小鼠急性结肠炎中亚硒酸钠对滤泡辅助性T细胞的调控作用

微量元素硒对炎性肠道疾病的免疫调控效应一直是研究关注的焦点.本文采用葡聚糖硫酸钠诱导的实验性小鼠急性溃疡性结肠炎模型,观察了亚硒酸钠(Na₂SeO₃)灌胃对肠道局部及相关淋巴组织中的天然免疫细胞、适应性免疫B细胞、细胞毒性T细胞(cytotoxic T cells, CTL)和辅助性T细胞(helper T cells, T_H)的不同亚群T_H1,T_H2,调节性T细胞(regulatory T cells, Treg)及滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells, T_FH)等的功能分化调控效应,并在体外观察了Na₂SeO₃对T_FH细胞分化的调控规律.结果显示,亚硒酸钠灌胃补硒可以加重急性肠炎,并促进TFH细胞在肠道局部及肠周围淋巴组织浸润和B细胞免疫球蛋白A(immunoglobulin A, IgA)分泌.这为微量元素硒免疫调控肠道炎性疾病研究提供了依据,也为硒的临...     

低聚果糖对溃疡性结肠炎模型小鼠肠黏膜屏障影响的研究

目的 探讨低聚果糖对溃疡性结肠炎（UC）模型小鼠肠黏膜屏障的调节作用及可能机制。方法 小鼠随机分成3组：正常对照（NC）组、模型（MD）组和低聚果糖（FOS）组,采用葡聚糖硫酸钠制作UC小鼠模型。造模7 d同时给予干预治疗,停用造模药物并后续治疗7 d。采用细菌定量测定法检测肠道菌群,放射免疫法检测肠黏膜sIgA,ELISA法检测小鼠肠黏膜IL-10、TNF-α和IL-6水平。结果 模型组小鼠存在肠道菌群失调（t=2.088,2.036,2.203,2.109,P<0.05）,其TNF-α、IL-6水平高于正常对照组（t=1.734,1.801,P<0.05）,肠黏膜sIgA、IL-10低于正常对照组（t=1.820,1.806,P<0.05）;低聚果糖组肠道菌群失调状况较模型组有所改善,其TNF-α、IL-6水平低于正常对照组（t=1.980,1.816,1.936,1.920,1.969,1.893,P<0.05）,肠黏膜sIgA、IL-10高于正常对照组（t=1.801,1.796,P<0.05）。结论 低聚果糖可改善溃疡性结肠炎模型小鼠肠道菌群屏障功能,可以提高肠黏膜sIgA和抗炎细胞因子IL-10的水平并降低致炎细胞因子TNF-α和IL-6的水平,通过调节肠道过度的免疫反应,使免疫屏障功能得到一定恢复。     

辅助性T细胞17的研究进展

CD4 T细胞根据释放细胞因子不同可分为不同的亚型:辅助性T细胞(T helper cells, Th)1、Th2和调节性T细胞(regulatory T cells, Treg).最近发现了一种新的CD4 T细胞亚型:以分泌白细胞介素-17为主要特征的Th17细胞.Th17细胞的发现对CD4 T细胞分化、Th细胞漂移等传统理论提出了挑战,同样也为感染、免疫性疾病提供了新的研究思路,尤其是Treg、Th1、Th2和Th17细胞在体内的平衡对于维持正常免疫应答反应有重要意义.     

牛蒡低聚果糖对小鼠抗疲劳作用的研究

为研究牛蒡低聚果糖(BFOS)对小鼠的抗疲劳作用,将牛蒡低聚果糖用三个不同剂量组100、200、400mg.kg-1.d-1给小鼠灌胃,对照组为生理盐水,连续灌胃42 d,末次饲喂30 min后进行游泳实验,耐缺氧实验,测定运动耐力、血乳酸(LAC)、血尿素氮(BUN)等指标。测试结果表明三个剂量的牛蒡低聚果糖均能显著提高运动耐力和耐缺氧时间;降低运动后LAC和BUN的含量;提高肌、肝糖元含量。说明牛蒡低聚果糖具有良好的抗疲劳作用,200 mg.kg-1.d-1为最佳用量,高剂量无明显优势。     

