黄芪甲苷Ⅳ通过影响β-actin对内皮型一氧化氮合酶的调节作用

目的：研究黄芪甲苷Ⅳ（AS-Ⅳ）对体外培养脐静脉内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的调节作用及可能的机制。方法：培养人脐静脉内皮细胞系EA-Hy926,用AS-Ⅳ进行干预,同时给予或不给予骨架蛋白β—actin聚合稳定剂phalloidin,用免疫共沉淀方法检测eNOS与单体8-actin结合状态的变化,用L-3H．精氨酸转化为L-SH-瓜氨酸的同位素法测定eNOS活性,I^125环-磷酸鸟苷（cGMP）放射免疫法检测细胞内cGMP水平,Westernblotting方法检测细胞中eNOS和蛋白激酶B（Akt）磷酸化水平,总蛋白水平。结果：（1）AS-IV作用10min后,细胞内单体β—actin与eNOS的结合明显增加（P〈0．05或P〈0．01）,预先给予phalloidin显著抑制了AS．IV引起的两者结合的增加（P〈0．01）。②AS—IV明显增加了eNOS活性（P〈0．05）、cGMP含量（P〈0．01）、eNOSSer-1177磷酸化水平（P〈0．01）、AktSer-473磷酸化水平（P〈0．001）,预先给予phalloidin明显降低了AS—IV引起的eNOS活性（P〈0．05）、cGMP含量（P〈0．01）和磷酸化水平的增加（P〈0．01）,但对Akt的磷酸化没有影响。结论：单体β—actin与eNOS的结合在AS-IV激活eNOS的过程中起着不可或缺作用,其主要是通过促进Akt对eNOSSer—1177的磷酸化来实现的。     

一氧化氮促进体外培养大鼠脑室下区神经干细胞的分化

目的：探讨一氧化氮（NO）对新生大鼠体外培养的神经干细胞（NSCs）分化的作用。方法：采用常规方法分离新生大鼠脑室下区（SVZ）组织,进行NSCs体外培养。用DETA／NO作为NO供体,用L-NAME作为一氧化氮合酶（NOS）抑制剂。免疫荧光法检测NSCs标志物-巢蛋白（nestin）、神经元标志物-8Ⅲ型微管蛋白（Tuj-1）和星型胶质细胞标志物-胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,还检测了神经元型NOS的表达。用Greiss还原法检测培养液中总NO的浓度。结果：培养的神经球均为nestin阳性、BIdu阳性和nNOS阳性。NSCs和40μmol／L、50μmol／L、60μmol／LDEFA／N0共培养5d,实验组培养液中N0浓度较对照组显著增高（P〈0．01）,相应实验组分化的神经元数和星型胶质细胞数较对照组明显增加（P〈0．01和P〈0．05）。NSCs和100μmol／L、150μmol／L、200μmol／LL-NAME共培养5d,实验组培养液中NO浓度较对照组降低（P〈0．05）,相应实验组分化的神经元数和星型胶质细胞数也较对照组减少（P〈0．05）。结论：NO能直接促进大鼠SVZ体外培养的NSCs分化。     

解偶联蛋白2通过抗氧化应激反应预防酒精性心肌损害

目的：探讨解偶联蛋白2（uncouplingprotein2,UCP2）在酒精性心肌损害中的作用及其分子机制。方法：采用乙醇在体内的代谢产物乙醛作为刺激因素,将培养心肌细胞分为对照组,乙醛组和乙醛＋ucP2抑制剂京尼平组（京尼平组）,干预24小时后检测心肌细胞中超氧阴离子（superoxideanion,SOA）及一氧化氮（nitricoxide,NO）的水平,并检测UCP2的蛋白表达水平,另一组实验干预72小时后采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。结果：与对照组比较,乙醛组心肌细胞中SOA水平显著升高（P〈0．01）,而NO水平显著降低（P〈0．01）,且UCP2的蛋白水平也较对照组显著增加（P〈0．01）。而与乙醛组比较,京尼平组心肌细胞中SOA的水平进一步增加（P〈0．01）,NO的水平也进一步降低（P〈0．01）。与对照组比较,乙醛可诱导培养心肌细胞凋亡（P〈0．01）,而京尼平组凋亡率较乙醛组则进一步升高（P〈0．01）。结论：UCP2在酒精性心肌损害中通过调控SOA／NO的水平发挥代偿性保护作用。     

