高分子量和低分子量尿激酶的分离纯化及动力学性质研究

人尿激酶粗品经苯甲脒亲和柱纯化和Protein-PahSP柱分离后,得到两种分子量的尿激酶（UK）,即高分子量尿激酶（HUK）和低分子量尿激酶（LUK）．采用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,纤维蛋白平板法测定活力,测得HUK比活为2.9×105IU／mg蛋白,LUK为3.5×105IU／mg蛋白,活力回收为70％以上．经SDS-PAGE鉴定,HUK和LUK均是单一条带,分子量分别为54kD和33kD．HUK和LUK水解显色底物S2444的动力学常数,分别测得HUK的Km为64μmol/L,Kcat为15s-1,LUK的Km为49μmol／L,kcat为13s-1,LUK的催化效率（Kcat／Km）稍高于HUK．     

高分子量和低分子量尿激酶的分离纯化及动力学性质研究

人尿激酶粗品经苯甲脒亲和柱纯化和Ｐｒｏｔｅｉｎ－ＰａｋＳＰ柱分离后,得到两种分子量的尿激酶（ＵＫ）,即高分子量尿激酶（ＨＵＫ）和低分子量尿激酶（ＬＵＫ）,采用民斯亮蓝法测定蛋白质浓度,纤维蛋白板法测定活力,测得ＨＵＫ比活为２．９×１０＾５ＩＵ／ｍｇ蛋白,ＬＵＫ为３．５１０＾５ＩＵ／ｍｇ蛋白,活力回收为７０％以上,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定,ＨＵＫ和ＬＵＫ均呈单一条带,分子量分别为５４ｋＤ和３３ｋＤ,Ｈ     

猪乳中一高分子量蛋白质的分离纯化和鉴定

对猪乳中一高分子量蛋白(HMWP)进行了分离纯化,并对其某些生化性质进行了鉴定。猪乳通过去脂得到脱脂乳,再去除酪蛋白得到乳清。对乳清进行硫酸铵分级盐析,猪乳中HMWP在40％饱和度硫酸铵盐析下有最大沉淀。收集40％饱和度硫酸铵盐析沉淀,经过溶解、透析得到HMWP的粗品。通过Mono Q离子交换柱,对其粗品进行两次层析提纯,得到了HMWP纯品,其纯度和得率分别为97．85％和12．31％。多种植物凝集素的Western blotting鉴定表明,HMWP是一个糖基种类较少的糖蛋白,含有Man和GlcNAc。SDS-PAGE和凝胶过滤分别测得HMWP的分子量为114．8kD和115．0kD。通过等电点测定,HMWP的pI为5．10。HMWP的氨基酸组分分析得知,其富含Asp、Glu、Gly和Cys,疏水性氨基酸较低,仅占15．59％摩尔分数。这些结果说明HMWP是一个易溶于水的、酸性的分泌性单体球蛋白。N端氨基酸序列测定结果为Ala-Leu-Val—Gln-Ser-Gty-Leu-Ash-Leu-Val,通过从网络Genbank检索没有发现其同源蛋白的序列,说明其可能是一个新蛋白。     

明党参多糖的分离、纯化及其理化性质

伞形科植物明党参根的热水提取液经乙醇沉淀、去蛋白、逆向流水透析,DEAE-纤维素柱层析和 Sephadex G-100柱层析得纯品明党参多糖(CSP)。凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳证明为单一均匀成分。CSP 的比旋度为〔α〕_D~(20)=+170.9(C=0.4,H_2o),不含氮,分子量52000,具有845cm~(-1)红外吸收峰。经纸层析和气相色谱分析,CSP 含鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其摩尔比为0.09:0.25:0.17:1.0:1.56:11.94。     

萝卜色素的分离、纯化及其性质研究

“心里美”萝卜酒精提取物,经薄层层析、高压液相层析纯化后可得到天然色素为粉红色针状结晶。该色素性质稳定、耐温、耐光,颜色随pH值的不同而变化。经红外光谱分析和质谱鉴定,初步推导其结构可能为报春花色素。     

半枝莲多糖的分离、纯化及其理化性质

唇形科植物半枝莲全草的热水提取液经乙醇沉淀、去蛋白、逆向流水透析、DEAE-纤维素柱层析和Sephadex G-100柱层析得纯品半枝莲多糖(S-BP)。凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳证明为单一均匀成分。SBP的比旋度为[α]_D~(20)=+26.2°,不含氮,分子量13000,具有890cm~(-1)红外吸收峰。经纸层析和气相色谱分析,SBP含鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其克分子比为1.14:1.50:0.20:0.75:1.0:2.18。     

番茄凝集素的分离纯化及某些性质的研究

番茄成熟果实经抽提上鸡卵类粘蛋白(OM)-Sepharose 4B亲和层析柱分离纯化制得番茄凝集素。制品在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈一条带,表观分子量为205,000。Sephadex G200凝胶过滤行为呈单一吸收峰,分子量为180,000。等电聚焦测得等电点为7.6和9.4。它能使人和多种动物红细胞,以及某些培养细胞凝集,但效价不同。N—乙酰葡萄糖胺寡聚糖是其专一性结合糖。     