蔗果三糖及低聚果糖对T细胞分泌干扰素γ的调节作用CSCD

目的研究蔗果三糖及低聚果糖(fructooligosaccharides,FOS)对T细胞分泌干扰素(interferon-,IFN-γ^(+))的调节作用。方法从外周血单个核细胞分离培养T细胞。在培养基中添加5mg/mL的蔗果三糖或FOS并检测T细胞的诱导分化。平行设置空白对照。经过3d的原代培养或6d的原代及传代培养,采用流式细胞术检测IFN-γ^(+)T细胞的比例,酶联免疫吸附法测定细胞培养液的IFN-γ^(+)浓度。结果经过3d的原代培养,蔗果三糖组IFN-γ^(+)T细胞比例(47.8100%±4.8800%)显著高于FOS组(36.9600%±4.5800%,P=0.0002)或空白对照组(31.4000%±3.8900%,P=0.0001),蔗果三糖组细胞培养液的IFN-γ^(+)浓度(848.5100 ng/mL±269.0000ng/mL)也显著高于FOS组(357.8700ng/mL±87.3000ng/mL,P=0.0040)或空白对照组(283.5100ng/mL±76.0300ng/mL,P=0.0001);而且,经过6d的原代及传代培养,无论传代之后是否添加蔗果三糖与FOS,蔗果三糖组IFN-γ^(+)T细胞比例(32.0600%±5.2600%;31.7900%±4.8600%)始终显著高于FOS组(22.1300%±4.5400%,P=0.0078;21.8900%±4.4800%,P=0.0086)或空白对照组(18.6500%±2.6900%,P=0.0071;17.8300%±3.1300%,P=0.0074)。结论蔗果三糖有助于T细胞分化并促进T细胞分泌IFN-γ^(+)。     

IL-6抗体对银屑病小鼠的治疗作用及其对外周血辅助性T细胞和树突状细胞影响的研究

摘要 目的：研究白介素-6（Interleukin-6,IL-6）抗体对银屑病小鼠的治疗作用,并探讨IL-6抗体治疗对银屑病小鼠外周血辅助性T细胞和树突状细胞影响。方法：30只6-8周龄SPF级BALB/c小鼠按照随机数字表法分为Normal组、Model组和IL-6组,Model组和IL-6组小鼠通过在背部脱毛区涂抹咪喹莫特建立银屑病小鼠模型。IL-6组小鼠通过在背部脱毛区皮下注射IL-6抗体进行治疗。比较三组小鼠皮损组织银屑病皮损面积及严重程度指数（psoriasis area and severity index,PASI）、表皮厚度和血管数、血清TNF-α、IL-17和IL-23含量、外周血树突状细胞、Th17细胞和Th22细胞比例以及皮损组织IL-6、IL-21和STAT3蛋白表达。结果：IL-6抗体治疗后,Model组和IL-6组小鼠皮损组织PASI、表皮厚度和血管数,血清TNF-α、IL-17和IL-23含量,外周血树突状细胞、Th17细胞和Th22细胞比例,以及皮损组织IL-6、IL-21和STAT3蛋白表达均显著高于Normal组小鼠（P<0.05）;与Model组相比,IL-6组小鼠皮损组织PASI、表皮厚度和血管数,血清TNF-α、IL-17和IL-23含量,外周血树突状细胞、Th17细胞和Th22细胞比例,以及皮损组织IL-6、IL-21和STAT3蛋白表达均显著降低（P<0.05）。结论：IL-6抗体对银屑病小鼠模型具有较好的治疗作用,其机制可能与通过抑制IL-6/STAT3通路影响Th17/Th22和树突状细胞水平有关。     

吴茱萸碱对DSS诱导小鼠急性溃疡性结肠炎的保护作用研究

目的:溃疡性结肠炎是诱发炎症性相关结直肠癌的最主要病因.前期研究表明,吴茱萸碱对于氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠炎症性相关结直肠癌有着显著的预防作用,本研究旨在探究吴茱萸碱是否在结肠炎急性阶段即可起到预防保护作用.方法:建立葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性结肠炎模型,将40只小鼠随机分为溶剂对照组、模型组、吴茱萸碱低剂...     