三种淡水藻类对萼花臂尾轮虫培养效果的比较

在28℃下,采用群体累积培养法,探讨了不同浓度的蛋白核小球藻（Chlorella pyrenodeosa）、水华鱼腥藻（Anabaena flas-aquae）和沙角衣藻（Chlamyclomoras sajao）,以及在等生物量条件下,以上3种藻类两两配比饵料（3：1、1：1和1：3）对萼花臂尾轮虫（Brachionus calyciflorus）的培养效果。结果表明,不同浓度的蛋白核小球藻、水华鱼腥藻和沙角衣藻对萼花臂尾轮虫增殖效果的影响分别表现为差异极显著（P〈0．01）、显著（P〈0．05）和不显著（P〉0．05）;蛋白核小球藻与水华鱼腥藻组成的混合饵料对萼花臂尾轮虫的增殖效果均优于其中的单一种类（P〈0．05）;沙角衣藻无论是单独投喂,还是与其它藻类混合投喂,轮虫的培养效果均不理想。因此,该种类不宜用作轮虫饵料开发。该研究还表明,蛋白核小球藻是培养萼花臂尾轮虫的最适单一种类,它与水华鱼腥藻组成的混合饵料培养萼花臂尾轮虫效果更好。     

提高甲型副伤寒患者血培养阳性率的研究

目的确定甲型副伤寒（简称：甲副）患者血内细菌数及其变化规律,分析血细菌数、采血量、培养分离方法和血培养阳性率间的关系。方法采用定量全血培养技术检测300例临床诊断甲副病例血内细菌数;用标准血培养技术对3000例疑似甲副病例进行需氧和（或）厌氧血培养;用血清甲副病原菌（简称：甲副菌）鞭毛抗原检测的细菌半定量技术分析不同病程215例甲副患者血清甲副菌鞭毛抗原的检测情况。结果131例甲副患者血细菌数的中位数是0．5CFU／ml,全距是〈0．3～6CFU／ml;血细菌数范围为〈0．3、0．3～0．49、0．5～0．9、0．9～4．9和〉5的病例构成分别是22％、28％、33％、12％和5％;长病程甲副患者血清甲副菌鞭毛抗原阳性率比短病程者高（χ^2〉4．06。P〈0．050）;疑似甲副病例5ml和10ml静脉血甲副菌血培养阳性率分别为49．8％和72．8％（χ^2=70．9,P〈0．005）;病例标准需氧瓶和厌氧瓶配对培养总阳性率为51．3％,需、厌氧瓶的血培养结果存在相关关系（χ^2=14．5。P〈0．005）,厌氧培养瓶比需氧培养瓶更适合培养血内甲副菌（χ^2=5．0,P〈0．025）。结论甲副病例血内细菌数、采血量、病程、血培养方式是决定血培养阳性率的重要因素,增加采血量和采血次数并用两个以上培养瓶作配对血培养可把甲副患者血培养阳性率提高到接近99％。     

维甲酸对高氧暴露下原代培养的胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞和成纤维细胞增殖与凋亡的影响

