兔子子宫内膜雌激素受体的超离心分析

用蔗糖密度梯度超离心技术分析了兔子子宫内膜胞质液无配基ER和激素受体复合物。在低离子强度和高盐浓度条件下ER的沉降行为主要表现为8S和4S的分子。对不同实验条件下受体的稳定性进行了比较,无配基ER在低离子强度介质中易聚合成比8S更大的分子。胞质液中E_2的存在有利于受体稳定,超离心后可用[~3H]E_2交换,DCC法测定,结果与传统的超离心法一致。     

雌激素膜受体介导的非基因组效应

雌激素受体（estrogen receptor,ER）是固醇类激素受体蛋白超家族的成员之一,分布于许多组织,介导了大部分已知的雌激素效应.ER主要定位于胞质中,但是近些年的研究发现在部分组织的细胞膜上也存在雌激素受体,称为“膜受体（mER）”.ER在其配体雌二醇（E2）的诱导下,可以通过“基因组”和“非基因组”两种方式介导大部分的生理效应,胞质中的ER可与DNA反应元件直接作用产生基因组效应,而mER主要通过信号分子介导雌激素的非基因组效应.该文介绍ER的结构、ER介导的非基因组效应的生理功能以及前景展望.     

鸡输卵管胞液中雌激素受体的性质研究

以乙酚(DES)刺激未成年的雌鸡,输卵管增长到0.6到1.0克,胞液中含有的雌激素受体为0.082微微克分子/毫克蛋白,此种受体表现有以下的特性。 1.专一地结合雌性激素。以雌二醇作配基时平衡解离常数是0.25×10~(-9)M~(-1);在输卵管胞液中该受体的结合位点是1356/细胞。 2.硫酸铵沉淀胞液中的雌激素受体已转变成为团聚状态,如在硫酸铵沉淀的过程中有钼酸钠存在则能明显地减少团聚,因此钼酸钠有防止胞液中受体团聚的作用。 3.胞液中雌激素受体进行DEAE—葡聚糖凝胶柱层析,不论有或无钼酸钠存在,均表现为一个单一的峰。     

芳香烃受体内源性配基的研究进展

芳香烃受体(AhR)是一类存在于胞质中且通常情况下无活性,与其相应内源性配基结合后能够转移到细胞核使基因转录发生改变的碱性的螺旋-环-螺旋转录因子家族中的一个主要成员,参与机体的免疫抑制,免疫耐受以及免疫反应等;目前许多芳香烃受体介导的免疫调节机制已经被发现,其在抑制肿瘤的发生发展及炎症反应等方面有着重要的生物学功能。因此深入探讨芳香烃受体被内源性配基激活后的分子机制及其在肿瘤治疗与抗炎反应中的调控作用具有重要意义。本文介绍了芳香烃受体内源性配基的种类、功能与临床应用,并对其未来的研究前景进行了展望。     

试论用17荧光雌酮测定雌激素受体和生化法的关系

本文对采用细胞化学法测定乳腺癌内雌激素受体[ER]所用的荧光配体17-FE是否也是与ER上结合位点相结合的问题进行了探讨。在测定17-FE对[~3H]E_2与兔子宫上清液内ER结合的影响后,指出:17-FE对[~3H]E_2与ER的结合具有抑制作用,且其抑制作用随着17-FE浓度的提高而加大。在一系列不同浓度[~3H]E_2下测定其与ER的特异结合,同时测定加入不同浓度17-FE后的特异结合量,以Lineweaver-Burk和Scate-bard法分别作图。分析结果均显示为竞争性抑制曲线,可见17-FE和[~3H]E_2一样是与兔子宫上清液内ER上的结合位点相结合的。因此采用细胞化学法测定ER时,17-FE是一理想的配体。     

