层粘连蛋白促进实体型瘤细胞粘着、铺展及~3H-TdR参人

 恶性肿瘤细胞或粘着于基膜以及在一定的基质上增殖对于肿瘤的浸润转移至关重要。层粘连蛋白(1aminin,LN)是基膜所特有的非胶原糖蛋白。我们研究了LN在肿瘤细胞粘着、铺展及增殖中的作用。通过测定粘着细胞所释放的LDH活性定量分析细胞粘着率。LN可显著增加体外培养的小鼠S180-V肉瘤及B16-MBK黑色素瘤细胞在玻璃及Ⅳ型胶原基质上粘着及铺展。纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)亦有类似作用。而非糖蛋白(牛血清清蛋白)或其他糖蛋白(鸡卵清清蛋白或免疫球蛋白)均无类似作用。此外,LN或FN抗体可分别抑制细胞粘着于LN或FN。这些结果表明LN或FN促细胞粘着作用是专一性的。扫描电镜观察表明,粘着在LN敷盖的玻璃表面的瘤细胞呈多突扁平形、膜皱襞及微绒毛十分稀少,而粘着在裸露的玻璃表面者为球形,膜皱襞及微绒毛甚多。再者,~3H-TdR向粘着于LN基质上的瘤细胞群的参入量显著高于粘着在裸露玻璃面者。     

细胞外间质-整合素在牵张刺激心肌细胞肥大中的作用

应用牵张刺激培养细胞的模型 ,观察胶原、纤维连接蛋白、层粘连素对牵张刺激心肌细胞肥大的影响 ,探讨细胞外间质 -整合素受体在超负荷心肌肥大的跨膜信号传导机制中的作用。结果发现 ,胶原、纤维连接蛋白、层粘连素明显有助于培养心肌细胞的贴壁、伸展。牵张刺激后 ,胶原、纤维连接蛋白基质组心肌细胞的 3H -亮氨酸掺入率和心肌细胞表面积均显著大于对照组 ,而层粘连素组无显著变化 ;可溶性纤维连接蛋白、RGD肽均可显著抑制牵张刺激诱导的培养心肌细胞 (胶原为粘附基质 )的3H -亮氨酸掺入率升高和心肌细胞表面积增大 ,而层粘连素无明显作用。结果表明 ,特异的细胞外间质 -整合素在超负荷心肌肥大机制中发挥了跨膜信号传导作用。     

脑胶质瘤间质免疫组织化学研究——脑瘤浸润和转移机制的探讨

探讨脑肿瘤的浸润转移机制,利用免疫组化技术对原发性脑胶质瘤间质组成进行观察。免疫组化结果显示,CollagenⅣ、Fibronection、Laminin（CollⅣ、FN、LM）三种抗原在正常脑组织及脑瘤组织的血管基底膜和其表面被覆软脑膜均有表达,以FN表达最强。CollⅣ表达稍次,LM表达最弱,在部分胶质瘤细胞外基质有FN阳性表达,胶质瘤细胞外基质FN阳性表达率与胶质瘤的分化程度无关。各型各级胶质瘤血管基底膜部分呈线状连续完整,部分呈分层网格状增厚。本研究结果显示：活体胶质瘤细胞自身合成的FN可能有助于瘤细胞的组织移行能力,在一定程度上促成了胶质瘤的浸润性生长;胶质瘤细胞与转移瘤细胞转移侵袭能力不同,为进一步探索脑瘤的转移机制,应重点分析瘤细胞表面大分子物质表达的特异性。     