探讨高氧暴露对原代培养的胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）、成纤维细胞（LFs）增殖和凋亡的影响以及维甲酸（RA）的保护作用机制。通过建立高氧暴露原代培养的胎鼠AECⅡ和LFs模型,以RA作为干预方式,采用流式细胞术（膜联蛋白V—PI双标记）检测AECⅡ和LFs凋亡,Western印迹检测AECⅡ增殖细胞核抗原（PCNA）、p53及caspase-3表达和LFs PCNA表达。结果发现：（1）与空气对照比较,高氧暴露12h,膜联蛋白V（＋）PI（-）和膜联蛋白V（＋）PI（＋）标记AECⅡ数均显著升高（14．41±1．15 vs 2．80±0．19,P＜0．01;61．07±3．06 vs 1．49±0．11,P＜0．01）;RA对空气暴露下AECⅡ坏死、凋亡无明显影响,但明显下调高氧暴露下膜联蛋白V（＋）PI（-）和膜联蛋白V（＋）PI（＋）标记AECⅡ数（8．04±0．79 vs 14．41±1．15,P＜0．01;27．57±2．32 vs 61．07±3．06,P＜0．01）。（2）高氧、RA对LFs坏死、凋亡无明显影响。（3）高氧暴露12h,明显降低AECⅡPCNA表达（P＜0．01）,显著提高其p53（P＜0．01）和caspase-3活性片段（P＜0．01）表达;RA显著上调高氧暴露下AECⅡPCNA表达（P＜0．01）,下调其p53和caspase-3活化片段表达（P＜0．01）。（4）高氧、RA对LFs PCNA表达无明显影响。由此提示,高氧暴露,导致AECⅡ大量凋亡、坏死,增殖受到抑制,同时,LFs所受影响较小,两种细胞对高氧暴露的差异性行为可能是导致未成熟肺组织异常重构的重要原因;RA通过降低AECⅡ凋亡、坏死从而对高氧肺损伤具有保护作用。     

氧化应激条件下G6PD对Raji细胞内GSH水平的影响

目的：观察体外培养的Burkit淋巴瘤（Raji）细胞在氧化应激条件下细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）对还原型谷胱甘肽（GSH）水平的影响。方法：体外培养Raji细胞,分别在G6PD活性被抑制及不抑制的情况下,检测细胞在酚嗪甲酸硫酯（PMS）作用后60min及360min时G6PD、谷胱甘肽还原酶（GR）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性及GSH水平。结果：在PMS作用下,Raji细胞内GSH水平在60min时显著下降（P〈0．01）而360min时可上升至对照组水平,G6PD及GPx活性持续显著升高（P〈0．01）而GR活性在360min时有显著升高（P〈0．01）;使用脱氢表雄酮（DHEA）抑制G6PD活性后,Raji细胞再在PMS作用下,细胞内各指标与PMS处理组比较,GSH水平显著降低（P〈0．01）,GPx活性在60min时显著增高（P〈0．05）而GR活性在360min时显著降低（P〈0．01）。结论：细胞在氧化应激条件下G6PD可能是Raji细胞内影响GSH水平的一个关键因子,对维持胞内GSH水平起重要的调节作用。     

高糖环境对Mu ller细胞谷氨酸转运体及谷氨酰胺合成酶表达的影响

目的：研究高糖环境对原代培养新生7天SD乳鼠视网膜Muller细胞谷氨酸转运合成系统的影响及其可能机制。方法：新生7天SD乳鼠视网膜Muller细胞原代培养并模拟高糖环境构建乳鼠视网膜muller细胞体外高糖环境模型。处理分为3组：对照组,高糖组,高糖＋白藜芦醇干预组。培养时间为24h,通过westernblot等检测方法,对照观察各组Muller细胞谷氨酸转运体（GLAST）、谷氨酰胺合成酶（GS）的表达情况。结果：模拟高糖环境可以造成新生SD乳鼠视网膜Muller细胞谷氨酸转运体（GLAST）表达的降低（0．225foldVScontrol,P〈0．05）,并导致其表达的谷氨酰胺合成酶（GS）表达水平的显著降低（0．653foldVScontrol,P〈0．05）;而干预药物白藜芦醇作用后可明显逆转新生SD乳鼠Mu ller细胞谷氨酸转运体（GLAST）（1．133foldvSHGgroup,P〈0．05）、谷氨酰胺合成酶（GS）（1．720foldVSHGgroup,P〈0．05）等蛋白的表达水平。结论：模拟高糖环境可以影响视网膜M0ller细胞谷氨酸转运体（GLAST）、谷氨酰胺合成酶的表达,其结局可能导致视神经细胞因谷氨酸堆积而导致的兴奋性毒性,白藜芦醇能提高Mcjller细胞谷氨酸转运体（GLAST）、谷氨酰胺合成酶表达,从而保护视神经细胞。     

