烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶研究——Ⅱ.对纤维蛋白原及凝血酶的作用

烙铁头(T.mucrosquamatus)蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg能水解三肽底物Bz-Phe-Val-Arg-PNA,但对凝血酶的良好底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA却活性甚低。TMVFS显著延长血浆凝血酶时间。血浆复钙时间及纤维蛋白原溶液凝血酶时间。同时,TMVFg体外也能延长全血凝固时间,表明具有抗凝作用。纤维蛋白原-纤维蛋白转换实验表明:TMVFg水解纤维蛋白原产生的纤维蛋白原断片(FDP)除具有抗凝血酶,抑制纤维蛋白聚合活性外,还能促进纤维蛋白的聚合。 进一步用FPLC分离TMVFg水解人纤维蛋白原混合液,得两个FDP断片功能峰,FDP组分Ⅰ和FDP组分Ⅱ。其中FDP组分Ⅰ能抑制纤维蛋白凝块形成;FDP组分Ⅱ能促进纤维蛋白凝块形成,抑制TMVA(烙铁头蛇毒血小板活化素,它可不通过ADP、花生四烯酸途径而诱导血小板聚集),但对ADP诱导的家兔血小板聚集无影响。TMVFg对凝血酶水解三肽底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA及凝固纤维蛋白原的活性也有一定抑制作用。 实验证明,TMVFg抗凝的主要作用机理是其水解纤维蛋白原产生的断片对纤维蛋白原凝固的抑制作用、FDP断片抗凝血酶作用及TMVFg本身对凝血酶活性的抑制所引起的,但在二者之间,前者是主要的。 从研究结果发现:TMVFg水解纤维蛋白原所产生的断片有一类能加速凝血酶凝固纤维蛋白原的过程,这就发现了FDP断片的     

纤溶系统及其异常与血栓性疾病的关系及溶栓药物研究发展方向

纤维蛋白溶解系统与凝血系统活性的动态平衡是维持血液在血管中正常流动的基础。纤溶系统的异常,尤其是ＰＡＩ－１水平的升高所致的纤溶活性的下降,是血栓性疾病的重要诱因之一。本系统地介绍了纤溶系统的生理作用及其调节,以及它的异常在血栓性疾病发病中的作用。同时介绍了溶栓药物的现状及最新研究方向。     

蛇毒纤维蛋白（原）溶酶

在蝰亚科、蝮亚科和眼镜科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白 (原 )的酶 ,称为纤维蛋白 (原 )溶酶 (简称纤溶酶 ) [1] 。 1 976年 ,Ｏｕｙａｎｇ等第一次从尖吻蝮蛇毒中分离纯化得到纤溶酶[2 ] 。这些纤溶酶可用于溶解在心肌梗塞、中风、血栓等期间形成的血凝块[1] 。作为一种潜在的强有力的抗栓药物 ,纤溶酶已成为蛇毒蛋白酶领域的一个研究热点。1 .蛇毒纤溶酶的分类蛇毒纤溶酶的分类方法主要有 3种 :第一种根据纤溶酶对纤维蛋白原 (ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ ,Ｆｇ)的作用方式 ;第二种是根据纤溶酶的结构特点[3] ;第三种是根据纤溶酶的分…     

烙铁头蛇毒素纤维蛋白原溶酶研究:Ⅱ.对纤维蛋白原及凝血酶的作用

烙铁头（T.mucrosquamatus）蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg能水解三肽底物Bz-Phe-Val-Arg-PNA，但对凝血酶的良好底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA却活性甚低。TMVFg显著延长血浆凝血酶时间、血浆复钙时间及纤维蛋白原溶液凝血酶时间。同时，TMVFg体外也能延长全血凝固时间，表明具有抗凝作用。纤维蛋白原-纤维蛋白转换实验表明：TMVFg水解纤维蛋白原产生的纤维蛋白原断片（FDP）除具有抗凝血酶，抑制纤维蛋白聚合活性外，还能促进纤维蛋白的聚合。进一步用FPLC分离TMVFg水解人纤维蛋白原混合液，得两个FDP断片功能峰，FDP组分Ⅰ和FDP组分Ⅱ。其中FDP组分Ⅰ能抑制纤维蛋白凝块形成；FDP组分Ⅱ能促进纤维蛋白凝块形成，抑制TMVA（烙铁头蛇毒血小板活化素，它可不通过ADP、花生四烯酸途径而诱导血小板聚集），但对ADP诱导的家兔血小板聚集无影响。TMVFg对凝血酶水解三肽底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA及凝固纤维蛋白原的活性也有一定抑制作用。实验证明，TMVFg抗凝的主要作用机理是其水解纤维蛋白原产生的断片对纤维蛋白原凝固的抑制作用、FDP断片抗凝血酶作用及TMVFg本身对凝血酶活性的抑制所引起的，但在二者之间，前者是主要的。从研究结果发现：TMVFg水解纤维蛋白原所产生的断片有一类能加速凝血酶凝固纤维蛋白原的过程，这就发现了FDP断片的新功能。它证明了FDP断片作为血液凝固、纤溶正反馈调节因子的功能。这一类FDP断片还能抑制TMVA诱导的血小板聚集，因此，烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg将成为研究血液凝固调节系统及血小板聚集第三条途径的强有力试剂。     