QCM与光学显微镜共同应用于研究细胞–细胞相互作用对细胞–基质黏附的影响

细胞–基质黏附是一个动态而复杂的过程。在细胞培养与伤口愈合等细胞集体迁移过程中,细胞不同密度或细胞–细胞间不同相互作用势必影响细胞–基质间黏附,可有关这种影响的动态研究尚少。石英晶体微天平技术以细胞群为研究对象,能够实时监测细胞与传感元件表面之间的黏附相互作用及细胞黏弹性变化。该文通过培养不同细胞数目以模拟细胞–细胞间不同相互作用,将QCM技术与光学显微镜技术共同应用于研究人脐静脉内皮细胞细胞–细胞相互作用对细胞–基质间黏附的影响。结果显示,细胞–细胞间相互作用对细胞黏附的影响不具有单调性,需分强度范围讨论。当细胞–细胞间相互作用处于较弱范围时,细胞–细胞间相互作用可促进细胞铺展和细胞黏着斑的形成,最终强化细胞黏附,而强劲的细胞–细胞间相互作用会约束细胞铺展,减小黏着斑面积,细胞黏附因此减弱。     

纤维粘连蛋白及层粘连蛋白与肿瘤细胞的浸润和转移

纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)及层粘连蛋白(laminin,LN)是近年来受到广泛重视的细胞外基质非胶原糖蛋白。FN主要由中胚层来的细胞产生,亦可由上皮细胞及内皮细胞生成;LN则主要由上皮细胞及内皮细胞合成。FN以可溶及不溶两种形式分别存在于各种体液及细胞外基质(包括某些基膜);LN则以不溶的形式     

细胞外间质-整合素在牵张刺激心肌细胞肥大中的作用

应用牵张刺激培养细胞的模型,观察原原、纤维连接蛋白、层粘连素对牵张刺激心肌细胞肥大的影响,探讨细胞外间质－融洽纱受体在超负荷心肌肥大的跨膜信号传导机制中的作用。发现,胶原、纤维连接蛋白、层粘连素明显有助于培养心肌细胞的贴壁、伸展。牵张刺激后,胶原、纤维连接蛋白基质组心肌细胞的＾３Ｈ－亮氨酸掺入率和心肌细胞表面积均显著大于对照组,而层粘连素组无显著变化;可溶性纤维连接蛋白、ＲＧＤ肽均可显著抑制牵张刺     

不同的基质表面形貌对细胞生长行为的影响

在细胞体外培养中,基质的表面形貌特征是影响细胞行为的一个重要因素。在微米尺度范围内本文研究了几种不同几何轮廓的脊／沟状形貌结构和不同间距的柱状体对鼠C6神经胶质瘤细胞生长的影响。脊／沟状形貌结构诱导细胞趋向生长,不同的几何轮廓对细胞行为的影响存在差异。柱状体间距影响细胞的贴壁和铺展,进而影响细胞的生长行为;大的间距不利于细胞生长,当间距很小时,柱状体截面的几何轮廓影响细胞的行为。     

体外培养所形成的细胞外基质对MC3T3-E1细胞生长和分化的影响

细胞外基对组织细胞起支持、保护、营养作用,对细胞的增殖、分化有重要影响,在细胞和组织工程中,应该充分考虑细胞外基质的作用。本研究首先脱去培养板中融合培养的原代小鼠心肌成纤维细胞和成骨细胞,获得两种体外形成的细胞外基质包被的培养板,其中成骨细胞细胞外基质中含有骨形成蛋白2。然后将MC3T3-E1成骨前体细胞接种在这种培养板中,发现成纤维细胞胞外基质包被的培养板中的细胞增殖活性最高,而成骨细胞胞外基质包被的培养板中细胞的碱性磷酸酶活性、骨形成蛋白2和骨桥蛋白的相对蛋白表达量最高,细胞外钙沉积量比其他组高1倍左右。结果表明：包被在培养板上的这两种细胞外基质有不同的生物活性,成纤维细胞胞外基质可促进成骨前体细胞增殖,成骨细胞胞外基质可促进成骨前体细胞骨向分化。     