白介素-2及干扰素-γ对人成骨细胞增殖的影响

体外培养人骨肉瘸细胞系MG63,MTT方法检测白介素-2（Interleukin-2,IL-2）和干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）对成骨细胞增殖的影响。结果表明,一定浓度（0．1—100U／μL）的IL-2能够促进成骨细胞增殖（P〈0．05）,而IFN-γ对成骨细胞增殖的影响无统计学意义（P〉0．05）,提示IL-2是成骨细胞的一种促分裂原。     

阴道分泌物标本真菌检验结果分析

目的了解阴道分泌物中各种真菌的检出率以及镜检法与培养法2种检验结果的相关性。方法对每位在妇科门诊就诊的病人采集2支阴道分泌物标本,分别做涂片镜检及真菌培养,培养阳性者进～步鉴定到种,并将2种检查结果进行卡方独立性检验和阳性率相等检验。结果阴道分泌物涂片真菌阳性率为26．29％（306／1164）,真菌培养阳性率为29．04％（338／1164）,2种检验方法有相关关系（χ^2=870．50,P〈0．005）,但2种检验方法阳性检出率差异又存在非常显著性（χ^2=16．00,P〈0．005）;阴道分泌物中检出的真菌绝大多数为念珠菌,其中白色念珠菌居首（87．87％）,其次为光滑念珠菌（7．69％）。结论念珠菌是妇女阴道常见病原菌之一,其中又以白色念珠菌占大多数,涂片镜检和培养2种方法既相关又有所差异,各具优缺点,临床可结合实际需要适当选择。     

离体鼠肝细胞及P—450酶系与拟除虫菊酯类杀虫剂的的相互作用

经研究表明顺式氯氰菊酯．甲氰菊酯、氟氰菊酯、氰戊菊酯在正辛醇－水相中的分配系数分别为６．１３，５．５０，５．５５和４．０２。离体培养的大白鼠原代肝细胞上述杀虫（氟氰菊酯外）的吸收系数（ｑ值）分别为３２２．６，２８１．１，２０１．９。上述杀虫剂在离体培养的原代肝细胞中降解很快，湿育３０分钟后降解速率分别为９０．０％（顺式氯氰菊酯）、８６．２％（甲氰菊酯）、６９．５％（氰戊菊酯）。同时有明显的减少离体     

姜黄素诱导Nrf2核转位对脂多糖引起库普弗细胞分泌炎症细胞因子的影响

目的：研究姜黄素诱导大鼠Kupffer细胞Nrf2核转位对脂多糖（LPS）引起的炎症细胞因子分泌的影响。方法：分别用10μM、20μM和30μM干预Kupffer细胞8h,诱导Nrf2核转位水平;将Kupffer细胞随机分为对照组、LPS组和干预组,对照组正常培养未加姜黄素和LPS,LPS组用10μg／mL的LPS加入Kupffer细胞培养液共同培养2h;干预组用30μM姜黄素干预8h后,余处理同LPS组。Western blot检测Nrf2核转位水平,分光光度法检测细胞MDA、GSH水平,ELISA法检测上清液TNF-α和IL-6,放免法检测IL-1β。结果：①姜黄素诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,核转位水平随浓度增加而增高。②LPS组MDA水平较对照组显著升高（P〈0．01）,干预组MDA水平较LPS组显著降低（P〈0．01）,仍显著高于对照组（P〈0．01）。LPS组GSH水平较对照组显著降低（P〈0．01）,干预组GSH水平较LPS组显著升高（P〈0．01）,仍显著低于对照组（P〈0．01）。③LPS组上清液TNF-α,IL-1β和IL-6显著高于对照组（P〈0．01）,干预组均显著低于模型组（P〈0．01）,但显著高于对照组（P〈0．01）。结论：姜黄素通过诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,降低LPS诱导的氧化应激损伤,抑制Kupffer细胞分泌炎症细胞因子。     

