防风愈伤组织的玻璃化法超低温保存及再生

为避免连续继代造成的愈伤组织变异,探索新的种质资源保存方法,对防风愈伤组织进行了超低温冷冻保存及植株再生研究。以关防风3周龄的愈伤组织为材料,单一变量法研究适宜的玻璃化法超低温保存程序。结果显示:(1)防风愈伤组织超低温保存的最佳方案为:4℃条件下于MS+1.0mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+5%DMSO的继代培养基中预培养3d,60%PVS2常温装载20min,100%PVS2于2℃脱水45min后直接投入液氮。(2)防风愈伤组织经超低温保存后的相对存活率最高为79.24%,其中预培养和脱水是实现超低温冻存的关键环节,且1.0mol/L蔗糖的MS溶液洗涤、暗培养14d以上有助于冻后愈伤组织恢复生长。研究表明,玻璃化超低温冻存可以作为防风愈伤组织的保存方法,冻后愈伤可以恢复生长并再生成完整植株。     

红豆杉愈伤组织超低温保存有关因素的研究

对红豆杉愈伤组织超低温保存中几个主要因素进行了比较,试验证明预培养时间、预培养基中蔗糖浓度、保护剂的组合以及冰冻降温方法与超低温保存后的相对细胞活力密切相关.试验结果表明,在含8%蔗糖的62号液体培养基中振荡预培养6d,红豆杉愈伤组织在超低温保存后细胞活力可保持最高.有效的冷冻保护剂为10%山梨醇+10%DMSO,冷冻方法以分步冷冻和慢冻较为适宜,而经快冻的愈伤组织复苏后活力低下.     

杜仲愈伤组织超低温保存的研究

采用单因子比较、正交设计和均匀设计法,分别考察影响杜仲愈伤组织诱导、生长及其超低温保存的因素。试验表明：Ｂ５＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋６—ＢＡ１ｍｇ／Ｌ有利于意伤组织诱导。ＭＳ＋２．４—Ｄ３ｍｇ／Ｌ＋６—ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ则有利于愈伤组织快速生长。超低温保存的最佳材料是２周龄的愈伤组织。愈伤组织超低温保存的较好冷冻保护剂是１２．５％Ｇｌｙ＋７．５％ＰＥＧ＋２．５ｇ／ＬＬＨ。     

野生稻愈伤组织的超低温保存和冻后再生植株的形成

对不同基因组的野生稻愈伤组织进行了超低温保存的研究,主要结果如下：①野生稻愈伤组织经过预培养→预处理→冰冻降温→液氮保存→快速解冻的超低温保存,冻后细胞存活率最高可达８７．９％。②１０％ＤＭＳＯ＋８％葡萄糖为最佳冰冻保护剂。降温程序为０℃→－１０℃,１５ｍｉｎ→－４０℃,６０ｍｉｎ→液氮（ＬＮ）。③普通野生稻、宽叶野生稻、疣粒野生稻获得了冻后再生植株。④疣粒野生稻解冻后形成旺盛胚性愈伤组织,并通过体细胞胚胎发生途径再生出大量植株。     

红豆杉愈伤组织超代温保存有关因素的研究

对红豆杉愈伤组织超低温保存中几个主要因素进行了比较,试验证明：预培养时间、预培养其中蔗糖浓度、保护剂的组合以及冰冻降温方法与超低温保存后的相以细胞活力密切相关。试验结果表明,在含8％蔗糖的62号液体培养基中振荡预培养6d,红豆杉愈伤组织在超低温保存后细胞活力保持最高。有效的冷冻保护剂为10％山梨醇＋10％DMSO,冷冻方法以分步冷冻和慢冻较为适宜,而经快冻的愈伤组织复苏后活力低下。     

凹叶厚朴愈伤组织的超低温保存

采用单因子比较和均匀设计法。研究凹叶厚朴愈伤组织超低温的影响因素。结果表明：超低温保存的适宜材料是４周龄的愈伤组织。经４－６℃低温下预培养１２天的愈伤组织抗冻能力最强。     