比格犬卵巢子宫内雌激素受体ERα、ERβ的免疫组织化学定位

目的研究雌激素受体α,β在比格犬卵巢及子宫内的定位。方法采用免疫组化SP法DAB显色结合BCIP/NBT及AEC显色检测ERα、ERβ在比格犬子宫及卵巢内的表达。结果比格犬ERα主要表达于卵泡颗粒细胞、卵巢间质腺腺上皮细胞及子宫内膜腺体腺上皮细胞胞核内,胞质内仅有少量表达,而在卵泡膜内膜的间质细胞,腺体周围的基质细胞及小动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞、小静脉内皮细胞的胞核内有少量表达。而ERβ则以相同的组织特异性主要表达于上述组织细胞的胞质内,在胞核内有微弱表达。ERα表达于膜黄体细胞的胞核内,而在黄体颗粒细胞胞核与胞质内均有表达。而ERβ则仍特异表达于不同生理阶段黄体细胞的胞质内。BCIP/NBT与AEC双染未见ERα、ERβ在子宫内有明显的共表达现象。结论比格犬ERα、ERβ在子宫与卵巢组织内定位不同,ERα主要定位于胞核,在胞质内有微弱表达,而ERβ主要定位于胞质,在胞核内有零星表达。     

大鼠骨骼肌组织雄激素受体结合容量测定方法

目的 :以3H testosterone(T)为配基 ,测定大鼠骨骼肌胞浆中的雄激素受体结合容量。方法 :测定温度为 4℃ ,同位素配基的饱和浓度为 5 0 pmol/ml;肌组织以 4倍 (重量 /体积 )缓冲液稀释 ,0～ 4℃温度下 10 80 0 0×g离心 1h ;孵育 18～ 2 4h。结果 :骨骼肌中雄激素受体的Kd =2 ,8× 10 9mol/ml。单点法与多点法之间无显著区别。     

脊椎动物雌激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控及其与蜕皮激素受体相互作用的MST分析

【目的】雌激素雌二醇(E_2)在脊椎动物中通过雌激素受体(ER)调节脊椎动物的生长发育和繁殖。昆虫中并没有ER,但有研究显示某些昆虫能对E_2产生一定的应答。本研究在明确E_2能影响家蚕Bombyx mori卵黄原蛋白基因(BmVg)表达的前提下,分析其对这一基因表达的调控机制。【方法】取BmVg高量表达时的家蚕雌性幼虫(上蔟后60 h)脂肪体,用不同浓度(0.001,0.05,0.5,5和50 nmol/L)E_2处理后,通过qRT-PCR检测BmVg表达的变化,分析家蚕对E_2的应答;克隆家蚕蜕皮激素受体基因(BmEcRB1),构建原核表达载体,表达并纯化BmEcRB1蛋白后与E_2体外孵育,通过微量热泳动仪(MST)分析E_2与BmEcRB1的结合情况。【结果】不同浓度E_2均显著抑制离体培养的雌蚕脂肪体中BmVg基因的表达。MST实验证实,E_2与BmEcRB1具有一定的亲和力,解离常数(Kd)为77.8±22μmol/L。【结论】结果说明,E_2对BmVg表达的影响是通过与蜕皮激素(20E)竞争性结合BmEcRB1实现的。     

膜受体的生命周期

受体是一种动态蛋白体,它在高尔基氏器合成后被运送至细胞膜,其中一些胞膜上的受体与配基结合后可在膜上移动,群集在裹衣凹陷,并在此胞内化;另一些受体本来就在裹衣凹陷,当它与配基结合后,便引起配基-受体复合体的胞内化。胞内化的受体可再循环回细胞膜。某些胞内化的受体还可作为一种激酶被激活而产生第二层次的细胞效应。当受体的“出现”与“消失”失去平衡时,将导致细胞功能紊乱。     

黑曲霉病毒的形态和特性及其在细胞内的表现

从产生糖化酶的黑曲霉(Aspergillus niger)菌株中分离到一种等轴对称、衣壳表面有突起、内含双链RNA的病毒颗粒。病毒颗柱在电镜下直径为28—33nm,呈六面体晶格排列。病毒在蔗糖密度梯度离心中有三个分部,分析超离心所得沉降系数为161S,118S和94S。病毒在凝胶电泳中为一条带,在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中外壳蛋白分子量为90,000、82,000、76,000、52,0000、42,000 道尔顿。提取的病毒与其抗血清在免疫双扩散实验中出现一条沉淀线。病毒核酸有5个组分,与聚肌苷：聚胞苷[poly(1)：poly?]抗血清反应中出现一条沉淀线。在早期菌丝细胞超薄切片中,病毒颗粒多近似球状紧密聚集,外被以膜结构,聚生或散生于胞质中;后期菌丝细胞中病毒颗粒则多散生于胞质中。     