抗原特异性滤泡辅助性T细胞的活化与诱导在流感减毒活疫苗所诱导的人黏膜免疫抗体应答中发挥关键作用

当前,抗呼吸道感染的鼻内疫苗开发项目正日益吸引着越来越多的关注。对疫苗所诱导的保护力而言,抗体应答是决定性的,而人们普遍认为滤泡辅助T细胞(TFH)对于介导抗体应答非常重要。绝大多数支持TFH在免疫应答中作用的数据均来自于动物研究,而除血液中存在TFH样细胞外,来自人体的直接证据则十分有限。研究者考察了在人类鼻咽相关淋巴组织(NALT)中TFH细胞的活化与诱导,及其在流感减毒活疫苗(LAIV)所诱导的抗体应答中的作用。腺扁桃体组织的TFH细胞活化情况使用流式细胞仪分析,同时在LAIV刺激扁桃体单核细胞(MNC)后检测抗流感血凝素(anti-HA)抗体。通过使用流式细胞仪对被诱导的TFH细胞和CD154表达进行分析,研究者对由LAIV诱导的抗原特异性TFH细胞活化情况展开研究。LAIV诱导了与抗HA抗体产生有关的TFH细胞增殖,同时研究显示TFH细胞对于抗体应答至关重要。表达BCL6和CD21新诱导的TFH细胞以及随后抗HA抗体的测定表明,初始T细胞被LAIV诱导成为TFH细胞。     

滤泡辅助性T细胞分化和功能的研究进展

滤泡辅助性T细胞(Tfollicular helper cells,TFH细胞)是新近发现的一种CD4+辅助性T细胞亚群,具有不同于其他亚群的独特功能:迁移到B淋巴滤泡并辅助B淋巴细胞产生抗体。在短短的几年里面,已有大量针对滤泡辅助性T细胞分化与功能的研究。该文将对滤泡辅助性T细胞的最新研究进展作一综述。     

双歧杆菌低聚果糖制剂对便秘人群肠道菌群的调整作用

目的调查便秘与非便秘人群肠道菌群状况,考察便秘人群服用双歧杆菌低聚果糖合生元后肠道菌群改善的情况。方法采集40岁以上便秘与非便秘人群粪便,各选取10例作厌氧和需氧菌培养、计数与鉴定。结果分离培养出葡萄球菌、肠杆菌、酵母菌、双歧杆菌和乳酸杆菌。比较不同组人群5种肠道菌群的差异,结果显示便秘人群中出现肠道菌群失调,便秘组双歧杆菌、乳杆菌含量明显降低,服用双歧杆菌低聚果糖合生元后肠道菌群状况恢复到正常人群水平。结论服用双歧杆菌低聚果糖合生元可以改善便秘人群肠道菌群失调状况,对便秘人群具有一定治疗作用。     

CAFs调控MAPK/ERK5通路抑制结直肠癌HT-29细胞凋亡

为探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究通过组织贴壁法从结直肠癌组织中分离CAFs,并验证CAFs中α-SMA的表达;通过Transwell建立CAFs和结直肠癌细胞系HT-29共培养系统,CCK8检测结直肠癌HT-29细胞活力;流式细胞术检测HT-29细胞凋亡率;通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测结直肠癌细胞中VEGF的mRNA和蛋白表达以及ERK5磷酸化水平。与对照NFs相比,α-SMA在结CAFs中表达显著增加(p0.01)。CCK8结果表明CAFs促进结直肠癌细胞的增殖;流式结果显示CAFs能抑制细胞凋亡;Real-time RT-PCR和Western blotting结果显示CAFs促进结直肠癌细胞内VEGF的mRNA和蛋白表达,并促进ERK5磷酸化。本研究初步表明,CAFs激活MAPK/ERK5通路和VEGF的表达,可促进结直肠癌HT-29细胞增殖。     