江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的包埋玻璃化超低温保存

为长期安全保存江西铅山红芽芋种质资源,本文以江西铅山红芽芋的胚性愈伤组织为对象,研究了包埋玻璃化冻存过程中各因素对细胞活力和愈伤组织成活率的影响,优化建立了江西铅山红芽芋胚性愈伤组织包埋玻璃化超低温保存体系。将约0.2 g胚性愈伤组织块包埋成海藻酸钙凝胶珠后,在25℃下转入MS+2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA+0.75 mol/L蔗糖的培养基中于14 h/d光周期下预培养1 d;预培养后的胚性愈伤组织块用2 mol/L甘油和0.4 mol/L蔗糖的混合物在25℃下装载40 min;采用PVS2在25℃下脱水30 min,更换PVS2后直接投入液氮保存1 d;再将胚性愈伤组织块置于37℃恒温水浴中化冻3 min,然后用MS+2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA+1.2 mol/L蔗糖的液体培养基洗涤3次,每次10 min;洗涤后的胚性愈伤组块转入MS+2 mg/L TDZ+1mg/L NAA固体培养基上先暗培养7 d再转到14 h/d光周期中培养。7 d后胚性愈伤组织块开始恢复生长,并且在30 d内分化出胚状体;将胚状体再次转入MS+2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA固体培养基上,60 d后形成完整的植株。红芽芋胚性愈伤组织包埋玻璃化超低温保存后的平均成活率约为60%,并且红芽芋胚性愈伤组织冻后再生苗没有发生形态性状和染色体数目的变异,此结果为长期安全保存江西铅山红芽芋种质资源奠定了良好的基础。     

江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的包埋干燥法超低温保存

对江西铅山红芽芋（Colocasia esculenta var．cormosus cv．Hongyayu）胚性愈伤组织包埋干燥法超低温保存进行了初步的研究。结果表明：江西铅山红芽芋胚性愈伤组织包埋干燥法超低温保存较佳的条件为：0．75mol·L-1蔗糖预培养3d;脱水方式为空气干燥7h或硅胶干燥11h;化冻温度为37℃（2min）;冻后培养条件为暗培养7d再转到光周期中培养。此方法超低温保存后的平均成活率约为45％。超低温保存时间以及是否去除包裹的褐藻酸钙对其成活率无显著性影响。形态学和细胞学检测表明红芽芋胚性愈伤组织冻后再生苗与母本材料相比没有发生变异。     

籼粳杂交水稻FI 种子胚愈伤组织诱导及再生体系建立

研究了籼粳杂交F1种子胚愈伤组织诱导与2,4-D浓度变化的关系,在愈伤组织继代培养一段时间后,通过预培养和再生培养阶段,获得了从愈伤组织直接分化而来的再生植株。     

籼粳杂交水稻F1种子胚愈伤组织诱导及再生体系建立

研究了籼粳杂交Ｆ１种子胚愈伤组织诱导与２,４＿Ｄ浓度变化的关系,在愈伤组织继代培养一段时间后,通过预培养和再生培养阶段,获得了从愈伤组织直接分化而来的再生植株     

仙客来愈伤组织的超低温保存

为了避免连续继代造成仙客来愈伤组织的变异, 对仙客来愈伤组织进行了超低温冷冻保存研究。以继代后处于对数生长期的愈伤组织为实验材料, 首先在含有不同蔗糖浓度的培养基上预培养不同时间, 转至不同的冰冻保护剂中直接液氮冷冻或-20oC预冷冻2 h, 然后液氮超冷冻保存, 37oC水浴迅速解冻, 并用相应蔗糖浓度的液体培养基洗涤, 以中性红染色测定细胞的存活率, SPSS13.0软件进行统计学分析。结果表明: 预培养基中蔗糖浓度、预培养时间、降温方式、冷冻保护剂等对解冻后材料相对存活率存在不同程度的影响, 筛选出4%蔗糖浓度预培养3 d、9号保护剂、0oC停留30 min后直接冷冻为超低温保存的最佳方案, 通过简单的方法获得了较好的愈伤组织保存效果。     

仙客来愈伤组织的超低温保存

为了避免连续继代造成仙客来愈伤组织的变异, 对仙客来愈伤组织进行了超低温冷冻保存研究。以继代后处于对数生长期的愈伤组织为实验材料, 首先在含有不同蔗糖浓度的培养基上预培养不同时间, 转至不同的冰冻保护剂中直接液氮冷冻或-20oC预冷冻2 h, 然后液氮超冷冻保存, 37oC水浴迅速解冻, 并用相应蔗糖浓度的液体培养基洗涤, 以中性红染色测定细胞的存活率, SPSS13.0软件进行统计学分析。结果表明: 预培养基中蔗糖浓度、预培养时间、降温方式、冷冻保护剂等对解冻后材料相对存活率存在不同程度的影响, 筛选出4%蔗糖浓度预培养3 d、9号保护剂、0oC停留30 min后直接冷冻为超低温保存的最佳方案, 通过简单的方法获得了较好的愈伤组织保存效果。     