不同疗法对去卵巢大鼠子宫ERα和ERRα蛋白表达的影响

目的:本研究旨在对比观察全身垂直振动、跑台运动、金雀异黄酮和氯化锂等不同干预疗法对去卵巢骨质疏松大鼠子宫雌激素受体α(ERα)和雌激素受体相关受体α(ERRα)蛋白表达的影响。方法:将80只3月龄雌性SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组和去卵巢组。去卵巢10周时,将去卵巢组大鼠按体重分层后又随机分为去卵巢组、振动组、跑台组、金雀异黄酮组、氯化锂组和雌激素组,并开始进行不同的干预处理。干预处理8周时,腹主动脉取血处死各组大鼠,用放射免疫方法检测血清E_2水平,用Western blot检测子宫ERα和ERRα蛋白表达水平的变化。结果:大鼠去卵巢后,血清E_2水平显著下降,经雌激素处理后,血清E_2水平显著回升,但经其他几种方法处理后均无显著变化。Western blot结果显示,大鼠去卵巢后,子宫ERα蛋白表达水平显著增加,经雌激素、跑台运动、全身垂直振动和氯化锂处理后,子宫ERα蛋白表达水平显著下降,而经金雀异黄酮处理后,子宫ERα蛋白表达水平无显著变化。大鼠去卵巢后,子宫ERRα蛋白表达水平显著下降,经雌激素和金雀异黄酮干预后,子宫ERR-α表达水平显著增加,而经跑台运动、全身振动和氯化锂干预后,子宫ERR-α表达水平却显著下降。结论:跑台运动和全身垂直振动能抑制去卵巢骨质疏松大鼠子宫ERα和ERRα蛋白的表达,氯化锂能抑制ERα蛋白的表达,但促进ERRα蛋白的表达,金雀异黄酮能促进ERRα蛋白的表达,但对ERα蛋白的表达没有影响。     

蟾蜍心肌肾上腺素能受体的类型和含量

用放射配基结合分析法,研究了不同温度条件下蟾蜍心脏各部位肾上腺素能受体的类型和含量。结果表明,常温蟾蜍心肌膜在37℃同β-受体的特异性标记配基~3H-双氢心得舒(~3H-DHA)的最大结合(B_(max))及Kd值分别为:全心,55.11±6.22fmol/mg蛋白及2.15±0.42nmol/L;窦房,55.80±7.03fmol/mg蛋白及2.65±0.37 nmol/L;心室,54.27±3.06 fmol/mg蛋白及1.84±0.14 nmol/L,同样温度条件下,窦房及心室心肌膜同α-受体的特异性标记配基~3H-双氢麦角隐亭(~3H-DHE)没有特异性结合,经过5—8℃,10d以上低温服习的蟾蜍,在10℃测试,其α-,β-受体的结合量和亲和力无异于常温蟾蜍。上述结果提示,蟾蜍心肌只有β-受体,温度对受体的类型和含量无明显影响,这种受体类型和含量在相当大的温度范围内保持不变。     

无蹼壁虎心脏雌激素受体免疫组织化学研究

目的：观察雌激素受体（ERα和ERβ）在非繁殖期成年无蹼壁虎（Gekko swinhonis）心脏的表达并比较性别差异。方法：应用显示雌激素受体的免疫组织化学方法。结果：ERα和ERβ阳性反应均见于无蹼壁虎心肌细胞和成纤维细胞,且受体的表达无性别差异;ERα表达存在明显的心房（11．56±1．67）心室（6．68±1．88）差异（P〈0．01）。结论：雌激素可能是通过ERα主要作用于心房,通过ERβ调节整个心脏的机能;雌激素受体含量与性别无关,可能与生理条件下受体的活性及功能状态有关。     

配基理性设计技术及其应用进展

配基是指能与受体发生特异性结合的分子,其中配基与受体的结合部位称为受体腔;某些配基与生物大分子的特定位置结合后,可导致整个分子构象改变从而产生或抑制其生理活性,该结合部位称为活性位点.配基一般通过多种作用力类型(如范德华相互作用、静电相互作用、氢键和疏水相互作用等)与受体特异性结合.早期配基的发现和设计主要基于经验和感性认识,近年来随着计算机软硬件技术的飞速发展,配基理性设计技术得到了广泛应用.     

