与Ｅ区连接序列Ｈｉｓ４４￣Ｓｅｒ５０置换为纤粘蛋白Ｉ型Ｆ区间连接序列Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ的ｔ－ＰＡ组合突变体ＦｒＧＧＩ,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达,对表达产物的生物学特性分析表明     

美洲拟鲽抗冻肽基因在E.coli中的表达

动物抗冻肽（ＡＦＰ）以降低动物体液冰点而使其能在寒冷的环境中生活,因而ＡＦＰ在防寒抗冻方面有较大的潜力。根据美洲拟鲽ＡＦＰ基因的ｃＤＮＡ序列,人工合成了ＡＦＰ及春含前导序列的ｐｒｏＡＦＰ的ｃＤＮＡ,并构建成ＰＡＦＰ及ＰＰＡＦＰ原核表达载体。由于ＡＦＰ表达量少且蛋白分子很小,用ＳＤＳ－蛋白电泳难以检测。为了提高检测的灵敏度,把报道基因ＣＡＴ的ＣＤＮＡ按读码框连接到ＡＦＰ的３＇末端,构建成融合基因表达     

淡水瓦氏雅罗鱼基因文库的构建和抗冻蛋白基因同源序列的筛选

极地海域中的鱼类非常耐寒。它们的血液里常含有两种能降低其体内冰点的蛋白质：抗冻糖蛋白（ＡＦＧＰ）和不含糖的抗冻蛋白或抗冻多肽（ＡＦＰ）。这些蛋白的编码基因已经被克隆,并将黄盖鲽ＡＦＰ导入虹鳟鱼和大西洋鲑鱼,而改变了它们的抗冻性能。为开展中国的抗冻转基因鱼研究,本项目对中国北方的耐寒淡水鱼的抗冻基因进行了分离研究。所用实验材料鱼为中国内蒙古北部生活的瓦氏雅罗鱼（Ｌｅｕｃｉｓｃｕｓｗａｌｅｃｋｉｉ）,属鲤形目（Ｌｙｐｃｉｎｉｆｏｒｍｅｓ）,鲤科（Ｌｙｐｒｉｎｉｄａｅ）,雅罗鱼亚科（Ｌｅｕｃｉｓｉｎａｅ）。基本按标准方法构建瓦氏雅罗鱼的基因文库,只在包装反应至３０分钟时,再加一份ＢＨＢ２６９０制备物,并延长３０分钟反应时间。所得文库的成斑率大于１×１０５ｐｆｕ。已知ＡＦＰ基因常常多至４０个拷贝,故已够用。采用通用的原位分子杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析进行瓦氏雅罗鱼ＡＦＰ基因同源序列的分离及其亚克隆分析。以北美黄盖鲽ＡＦＰ基因片段为探针,从瓦氏雅罗鱼ＤＮＡ文库中筛选了三个阳性克隆。图一所示为其中一个的双份膜及其复筛结果。图二为这个阳性克隆ＤＮＡ经过三种限制酶切后,同时与北美黄盖鲽ＡＦＰ基因片段和该基因０．４ＫｂｃＤＮ     

差示扫描量热法直接测定抗冻蛋白质溶液的热滞效应

文献上一直用显微镜观察法等测定抗冻蛋白的热滞效应,其冰晶量是靠观察晶核体积估算得得的,人为性很大,用并示扫描量热法直接测定沙冬青抗冻蛋白质溶液的热滞效应,通过熔融焓和冻结焓值准确地测定了冰晶含有量和热滞温度。同文献比较,沙冬青ＡＦＰ具有极高的抗冻活性,而且开创了一个新的有效的测量抗冻蛋白抗冻活性的途径。     

高原肺水肿患者血浆ET-1、TXB2及6-Keto-PGF1a水平的变化

内皮素 (ＥＴ 1 )、血栓素Ａ2 (ＴｘＡ2 )、前列环素 (ＰＧＩ2 )与心、肺疾病发病的关系受到了广泛重视 ,但在高原肺水肿 (ＨＡＰＥ)发病中的作用国内报道尚少。为此本研究测定了 8例ＨＡＰＥ患者的血浆ＥＴ 1含量以及ＴｘＡ2 、ＰＧＩ2 代谢产物血栓素Ｂ2 (ＴｘＢ2 )6 酮 前列腺素Ｆ1ａ(6 ｋｅｔｏ ＰＧＦ1ａ)含量变化 ,探讨其在ＨＡＰＥ发病中的变化及意义。1　材料与方法(1 )受试对象　 8例ＨＡＰＥ患者均来自海拔 430 0ｍ以上边防哨卡和新藏公路沿线民工 ,汉族男性 ,年龄 2 0～ 45岁 ,平均30 6岁 ,平原出生 ,进驻高原 3～ 5ｄ发病…     

GFP及其在植物学研究中的应用

绿色荧光蛋白 (ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＰ)是来源于多管水母属 (Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ)体内的一种天然发光蛋白 ,在植物体内不需任何底物和外源辅助因子的参与就能显现 ,本文就ＧＦＰ的基因在植物基因工程和分子生物学研究中的应用作一概述。1 .ＧＦＰ及其特性ＧＦＰ由ｇｆｐ基因编码 ,具有 2 38个氨基酸残基的多肽单体 ,分子量约为 2 7ｋＤ。ＧＦＰ有两个吸收峰 ,最大吸收峰在 395ｎｍ处 ,在475ｎｍ处还有一个吸收峰 ,前者由紫外光激发 ,后者由蓝光激发。发射光谱也具有两个峰值 ,一个为 5 0 9…     

转录因子YY1的作用机制

转录因子Ｙｉｎ Ｙａｎｇ 1 (ＹＹ1 ,又称ＮＦ Ｅ1、δ、ＵＣＲＢＰ、ＣＦ1 )是锌指类转录因子ＧＬ1 Ｋｒ櫣ｐｐｌ家族中的一员 ,广泛地存在于人、鼠、非洲爪蟾中[1、2 ] 。ＹＹ1蛋白含有 41 4个氨基酸残基 ,分子量为 6 5ｋＤ。在靠近Ｎ 末端处有一个酸性区域 ,紧接着是连续 1 2个组氨酸的序列和一段富含Ｇｌｙ和Ａｌａ的区域 ,在Ｃ 末端含有与ＲＥＸ 1蛋白相似序列的Ｃ2 Ｈ2 锌指结构。ＹＹ1因子最初是作为腺伴随病毒(ＡＡＶ)的Ｐ5 启动子和免疫球蛋白 (Ｉｇ)ｋ3′增强子的阻抑因子分离到的 ,后来又相继证实ｃ ｆｏｓ、ｃ ｍｙｃ、ｓｕｒ…