培养新生大鼠心肌细胞的电信号传导：多电极记录研究

利用多电极阵列同步记录技术对培养的新生大鼠单层心肌细胞的电活动进行胞外记录,观察心肌细胞在自发搏动和电刺激情况下信号在细胞间的传导模式。通过对记录信号的处理和分析,能获得诸如起搏细胞的数量和位置、动作电位的传导速度和途径以及不同起搏细胞间的相互影响等信息。研究还发现,心肌细胞阈下刺激会影响细胞的搏动和信号传导。     

层粘连蛋白(LN)和纤维连接蛋白(FN)在植入期地鼠子宫内膜中的表达——形态学和免疫组织化学研究

选用未孕及怀孕4－8天地鼠子宫内膜,用组织学、免疫组织化学染色及图像分析法,研究植入前后地鼠子宫内膜中LN、FN分布及含量的变化,探讨其与植入过程的相关关系。结果：在未孕地鼠,LN主要分布于宫内膜各类上皮基膜内,FN存在于基膜及细胞外基质中。孕4－8天,各类上皮基膜中LN、FN表达明显增多,与未孕地鼠相比,差异显（P＜0.01）。随着蜕膜形成,蜕膜（基质）细胞周围LN及FN表达增多。上述结果表明,LN、FN与植入过程及蜕膜功能密切相关。     

生物材料表面蛋白质微图形对人体软骨细胞形态及蛋白表达的影响

主要研究采用微接触印刷术在生物材料表面制备的细胞外基质蛋白微图形对人体软骨细胞粘附、铺展以及蛋白质表达等细胞行为的影响．研究结果表明,蛋白质微图形表面对细胞的粘附、铺展、排列以及细胞蛋白质表达具有明显的影响．细胞优先粘附在微图形蛋白区域,微图形形状以及尺度明显影响细胞的粘附形态以及铺展程度,同时也影响细胞生长过程中的Ⅱ型与Ⅵ型胶原蛋白的表达,细胞的铺展行为与细胞的蛋白质表达具有一定的正相关性,铺展较好的细胞表现出更好的Ⅱ型与Ⅵ型胶原蛋白表达．结果表明,通过在材料表面制备细胞外基质蛋白微图形可以有效调控人体软骨细胞的生长行为与功能．     

壳聚糖及其改性材料对骨髓基质细胞的作用

壳聚糖是一种广泛应用的生物可降解材料,该论文研究了几种与壳聚糖相关的材料对骨髓基质细胞生长和分化的作用,主要实验方法是在材料表面培养骨髓基质细胞并对其进行诱导促使其向成骨细胞方向分化。通过对细胞生长和分化情况的观察和测定,对几种材料与骨髓基质细胞的亲和性作出了评价。另外,通过ELISA法测定了细胞外基质分子在材料上的吸附量,测量了各材料的表面接触角以研究细胞在材料表面的铺展和增殖。结果表明尽管壳聚糖本身与骨髓基质细胞并不具有很好的亲和性,但通过与明胶混合,壳聚糖的生物相容性得到了明显提高,是很有应用前景的骨修复材料。     

潞党参多糖对宫颈癌细胞SiHa增殖和迁移的影响

以上党地区道地药材潞党参的多糖成分(Lu Dangshen polysaccharides,LDP)为对象,研究其对人宫颈癌细胞Si Ha的增殖及迁移的影响。通过MTT法检测LDP对Si Ha细胞增殖的影响。通过细胞黏附试验、铺展试验和划痕试验,分析LDP对Si Ha细胞迁移的影响。结果显示,LDP显著抑制了Si Ha细胞的增殖,IC50值为0.68 mg/m L;LDP明显抑制了Si Ha细胞与外基质的黏附作用,延缓了其铺展过程,并抑制了其体外迁移运动能力。LDP对人宫颈癌细胞Si Ha的增殖、黏附、铺展以及迁移运动能力具有显著的抑制效应,具有开发为肿瘤治疗的辅助药物及保健食品的价值。     