黄姑鱼肌肉胆碱酯酶的纯化及其某些性质

用亲和层析方法纯化了黄姑鱼(Nibea albiflora)肌肉胆碱酯酶。结合在膜上的胆碱酯酶用两种非离子型表面活性剂的混合液抽提、硫酸铵分级沉淀、再经一次亲和层析,共提纯11,800倍,最高比活力达2180活力单位/毫克蛋白,总活力回收约20%。纯化后的酶用聚丙烯酰胺凝胶电泳,除部分酶蛋白留在原点外,在凝胶内为单一蛋白染色区带,具有酶活力。SephadexG-200凝胶过滤得两个酶活力峰。亲和吸附剂在八个月内反复使用近20次,性能不变。对酶的一般性质作了初步的研究。根据酶的底物专一性、受真性酶专一性抑制剂抑制作用的敏感性及过量底物抑制作用的存在,可以认为黄姑鱼肌肉胆碱酯酶基本上具有真性酶的特征。     

黄姑鱼肌肉胆碱酯酶的纯化及其某些性质

用亲和层析方法纯化了黄姑鱼(Nibea albifiora)肌肉胆碱酯酶。结合在膜上的胆碱酯酶用两种非离子型表面活性剂的混合液抽提、硫酸铵分级沉淀、再经一次亲和层析,共提纯11,800倍,最高比活力达2180活力单位/毫克蛋白,总活力回收约20%。纯化后的酶用聚丙烯酰胺凝胶电泳,除部分酶蛋白留在原点外,在凝胶内为单一蛋白染色区带,具有酶活力。SephadexG-200凝胶过滤得两个酶活力峰。亲和吸附剂在八个月内反复使用近20次,性能不变。对酶的一般性质作了初步的研究。根据酶的底物专一性、受真性酶专一性抑制剂抑制作用的敏感性及过量底物抑制作用的存在,可以认为黄姑鱼肌肉胆碱酯酶基本上具有真性酶的特征。     

尿激酶前体的纯化及其性质的研究

尿激酶前体是与尿激酶具有共同抗原性的一种新的纤溶酶原激活物。我们从人胎肾细胞条件培养液中提纯该物质。首先用抗UKIgG-Sepharose亲和层析得到尿激酶抗原相关蛋白,然后利用苯甲脒-Sepharose柱去除尿激酶获纯化的尿激酶前体。纯化倍数达930倍,得率为18％,所得尿激酶前体为单肽链结构蛋白质,分子量55kD,比活(11389IU/mg)低于尿激酶,二异丙基氟磷酸酯(DFP)不能抑制其活性。体外¹²⁵I-血凝块溶解试验表明尿激酶前体可特异地诱导血凝块溶解,对血浆纤溶系统无明显激活作用,血凝块溶解的时间曲线呈特征性“S”型。所得尿激酶前体是一种新的有别于尿激酶的纤溶酶原激活物。     

黑曲霉糖化酶的分离纯化及其性质

采用硫酸铵分级DEAE-纤维素离子交换层析、Sephadez G—150凝胶过滤等方法,从黑曲霉AS 3.4309变异株B-11的发酵液中分离出三种电泳均一的糖化酶(GI、Gill、GII)。其收率分别为0.8％、50％和18．6％。GI、Gill和GII的分子量分别为27000、67000和53000;等电点分别为3.38、3.52和3．59;含糖量分别为8．7％．13．6％和18．3％;最适pH分别为4.4、4．6和4.6;对可溶性淀粉的Km值分别为2．0、0．77和1．18g／L;二级结构中a-螺旋含量分别为18．4％、23．9％和28．9％;最适温度均为70℃。生淀粉可吸附Gill,吸附率达80％。此外还测定了三种同工酶的氨基酸组成及含量。GI、GII和GIII均由一条多肽链组成。     

白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白的分离纯化及其结构和性质的比较

1.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白在分离纯化上的差异。2.用SDS-PAGE测定分子量,白鲢鱼血清转铁蛋白有两个组份,分子量分别为77kD和70kD;黄鳝血清转铁蛋白为单一组份,分子量为68.1 kD。3.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白都含糖,但都不与ConA-Sepharose柱结合。4.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白氨基酸组成的测定和比较。5.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白用胰蛋白酶在相同条件下进行酶解,白鲢鱼能得到分子量在37kD左右的二个片段,而黄鳝则几乎不能被胰蛋白酶酶解。6.白鲢鱼血清转铁蛋白在404.5nm处有一特异吸收峰,而黄鳝则在407.5nm处。     

番茄叶绿体DNA的分离纯化及某些性质的研究

分离纯化了番茄的叶绿体DNA(ct DNA)。热变性分析测得Tm=82.1℃,由此计算得(G+C)％=31.2％。热变性微分曲线表明,在番茄ct NDA分子上存在着碱基组成比例分布上的异质性。分析超离心测得沉降系数S_(20w)=62.4。据此计算出分子量为80×10~6d。用电子显微镜观索了制备的ctDNA.     

几种植物DNA的纯化及其某些性质

介绍一种简易可行,迅速可靠的提纯植物DNA的方法。所得到的样品是比较纯净的、双链的、高分子量的DNA分子,已符合分子遗传学上的转化实验的要求。     

几种植物DNA的纯化及其某些性质

介绍一种简易可行,迅速可靠的提纯植物DNA的方法。所得到的样品是比较纯净的、双链的、高分子量的DNA分子,已符合分子遗传学上的转化实验的要求。