小鼠惊厥时孕烯醇酮及其硫酸盐对GABAA受体的调制作用

在建立稳定的红藻氨酸（KA）诱发小鼠惊厥模型的基础上，用放射配体受体结合分析法，研究孕烯醇酮（Pe）及其拮抗剂孕烯醇酮硫酸盐（Pes）对小鼠下丘脑、大脑皮层、海马和小脑四个脑区-－氨基丁酸A（GABAA）受体的调制作用。结果显示，Pe能增加某些脑区^3H－GABA与GABAA受体的结合量，下丘脑、海马和小脑差异显著（P＜0．05或P＜0．001），而大脑皮层差异不显著（P＞0．05）。Pe对GABAA受体的调制作用能被印防已毒素（Pic）阻断，对KA的致惊效应具有抑制作用。Pes能显著降低各脑区GABAA受体的结合量（P＜0．01或P＜0．001），对陈词滥调厥有促进作用。实验结果提示：孕烯醇酮具有明显的镇静和抗厥效应，并且可能是通过GABAA受体介导的。     

沙葱的组织培养和植株再生

１植物名称沙葱（Ａｌｌｉｕｍｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ），又名蒙古韭。种子来源于中国科学院沙漠研究所宁夏沙坡头沙漠试验站。２材料类别幼苗的叶片。３培养条件（１）愈伤组织诱导培养基：ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＫＴ０．２＋ＣＨ（水解酪蛋白）５００＋蔗糖３％；（２）分化培养基同（１），但２，４－Ｄ为０．５；（３）生根培养基：１／２ＭＳ＋１ＢＡ１．０＋蔗糖３％。上述培养基均加０．７％琼脂粉固化，ｐＨ调至５．８～６．２。培养温度（２５±２）℃。愈伤组织诱导阶段为暗培养，分化阶段每日光照１２…     

微量元素锌和超氧化物歧化酶对产蛋鸡影响的研究

结果表明：与对照相比,加锌Ⅱ组鸡的产蛋率高（P＜0．05）,破壳率低（P＜0．01）;加锌Ⅱ组鸡的产蛋率高（P＜0．01）,破壳率降低（P＜0．01）,蛋重增加（P＜0．05）饲料消耗减少,Ⅱ组与Ⅲ组比较,生产性无显著差异。Ⅱ组和Ⅲ组肝中GOT和GPT、血清中AKP酶活性显著增加（P＜0．01）肝中AKPⅡ组明显上升（P＜0．05）,Ⅲ组显著提高（P＜0．01）,SOD酶活性Ⅱ明显增加（P＜0．05）,Ⅲ组显著上升（P＜0．01）,Ⅱ组与Ⅲ组比较,肝中GOT和AKP存在显著差异（P＜0．01）。其它酶活性各组间无明显差异（P＜0．05）。鸡蛋中的锌含量Ⅱ和 Ⅲ组大幅度上升（P＜0．01）,Ⅲ组磷脂降低（P＜0．05）,Ⅱ组不受影响（P＜0．05）。铁和各种氨基酸含量无明显变化（P＜0．05）。肝脏、肺脏、肌肉和翅羽中的锌含量Ⅱ组和Ⅲ组显著增加（P＜0．01）能脏中的锌含量Ⅱ组明显上升（P＜0．05）,Ⅲ组显著提高（P＜0．01）,心脏、脾脏和卵巢无显著影响（P＜0．05）。     