PTEN对SMMC—7721人肝癌细胞迁移增殖及粘着斑激酶磷酸化水平的影响

抑癌基因PTEN编码产物具有双专一性磷酸酶活性 ,并与细胞骨架张力蛋白同源。PTEN可参与粘着斑的形成和解聚而影响细胞迁移。现用PTEN表达质粒转染SMMC 772 1肝癌细胞 ,研究SMMC 772 1细胞运动能力的变化及PTEN与粘着斑激酶 (FAK)酪氨酸磷酸化水平之间的关系。PTEN过表达能够显著抑制细胞在Fn基质上的活动 :细胞在Fn基质上的迁移下降了 35 % ;在 30min和 6 0min两个时间点 ,Fn基质上细胞铺展分别降低了 2 9%和 2 6 % ;而在多聚赖氨酸基质上细胞铺展并没有变化。运用免疫沉淀和Western印迹方法 ,分析FAK及其酪氨酸磷酸化水平 ,发现PTEN过表达不影响FAK表达 ,但显著降低Fn诱导的FAK酪氨酸磷酸化水平 ,两者水平呈负相关。流式细胞仪分析细胞周期结果表明 ,PTEN抑制细胞 ,S期细胞下降了 16 %。上述结果提示 ,PTEN抑制肝癌细胞迁移铺展和增殖 ;PTEN对细胞运动的影响可能通过调节FAK酪氨酸磷酸化水平而实现。     

微载体上依赖于整合蛋白α2亚基的细胞与细胞外基质的粘附(英文)

Ｖｅｒｏ细胞是肾上皮细胞,合成并分泌层粘连蛋白和ＩＶ型胶原,从而在细胞外形成对细胞生长、迁移等有重要影响的细胞外基质膜。已知影响细胞与细胞外基质相互作用的蛋白质分子是整合蛋白。微载体所提供的三维立体培养条件与细胞在体内的生长、迁移条件相似,为在体外研究体内类似过程提供了很好的模型。通过蛋白质印迹法可以检测到：正常培养条件下,在微载体上培养４８小时,Ｖｅｒｏ细胞表达整合蛋白α２亚基（Ｆｉｇ．１ａ）;如果同时加入层粘连蛋白,α２亚基的表达量显著提高（Ｆｉｇ．１ｂ）。正常培养条件下,培养１０天,Ｖｅｒｏ细胞在微载体上形成密集的多层生长,α２亚基表达量明显高于培养初期（Ｆｉｇ．１ｃ）。间接免疫荧光标记（Ｆｉｇ．２）和免疫电镜观察（Ｆｉｇ．３）证实：在层粘连蛋白作用下,α２亚基大量表达,并定位于细胞“附着斑”位置的细胞膜上。此时,如果再用抗层粘连蛋白抗体处理,可观察到原“附着斑”消失,α２亚基在细胞内呈散布状（Ｆｉｇ．４）。整合蛋白α２亚基的表达和与层粘连蛋白形成的“附着斑”提供了Ｖｅｒｏ细胞在微载体上附着和迁移的基础。可能,不同的细胞外基质可以通过不同的整合蛋白来调节细胞活动。     

微载体上依赖于整全蛋白α2亚基的细胞与细胞外基质的粘附

Vero细胞是肾上皮细胞,合成并分泌层粘连蛋白和IV型胶原,从而在细胞外形成对细胞生长、迁移等有重要影响的细胞外其质膜。已知影响细胞与细胞外基质相互作用的蛋白质分子是整合蛋白。微载体所提供的三维立体培养条件与细胞在体内的生长、迁移条件相似,为在体外研究体内类似过程提供了很好的模型。通过蛋白质印迹法可以检测到：正常培养条件下,在微载体上培养48小时,Vero细胞表达整合蛋白α2亚基（Fig.la);如果同时加入层粘蛋白,α亚基的表达量显著提高（Fig.1b)。正常培养条件下,培养10天,Vero细胞在微载体上形成密集的多层生长,α2亚基表达量明显高于培养初期（Fig.1c)。间接免疫荧光标记（Fig.2)和免疫电镜观察（Fig.3）证实：在层粘连蛋白作用下,α2亚基大量表达,并定位于细胞“附着班”位置的细胞膜上。此时,如果再用抗层粘蛋白抗体处理,可观察到原“附着斑”消失,α2亚基在细胞内呈散布状（Fig.4)。整合蛋白α2亚基的表达和与层粘连蛋白的“附着斑”提供了Vero细胞在微载体上附着和迁移的基础。可能,不同的细胞外基质可以通过不同的整合蛋白来调节细胞活动。     