赤爱胜蚯蚓（Eiseniba Foetida Sarigng）纤溶酶的研究──■蚯蚓纤溶酶活性测定方法的研究

本文主要阐述了蚯蚓纤溶酶活性（效价）的测定方法的研究结果。通过对气泡上升法,精氨酸脂酶法（ＴＡＭＥ法）和纤维蛋白平板法测定蚯蚓纤溶酶活性的比较,最后认为纤维蛋白平板法能够客观地表示出纤溶酶溶解血栓的能力,虽然方法较为复杂,难度较大,但准确性强,结果可靠。ＴＡＭＥ法由于受样品中混有杂蛋白酶其稳定性受到一定的影响,但此法简便易行可作为中间产品的快速检测。文中详细地介绍了纤维蛋白平板法。     

蝮蛇抗栓酶治疗银屑病产生耐受性原因探讨

目的通过治疗银屑病５０例临床观察,探讨部分病例未能治愈与机体对蝮蛇抗栓酶产生耐受性原因分析。方法用蝮蛇杭栓酶０．７５ＩＵ加入生理盐水中静滴,治疗前、后及各疗程间监测血小板计数与血浆纤维蛋白原变化。结果药效消失后,血小板计数与血浆纤维蛋白原增高超过治疗前水平。结论该类药物治疗其他血栓性疾病可将血小板计数与血浆纤维蛋白原增高作为药效消失及耐受性产生的一项指标。     

组织型纤溶酶原激活剂(TPA)

一、产品概述 TPA是由人的血管内皮细胞产生的527个氨基酸序列组成的糖蛋白,其分子量为3万多至7万。它具有称之为索眼的结构,对构成血栓的纤维蛋白有亲和性。 血栓是血管内产生的血块,血栓一旦产生,身体末端的微细血管堵塞,导致手脚麻痹、脑梗塞、心肌梗塞等病症。     

蛇毒类凝血酶calobin在毕赤酵母中的表达

蛇毒类凝血酶是临床上防治血栓栓塞性疾病的有效药物。参照朝鲜蝮蛇(Agkistrodon caliginosus,Korean Viper)类凝血酶calobin基因序列(GenBank AccessionNo.U32937.1),将人工合成的calobin基因克隆到酵母表达载体pPICZαA,于毕赤酵母中表达,得到了分子量约为32kD的重组calobin蛋白,经甲醇诱导培养,表达产物可获得3.5g/L的高表达量。重组蛋白经过阴离子交换柱Q-Sepharose Fast Flow和分子筛Sephacryl-S-100凝胶过滤层析等纯化步骤进行了初步纯化。纯化后的重组calobin可以在纤维蛋白原平板上形成水解圈,经SDS-PAGE实验显示,重组蛋白能水解纤维蛋白原的Aα链,产生一条约40kD左右的降解带。在实验中未能发现重组calobin对纤维蛋白原的凝固作用。     

骨创伤后深静脉血栓形成的相关危险因素分析

目的:通过比较骨创伤患者与健康人群的临床资料,分析骨创伤后深静脉血栓形成(DVT)的相关危险因素。方法:选择住院骨创伤患者但未发生深静脉血栓患者126例(骨创伤组)、DVT患者30例(DVT组)以及进行体检无创伤、心血管疾病和血栓性疾病的健康者60例(对照组)作为研究对象。D-二聚体(D-D)含量检测采用散射比浊法,纤维蛋白原(FIB)测定采用PT导出法,抗心磷脂抗体(ACA,IgA,IgM,IgG)检测采用酶联免疫法,C反应蛋白(CRP)含量检测采用速率散射比浊法。结果:骨创伤组和DVT组患者纤维蛋白原、D-二聚体均明显高于对照组,且差异均具有统计学意义(P0.05);DVT组与骨创伤组相比,此三者平均含量均升高,其中C反应蛋白含量具有统计学差异(P0.05);骨创伤组ACA阳性率与对照组ACA阳性率之间无统计学差异(P0.05);而DVT组ACA阳性率与对照组之间存在着统计学差异(P0.05);DVT组患者平均年龄明显高于骨创伤组,两者差异具有统计学意义(P0.05);DVT组患者多部位骨折发生率明显高于骨创伤组,两者差异具有统计学意义(P0.05);DVT组患者溶栓治疗前后纤维蛋白原、D-二聚体均明显降低,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论:纤维蛋白原、D-二聚体、C反应蛋白升高和抗心磷脂抗体阳性是深静脉血栓患者的危险因素。年龄越大以及骨折情况越严重骨创伤患者发生深静脉血栓危险性越大,溶栓治疗对深静脉血栓患者的治疗效果显著。     