江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的玻璃化法超低温保存及植株再生

以江西铅山红芽芋胚性愈伤组织为材料,研究各种因素对其玻璃化法超低温保存的影响。结果表明:江西铅山红芽芋胚性愈伤组织玻璃化法超低温保存较佳的预培养条件为0.3mol·L-1蔗糖预培养3d,较佳的60%PVS2装载时间为20min,较佳的100%PVS2脱水条件为25℃脱水30min,较佳的化冻温度为40℃,较佳的洗涤液蔗糖浓度为1.2mol·L-1,较佳的冻后培养条件为暗培养7d再转到光周期中培养。红芽芋胚性愈伤组织包埋玻璃化超低温保存后的平均成活率约为70%。红芽芋胚性愈伤组织冻后再生苗没有发生形态学、生理学和细胞学的变异。     

用花药愈伤组织作为转化受体的水稻转基因植株的分析

以花药愈伤组织作为转化的受体材料,利用农杆菌介导法将已克隆的Xa21基因导入粳稻栽培品种台北309中。共获得7个转基因株系,其中2个单倍体,4个二倍体,1个混倍体。PCR、Southern、FISH以及白叶枯病抗性的分析结果都表明．Xa21基因已整合到T0代受体基因组。调查了4个二倍体株系T1代的分离情况,经x^2测验证明,有2个株系的分离比为3：1,为单拷贝插入,另外2个株系不符合孟德尔分离。4个T0代二倍体转基因株系应为杂合二倍体。     

ABA,NAA诱导水稻胚性愈伤组织的研究

ＡＢＡ和ＮＡＡ联合使用能有效地诱导水稻原生质体再生的愈伤组织向胚性发展。通过液体浅层培养由原生质体得到的愈伤性发展。通过液体浅层培养由原生质体得到的愈伤组织,在含ＡＢＡ和ＮＡＡ的Ｎ８培养基上培养一段时间,可以诱导原来呈非胚性状态的愈伤组织形成胚性愈伤组织,并在含ＺＴ的Ｎ６分化培养基上产生绿点。通过对这两种愈伤组织的生化分析,表明二者在游离氨基酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、核酸及蛋白质含量等方面,特别是ＳＤＳ     

水稻悬浮细胞的超低温保存研究

本研究分析了水稻悬浮细胞的生理状态和各种冷冻前处理等因素对超低温保存后细胞存活率的影响。结果表明,继代后培养３－５天,处于对数生长期的细胞,采用二步冷冻法,超低温保存后存活率最高,采用二步冷冻法,超低温保存后存活率最高。电镜超微结构观察显示,０．５ｍｏｌ／Ｌ,山梨醇预培养,１０％ＤＭＳＯ＋０．５ｍｏｌ／Ｌ山梨醇复合保护剂处理,液泡显著变小,数目明显减少,从而降低了细胞内自由水含量,数目明显减少,从     

抗冻蛋白应用于水稻悬浮细胞超低温保存的研究

AFP from winter flounder was utilized in cryopreservation of plant cells. During cryopreservation of rice suspension cells by two-step method, AFP at 0.01 mg/ml damaged the cells extremely. The data obtained at relatively high concentration, however, decreased the variability of survival rate. During vitrification of rice cells, AFP at 0.2 mg/ml enhanced the viability. However, high concentration AFP (> 5 mg/ml) decreased the recovery rate. Studies indicated that the results of application of AFP in cryopreservation were closely related to the concentration of cryoprotectant. The amount of ice crystal in environment, the concentration of AFP and cryoprotectant, and the composition of plasma membrane were several key factors affecting the results of AFP application. In mechanism analysis, the authors suggested that on one hand AFP can interact with ice crystal, which inhibits ice recrystallization and prevent the cells from devitrification. On the other hand, AFP also can interact with cell membrane, resulting in the ice growth around the plasma membrane.     

水稻愈伤组织内部胚性细胞的形成及发育

发育成胚状体的水稻愈伤组织表面胚性细胞,在继代过程中被非胚性细所包围,渐渐形成内部胚性细胞。共形态结构与表面胚性细胞相同,但周围缺乏表面细胞下面的一层至几层含丰富的淀粉粒的细胞,内部胚性细胞形成团后行然以外形成突起,产生根冠原,逐渐形成根而突出愈伤组织,内部胚性细胞可向四周同时但不同步形成根冠原,未见芽或胚状体从内部胚性细胞产生,推测胚性愈伤组织失支胚胎发生能力及分化能力可能部分与胚性细胞部分裂或分裂不旺盛、,而非胚性细胞分旺盛从而使胚性细胞被包围,。稀释有关。