骨髓基质干细胞向心肌细胞诱导分化的实验研究

目的探讨大鼠骨髓基质干细胞在体外和体内向心肌细胞诱导分化的能力,为下一步的细胞移植治疗心肌梗死提供实验基础.方法体外诱导实验中,将不同浓度的5-氮胞苷作用于不同培养时间的骨髓基质干细胞,摸索5-氮胞苷的最佳诱导时机和浓度,观察诱导后细胞形态变化,并用免疫细胞化学染色检测心肌特异性肌钙蛋白T的表达;在体内实验中,培养扩增的骨髓基质干细胞经BrdU标记后,自体移植于正常心肌内,分别通过BrdU和心肌特异性肌钙蛋白T免疫组织化学染色检测移植细胞的存活和分化情况.结果体外诱导实验中,5-氮胞苷的诱导作用以10μmol/L的浓度对传代细胞进行两次诱导,效果最好,不仅能诱导出表达心肌特异蛋白的心肌样细胞,而且这些细胞在体外能够自发搏动.体内诱导实验中,移植的细胞在正常心肌微环境中能够存活并分化为心肌细胞.结论骨髓基质干细胞在体外化学诱导和体内心肌微环境诱导时均能分化为心肌细胞,可用于细胞移植治疗心肌梗死的实验.     

小鼠前成骨细胞MC3T3-E1在自组装多肽水凝胶支架中的成骨分化

目的研究MC3T3-E1细胞在自组装多肽水凝胶支架上的生长和成骨分化.方法在多肽水凝胶支架RADA16上接种MC3T3-E1细胞,荧光染色观察细胞形态和存活情况;组织化学染色检测MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性以及细胞外钙质沉积;RT-PCR分析成骨特异性基因的表达.结果 MC3T3-E1细胞在水凝胶支架RADA16上粘附铺展良好,呈纺锤样形态.诱导培养后支架上的细胞有较高水平的碱性磷酸酶表达和矿化基质沉积.此外,骨分化特异性基因骨桥蛋白和骨涎蛋白也有表达,且表达量随培养时间的延长而增多.结论 在自组装水凝胶内MC3T3-E1细胞可向成骨方向分化,并能在凝胶内产生矿化的细胞外基质.     

心室重构中的心肌细胞凋亡

心力衰竭的最重要的特征是民结构和功能改变而引起的心室重构,这不仅与细胞肥大,蛋白合成及细胞外基质增多有关,而且还涉及到心肌细胞凋亡,并且认为心肌细胞凋亡可能是心肌功能进行性恶化的重要机制之一。     

胎儿纤维连接蛋白与自发性早产预测的研究进展

早产是围生儿死亡和患病的重要原因之一,有效的风险评估可以降低潜在的早产发生风险。胎儿纤维连接蛋白(fetal fibronectin,f FN)是一种细胞外基质的糖蛋白,在胎盘植入、胎盘子宫的细胞黏附、正常妊娠的维持等方面均起重要作用。研究表明,多种产科情况都可导致f FN的异常,临床上通过对孕妇的宫颈阴道分泌物、血浆、羊水中的f FN进行检测,能够预测分娩时间、评估引产的困难程度和胎膜早破发生早产的风险。目前,f FN的测定主要是采取ELISA快速测定方法。本文主要对f FN与早产预测的研究进展进行了综述,其中对f FN的来源以及f FN测试单独或联合宫颈超声预测自发性早产的临床价值作了重点阐述。