纤维蛋白的两种特殊染色效果比较

目的 比较分析显示纤维蛋白的两种特殊染色方法 ,旨在选择一种更适合于显示纤维蛋白的特殊染色方法。方法对富含纤维蛋白的石蜡包埋组织进行改良Masson染色、PTAH染色,光学显微镜下观察染色效果。结果 HE染色见纤维蛋白多数呈红染的细丝、相互连接成网状,也可相互融合。改良Masson染色显示纤维蛋白呈红色,PTAH染色显示纤维蛋白呈深蓝色。结论 改良Masson染色和PTAH染色均可用于显示纤维蛋白,但改良Masson染色时间短,结构清晰、对比明显,是观察纤维蛋白染色效果最佳的染色方法。     

人D-二聚体的制备及其冻干性质的分析

以人源纤维蛋白原为原材料制备D-二聚体,将其制成冻干品并分析其冻干性质。使用凝血酶、Factor XIIIa酶解纤维蛋白原,获得交联纤维蛋白。经纤溶酶降解交联纤维蛋白,生成纤维蛋白降解产物。超滤除去纤维蛋白降解产物中的小分子物质,可获得较高纯度的D-二聚体。通过筛选和优化冻干方案,将D-二聚体制备成冻干品。经检测可知,D-二聚体冻干品可在37℃稳定保存12 d;复溶后在25℃稳定保存8 d;复溶后在4℃稳定保存30 d;复溶时,常用复溶溶剂对其复溶后的活性检测无明显影响。     

蛇毒纤维蛋白原水解酶

蛇毒纤维蛋白原水解酶毛建平孙志贤（军事医学科学院放射医学研究所北京１００８５０）关键词蛇毒纤维蛋白质凝血酶样酶纤溶酶许多蛇毒中含有降解纤维蛋白原或纤维蛋白的酶类,它们作用于高等动物血液循环系统,防止中毒动物血液凝固以利于其它毒素迅速扩散和生效。人类于...     

慢性重型肝炎患者血浆D-二聚体和纤维蛋白原水平的变化

目的:分析慢性重型肝炎患者血浆D-二聚体和纤维蛋白原水平的变化及其临床意义.方法:应用乳胶比浊法及凝固法分别测定血浆D-二聚体和纤维蛋白原的水平,其中慢性重型肝炎患者40例,慢性肝炎患者28例作为对照组.结果:慢性重型肝炎患者血浆D-二聚体及纤维蛋白原检测异常率分别为62.5％(25/40)、92.5％(37/40),明显高于慢性肝炎组0％(0/28)、28.6％(8/28).慢性重型肝炎患者血浆D-二聚体及纤维蛋白原检测水平分别为3.45± 1.90 μg/mL、1.36± 0.49 g/L,慢性肝炎组患者血浆D-二聚体及纤维蛋白原检测水平分别0.91± 0.47 μg/mL、2.53± 1.02 g/L,组间比较差异有统计学意义.慢性重型肝炎组患者27例死亡,13例好转出院,死亡组患者血浆D-二聚体异常率74.1％ (20/27),检测水平为3.92± 1.76μg/mL,纤维蛋白原异常率100％(27/27),检测水平为1.17± 0.4 g/L;好转组患者血浆D-二聚体异常率38.5％(5/13),检测水平为2.48± 1.88 μg/mL,纤维蛋白原异常率为76.9％(10/13),检测水平为1.74± 0.44 g/L,差别有统计学意义.结论:慢性重型肝炎患者血浆D-二聚体水平明显增高,纤维蛋白原明显下降,并与患者的病情严重程度及预后相关,检测血浆D-二聚体和纤维蛋白原水平可以作为慢性重型肝炎患者病情轻重及预后判断的临床指标.     

蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase在大肠杆菌中的表达、纯化及活性检测

目的:应用大肠杆菌表达系统表达纤溶性蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase。方法:运用PCR技术扩增人工合成的目的基因,引入Nde Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切位点;目的基因经Nde Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切后,克隆到pET22b载体上,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行胞内表达,对获得的包涵体进行体外透析复性;应用纤维蛋白原水解法、纤维蛋白平板法和纤维蛋白层叠法检测复性后蛋白的降纤活性。结果:目的蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中获得高表达,复性后的蛋白具有降解纤维蛋白(原)的活性。结论:Alfimeprase包涵体可以通过复性获得活性产物。     