留兰香的试管增殖

MultiplicationofMenthaS本dcatainvttroCHAIMingLiang（IhDinsoolhoho，IformM‘，310013）1植物名称留兰香（Menthaspicata）。2材料类别试管嫩梢。3培养条件增殖培养基为：（1）MS＋BA2．0mg／L（单位下同）；（2）MS＋KT2．0；（3）MS4＋ZT2．0；（4）MS＋BA1．0＋KT0．5＋ZT0．5；（5）MS＋BA0．5＋KTI．0＋ZT0．5；（6）MS＋BA0．5＋KT0．5＋ZT1．0。培养基含蔗糖3％，琼脂0.6％，PH为5．8。培养温度为25±2℃，每日照光12h，光照度约2000lX。4生长与分化情况4且试管嫩梢的制备春季取田间生长的留兰香嫩梢，按…     

小鼠骨髓源性树突状细胞体外诱导培养方法的比较研究

目的探讨最佳体外诱导培养小鼠成熟树突状细胞（dendritic cells,DC）的方法。方法分离、纯化6周龄C57BL／6小鼠骨髓单核细胞,以含10％胎牛血清、20ng／ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和10ng／ml重组小鼠白细胞介素-4（IL-4）的RPMI-1640培养基培养7d,然后将细胞分成对照未刺激组、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激组和TNF-α＋脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）刺激组。继续培养48h后,观察各组细胞形态,检测IL-12、IL-6浓度及细胞表面标志CD11c、CD80、CD86和MHC II。结果培养9d后,两刺激组培养的细胞经相差显微镜观察有DC生长。TNF—α刺激组细胞培养上清液中IL-6、IL-12含量显著高于对照组（P〈0．01）,但显著低于TNF—α＋LPS刺激组（P〈0．05）。3组均高表达CD11c,各组间无显著差异;而CD80、CD86和MHC II表达阳性率TNF-α刺激组显著高于对照组（P〈0．01）,TNF-α＋LPS刺激组显著高于单纯TNF—α刺激组（P〈0．05）。结论联合使用TNF-α与LPS刺激可使DC成熟度提高,分泌IL-6、IL-12增加。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响

探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对体外培养的两株胃癌细胞（SGC-7901和BGC-823）增殖及细胞周期的影响。采用细胞培养、噻唑蓝（MTF）比色法、流式细胞定量检测（FCM）、蛋白质免疫印迹（Western印迹）以及免疫细胞化学染色（ICH）等方法,研究不同浓度DON处理72h对体外培养胃癌细胞的增殖、细胞周期及细胞周期相关蛋白—细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（CKIs）P21WAF/CIP1和细胞周期蛋白E（cyclin E）表达的影响。MTT法检测结果显示DON可明显抑制两株胃癌细胞的增殖,SGC．7901和BGC．823细胞100、500、1000ug／L DON处理组的增殖抑制率分别为4．28％、36．20％、45．35％和14．89％、32．30％、51．61％。FCM检测结果显示,给予1000ug／LDON处理72h可使两株细胞周期阻滞在GffM期。在100～1000u扎浓度范围内,两株细胞P21WAF／CIP1表达量均高于对照组,P21WAF／CIP1的表达与DON浓度呈显著正相关关系（SGC-7901细胞：r=0．886,P〈0．01;BGC-823细胞：r=0．943,P〈0．01）;两株细胞的细胞周期蛋白E表达量均低于对照组,与DON浓度有明显剂量依赖关系（SGC．7901细胞：r=-0．923,P〈0．01;BGC-823细胞：r=-0．854,P〈0．01）。Western印迹及免疫细胞化学检测进一步证实了DON处理对蛋白质表达的影响。综合结果表明,DON可抑制体外培养胃癌细胞的增殖活性,G2／M期阻滞、P21WAF/CIP1表达增高及细胞周期蛋白E表达下降可能是DON抑制胃癌细胞增殖的可能机制,DON对分化程度不同的胃癌细胞的影响没有明显差别。     