STAT3-siRNA对人结直肠癌细胞的干涉作用

目的:研究STAT3-siRNA对STAT3基因表达阳性的结直肠癌细胞凋亡的影响。方法:应用脂质体转染试剂将STAT3-siRNA表达盒(STAT3-siRNA expression cassettes,STAT3-SECs)体外转染至人结直肠癌SW480细胞及人成纤维细胞中,同时分别设立人成纤维对照组、SW480对照组、SW480错配链-SECs组和SW480空转染试剂组。于48h后收集细胞,先经荧光染色方法观察细胞表象变化,再通过流式细胞仪检测人结直肠癌SW480细胞凋亡情况,后分别提取细胞总RNA,用RT-PCR测定STAT3基因在mRNA水平的表达。结果:SW480STAT3-SECs组的细胞可见凋亡小体,出现明显的凋亡现象,而人成纤维对照组、人成纤维STAT3-SECs组、SW480对照组、SW480错配链-SECs组和SW480空转染试剂组未出现明显的凋亡现象。SW480STAT3-SECs组细胞的凋亡比率较SW480对照组、SW480错配链-SECs组和SW480空转染试剂组有明显的增高。RT-PCR所得数据经统计学处理得出:SW480STAT3-SECs组细胞的STAT3基因表达在mRNA水平上显著低于SW480对照组(P0.01);而人成纤维对照组与人成纤维STAT3-SECs组,SW480细胞对照组与SW480错配链-SECs组、SW480空转染试剂组之间无明显差异(P0.05)。结论:应用RNAi技术沉默STAT3基因可以降低人结直肠癌SW480细胞中STAT3的表达,诱导细胞的凋亡。     

信号肽和辅助性T细胞表位增强HBV核心抗原DNA疫苗诱导的免疫应答

为增强HBVDNA疫苗的免疫效率 ,于HBV核心抗原 (HBcAg)基因 5′末端引入人IL 2信号肽和一个通用型辅助性T淋巴细胞表位基因 ,并构建成DNA疫苗 ,转染COS7细胞后经ELISA检测出分泌型HBcAg。通过肌肉注射途径分别将这种DNA疫苗和编码天然HBcAg的DNA疫苗免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,结果表明前者诱导细胞和体液免疫应答的强度均明显超过后者 ,且更趋向于T辅助细胞 1(Th1)型免疫应答 ,故其对慢性HBV感染的治疗可能有潜在的应用价值     

低聚果糖对慢性应激小鼠抑郁样行为及肠道菌群的影响

目的 探讨低聚果糖（FOS）对慢性应激小鼠的抑郁样行为及肠道菌群的影响。方法 选取8周龄健康雄性ICR小鼠随机分成3组,C组小鼠每天给予正常护理,S组和SF组小鼠每天随机给予1～2种应激源,持续8周,SF组小鼠在应激造模的同时经食物补充FOS。在造模4周和8周后,分别通过强迫游泳、蔗糖偏好试验评估各组小鼠抑郁样行为。造模结束后通过Western blot试验检测小鼠大脑皮层内糖皮质激素受体（GR）的表达,并收集结肠内容物进行16S rDNA扩增子测序分析。结果 应激造模8周后,C、S和SF三组小鼠的肠道菌群组成存在明显差异;与C组相比,S组小鼠强迫游泳的不动时间显著增加（t=3.970,P=0.0009）,蔗糖偏好率显著降低（t=3.890,P=0.0011）,脑内GR的表达显著降低（t=4.311,P=0.0125）;与S组相比,SF组小鼠强迫游泳的不动时间显著缩短（t=3.495,P=0.0026）,蔗糖偏好率和脑内GR表达有增加趋势。结论 益生元FOS可调节肠道菌群,改善慢性应激诱发的精神情绪异常。     

缺氧通过SIRT1调控结直肠癌细胞自噬

目的:探究缺氧调控结直肠癌细胞自噬的分子机制。方法:分别在常氧及缺氧(1%氧气浓度)条件下处理细胞,western blot检测细胞内沉默信息调节因子1(Silencing Information Regulator 1,SIRT1)及自噬相关标志分子的表达情况;慢病毒转染构建SIRT1稳定过表达或敲减细胞株,利用透射电镜观察细胞内自噬体形成的情况;使用m RFP-GFP-LC3双标腺病毒感染细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞自噬流的进展。结果:Western blot结果显示,缺氧条件下,HCT116及SW480细胞内SIRT1的表达水平随着缺氧时间的延长而降低,自噬特异性底物p62蛋白水平降低且LC3-I/II转换增加;与对照组相比,SIRT1过表达细胞内自噬特异性底物p62的表达水平升高而LC3-I/II转换受到抑制;相反在SIRT1敲减细胞内,p62的表达水平降低而LC3-I/II转换进一步促进。透射电镜结果发现SIRT1过表达后,细胞内自噬溶酶体形成减少、自噬体数量增多;激光共聚焦结果显示,SIRT1过表达细胞内绿色荧光淬灭减少、自噬体与自噬溶酶体的融合收到明显抑制,说明SIRT1通过抑制自噬溶酶体的形成,阻断自噬流的进展。结论:缺氧通过抑制SIRT1的表达促进结直肠癌的细胞自噬。     