冻干人纤维蛋白原病毒灭活方法研究概况

纤维蛋白原对治疗获得性或先天性纤维蛋白原缺乏或低下造成的凝血障碍有极其重要的作用。传统工艺生产的纤维蛋白原是传播肝炎病毒的高危产品,１９７８年美国ＦＤＡ取消其临床使用许可使该种产品在世界范围内的使用日趋减少。进入八十年代,血液制品病毒灭活技术的发展使易变性的纤维蛋白原的灭活成为可能。本文对该制剂的病毒灭活技术作一概述和讨论     

四种动物血浆纤维蛋白原含量的比较

血浆纤维蛋白原是血浆蛋白之一,它是由三对不同的多肽链以二硫键连接而成为纤维状蛋白质。分子量为340.0000,在人体血浆中浓度为200—400mg/100ml血浆。用盐析法可将血浆蛋白分为白蛋白、球蛋白和纤维蛋白三部分。 研究止血、血管内栓塞和溶解栓塞的药物,常以纤维蛋白原含量的变化为指标。因此了解常用实验动物的血浆纤维蛋白原的正常含量,对生理和药理学工作者是有一定参考价值的。据我所查资料,蟾蜍和家鸡的血浆纤维蛋白     

三井东压公司开始血栓溶剂TPA的第工期临床试验

日本三井东压与美国霍普市的贝克曼研究所共同开发血栓溶剂TPA(组织血纤维蛋白溶酶原激活剂),已开始它的第Ⅰ期临床试验。日本对TPA的临床试验始于1985年,先后已有旭化成等6家公司的研究小组进行试验。 三井东压公司的TPA,其特征是利用从正常细胞中提取的cDNA。     

脑血管疾病患者血尿酸和纤维蛋白原的测定与分析

目的:为了解脑血管疾病患者血尿酸、血浆纤维蛋白原水平及相互关系。方法:对81例脑梗死患者、77例脑出血患者和55例时照者采血测定血尿酸、血浆纤维蛋白原,并分析二者的相关性。结果:脑梗死疾病组和脑出血疾病组UA和Fib水平均高于时照组(P＜0．05);脑血管疾病组组间无差异(P□0．05);血尿酸和血浆纤维蛋白原二者间无相关性。结论:血尿酸、血浆纤维蛋白原作为脑血管疾病的危险因素可能是独立存在的。     

纤维蛋白单体D区与E区聚合后E区结构的变化

应用纤维蛋白单克隆抗体IF 5 3,观察当纤维蛋白的“A”位点与另一纤维蛋白D区域的“a”位点结合后纤维蛋白E区的变化 .纤维蛋白原Aα链经赖氨酰肽链内切酶消化后 ,应用反相HPLC分离纯化 ;通过ELISA法检测单克隆抗体IF 5 3与纤维蛋白原及其衍生物的反应情况 ;应用放射免疫法检测RGD合成肽抑制纤维蛋白单体与IF 5 3反应的情况 .发现IF 5 3能与纤维蛋白原Aα链的一个片段反应 ,该片段经氨基酸序列分析显示为纤维蛋白原Aα链氨基末端 (1～ 2 9) .该抗体能与酸溶解的纤维蛋白单体和可溶性纤维蛋白及XDP反应 ,但不能与酸化纤维蛋白原或GPRP反应 ,因此IF 5 3的抗原决定簇在Aα 2 0～ 2 9,与凝血酶作用于纤维蛋白肽A ,暴露出的聚合位点“A”(Aα17～19)紧邻 .当GPRP存在于纤维蛋白原溶液时 ,经凝血酶作用产生这种纤维蛋白单体不能与IF 5 3反应 .Aα(93～ 99) (ILRGDFS)合成肽部分抑制纤维蛋白单体与IF 5 3的反应 .实验结果提示 ,当纤维蛋白单体相互聚合 ,或纤维蛋白单体与纤维蛋白原聚合时 ,纤维蛋白单体结构会发生变化 ,其中Aα2 0～ 2 9片段成为新抗原暴露于E区表面 ,并且Aα2 0～ 2 9与纤维蛋白原细胞粘附区域RGD1片段邻近     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

尖吻蝮蛇毒纤维蛋白溶解酶是一种具有纤维蛋白溶解活性的蛋白水解酶 ,常具有出血活性 ,因此 ,寻找具有纤维蛋白溶解活性 ,又无出血活性的纤维蛋白溶解酶十分必要。作者对尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶(NHFLE)进行了分离纯化及其理化性质的研究。应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化收集具有酶活性的蛋白峰 ,用 1 2 % SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳作纯度鉴定和测定纤维蛋白溶解酶的相对分子量 ,采用纤维蛋白平板法测定活性。结果从尖吻蝮蛇毒 NHFLE的分离纯化得的单一峰纤维蛋白溶解酶为单一条带 ,其相对分子量为 2 50 0 0 ,没有…