纳米银水凝胶涂膜干预气管导管表面铜绿假单胞菌黏附及生物膜形成的实验研究

目的研究纳米银水凝胶涂膜对气管导管（endotracheal tube,ETT）表面铜绿假单胞菌粘附及细菌生物膜（biofilm,BF）形成的干预作用。方法实验共设6组,分别为空白对照组,涂纳米银3．5、7．0、10．5、14．0和17．5μg／cm^2组。参考Brown平板法,制备ETT、表面铜绿假单胞菌BF模型。通过超声振荡-平板菌落计数法检测体外培养6、12、18h时各组ETT表面BF中的活细菌粘附数量。借助激光共聚焦显微镜观察BF中的活死菌分布情况,并测量BF厚度。结果（1）与空白对照组相比,最小量涂膜组（3．5μg／cm^2）体外培养6h时,导管表面活细菌的粘附量显著减少（P〈0．05）,12h时差异无显著性（P〉0．05）;最大量涂膜组（17．5μg／cm^2）体外培养6h时,ETT表面几乎未见细菌粘附（P〈0．05）,18h时BF中的活菌数量及BF厚度均显著减少（P〈0．05）。（2）激光共聚焦显微镜观察可见,培养6h时,空白对照组ETT表面粘附的死活菌呈不规则散点样分布,未见明显的细菌菌落形成,而各实验组ETT表面仅有细菌零星分布,其数量少于空白组。18h时空白对照组表面可见大量活死菌堆积粘连,有小菌落形成并相互交通成地图状,可见典型BF结构,而此时最大量涂膜组（17．5μg／cm^2）表面仅见数量不等的菌落形成,菌落周围可见数量不等的细菌分布。结论纳米银水凝胶涂膜可有效减少ETT表面铜绿假单胞菌的粘附数量,延缓导管表面细菌BF形成,其作用强弱随培养时间及单位面积中的纳米银剂量的变化而变化。     

应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测BMSCs诱导大鼠肝星状细胞中DR5mRNA表达

目的应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测骨髓间充质干细胞（BMSCs）对大鼠肝星状细胞（HSCs）的死亡受体5（DR5）mRNA表达的影响,探讨BMSCs诱导HSCs凋亡及其机制。方法采用贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠BMSCs,传至第4代使用;大鼠原代HSCs细胞及肝纤维原细胞系冻融后传代使用。应用6孔塑料培养板,建立上下双层细胞共培养体系,常规培养。实验分为3组：（1）实验组：BMSCs与HSCs共培养;（2）空白对照组：HSCs单独培养;（3）阴性对照组：大鼠肝纤维原细胞与HSCs共培养。以上培养体系动态观察24、48、72h,应用流式细胞仪检测HSCs细胞凋亡率,采用SYBRGreenI荧光实时定量RT-PCR法检测,以β-actin基因作为内参,计算各组DR5mRNA的相对表达量。结果在共培养组中,BMSCs促进了HSCs凋亡,与其他两组比较差异有显著统计学意义（P〈O．01）,空白对照组与阴性对照组比较无统计学意义（P〉0．05）。实验组BMSCs能明显上调HSCs中DR5mRNA的表达,与空白对照组和阴性对照组比较差异有显著统计学意义（P〈O．01）;空白对照组与阴性对照组DR5mRNA的表达比较无统计学意义（P〉O．05）。结论利用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测BMSCs诱导大鼠肝星状细胞中DR5mRNA表达,为进一步研究BMSCs通过死亡受体途径调控HSCs凋亡以及为BMSCs用于治疗肝纤维化的机制研究提供了理论基础。