大鼠大脑皮层中钙调神经磷酸酶活力的时空变化

以ＰＮＰＰ为底物测定了超离心制备的大鼠出生后早期和成年大脑皮层亚细胞各组分中钙调神经磷酸酶的活力,实验结果表明：（１）钙调神经磷酸酶活力广泛地存在于胞液和突触部分,并且各亚细胞组分有明显差异,成年大鼠大脑皮层中ＣａＮ活力相对最高水平是在突触体,突触质,胞液,重的和轻的突触膜部分。（２）大鼠大脑皮层突触体中ＣａＮ活力在出生后第２周和第３周出现高峰的平台期,这与突触发生的高峰期是一致的,在胞液和重的突     

人白介素6受体结合功能域的构效关系研究

以分子对接（docking）方法研究人白介素6受体胞外区配基结合功能域“WSXWS”区氨基酸残基定点突变对受体与配基人白介素6结合时的相互作用能量、分子间相互作用的影响,从分子力学、分子动态学分析了人白介素6受体胞外区功能域关键氨基酸残基在受体与配基结合中的构象变化以及与人白介素6间的相互作用.     

糖皮质激素受体交换测定方法的改进

本文改进了内源性糖皮质激素存在条件下,胞液糖皮质激素受体(GCR)总量的检测方法,在钼酸钠和巯基乙醇保护下,采用25℃30min的条件使和GCR结合的糖皮质激素和[ ³H]地塞米松交换。实验结果表明,在此条件下,GCR活性不变,交换率达94.9±4.2%(皮质酮100_nM浓度下),受体亲和力不变。本法适用于生理和病理条件下,特别是血浆糖皮质激素高浓度时的胞液GCR的检测。     

蛋白质多肽激素生物发光配基-受体结合测定新方法

蛋白质多肽激素是一大类内源信号分子,通过激活靶细胞膜上特定受体发挥重要调控功能。配基-受体结合测定是研究蛋白质多肽激素与受体相互作用的重要实验方法,但传统方法要使用放射性同位素(如碘-125),限制了该方法的广泛使用。我们在近期工作中利用超灵敏的Nano Luc荧光素酶建立了"生物发光配基-受体结合测定新方法"用于研究蛋白质多肽激素与受体的相互作用。该方法具有灵敏度高、重复性好、安全无害、操作简便等的优点,有望广泛用于蛋白质多肽激素与受体相互作用研究。     

雌激素浆受体制剂的保存

雌激素受体与雌激素结合,是雌激素产生生理功能的初始反应。但离体条件下,受体蛋白的性质很不稳定,因此对测定和纯化带来很多困难。文献报道将离体的牛或猪子宫直接浸于液氮,或再制成组织冻干粉,以及进一步制成胞液冻干粉,都能在一定时间内保存其中甾体激素受体的生物活性。本文比较了兔子宫胞液、胞液冻干粉以及经肝素琼脂糖部分纯化所得制剂的雌激素受体结合活力,获得了可使受体结合活力保持60天不变的实验条件。这为今后开展分离提纯和结构功能的研究提供了方便,同时有可能为临床测定雌激素受体提供质量控制的标准样品。     

类固醇激素受体复合物的装配与核内转运

类固醇激素受体 (ＳＲ)包括糖皮质激素受体 (ＧＲ)、孕激素受体 (ＰＲ)、雌激素受体(ＥＲ)、雄激素受体 (ＡＲ)等 ,其中以前两者的研究较多。ＳＲ主要存在于类固醇激素的靶细胞胞质和胞核中 ,当细胞外液中类固醇激素通过细胞膜进入胞质后 ,它能与胞质中ＳＲ结合 ,通过胞质和胞核中ＳＲ的穿梭 ,从而调节核基因组相关产物的转录、翻译及分泌一些生物活性物质 ,以发挥类固醇激素的作用。ＳＲ在细胞内有游离形式和复合物形式 ,而且存在几种不同的复合物形式 ,它们是怎样形成以及形成后如何转运到核内的 ?本文将对此作一综述。1 .ＳＲ复合物的组…