核桃低聚肽对急性溃疡性结肠炎小鼠的改善作用

目的：探讨核桃低聚肽（WOPs）对急性溃疡性结肠炎小鼠的改善作用。方法：成年雄性BALB/C小鼠按体重随机分为6组,空白对照组、模型对照组和3个WOPs剂量组（220、440、880 mg/kg BW）,每组10只。小鼠饮用5%DSS构建急性溃疡性结肠炎模型,灌胃给予相应受试物7 d,每日观察测量DAI。7 d后,处死小鼠测量结肠外观形态及长度变化、CMDI,血清DAO、D-LA含量,结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、MPO含量,并进行结肠组织病理学观察。结果：WOPs能显著减少血清DAO和D-LA含量,降低DAI评分、结肠组织MPO、IL-1β、IL-6、TNF-α水平,提高IL-10水平,明显增加结肠长度,降低CMDI。此外,WOPs还可以恢复DSS所致的结肠黏膜炎症损伤。结论：WOPs对经DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠具有改善作用,其机制可能与调整机体内促炎因子与抗炎因子含量有关。     

循环滤泡辅助性T细胞亚型与重症肌无力患者临床特点之间的相关性分析

目的:分析循环滤泡辅助性T(c Tfh)细胞亚型与重症肌无力(MG)患者临床特点之间的关系。方法:横断面研究30例MG患者外周血c Tfh细胞各个亚型百分比和临床特点之间的关系。c Tfh细胞亚型的百分比是通过流式细胞术获取的。MG患者的临床特点包括性别、年龄、病程、胸腺情况、美国重症肌无力协会(MGFA)分型和重症肌无力量化(QMG)评分。结果:CD4~+CXCR5~+ICOS~+、CD4~+CXCR5~+PD-1~+和CD4~+CXCR5~+CXCR3-CCR6~+(Th17样)c Tfh细胞亚型百分比与QMG评分之间存在正相关关系;全身型重症肌无力(GMG)患者在CD4~+CXCR5~+ICOS~+、CD4~+CXCR5~+PD-1~+和Th17样c Tfh细胞亚型百分比要高于眼肌型重症肌无力(OMG)患者,OMG患者在CD4~+CXCR5~+CXCR3-CCR6-(Th2样)c Tfh亚型细胞百分比要高于GMG患者。c Tfh细胞各个亚型百分比与MG患者的性别、年龄、病程、胸腺情况均无显著相关性。结论:CD4~+CXCR5~+ICOS~+、CD4~+CXCR5~+PD-1~+和Th17样c Tfh细胞亚型百分比与MG病情严重性间存在正相关关系,提示c Tfh细胞与MG之间的密切关系。     

结直肠癌细胞外泌体激活肝星状细胞为癌相关成纤维细胞

目的:探讨结直肠癌(CRC)细胞上清外泌体对肝星状细胞(HSC)细胞的影响。方法:通过超高速离心结合过滤法提取和纯化CRC细胞上清外泌体,然后以透射电电子显微镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)和蛋白免疫印迹(WB)实验鉴定所提取的外泌体的形态、大小、粒径分布,以及外泌体表面标志蛋白HSP90和TSG101。再通过激光共聚焦显微镜(LSCM)观察荧光标记的外泌体被HSC细胞摄取的情况。以WB实验验证CRC细胞上清外泌体处理后的HSC中成纤维细胞活化蛋白(FAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。结果:TEM显示结直肠癌细胞外泌体呈"茶托样"杯型或类圆形囊泡样结构;NTA分析发现结直肠癌细胞外泌体直径峰值和大小分布范围分别为57 nm和30-150 nm;WB显示外泌体表面标志蛋白HSP90和TSG101均为阳性。LSCM观察发现Di O标记的外泌体(绿色),能够被Dil标记的HSC(红色)摄取。CRC细胞上清外泌体处理后的HSC中FAP和α-SMA表达水平较对照组显著升高。结论:HSC与CRC细胞上清外泌体共孵育后能够被激活成癌相关成纤维细胞。