人血小板生成素的研究进展

血小板生成素是新近发现的一个非常重要的造血调控因子。经过40多年的不懈努力,基本上阐明了血小板生成素及其受体系统（TPO/c-Mpl)在造血调控方面的作用。并在此基础上,研制了重组血小板生成素,以治疗放疗和化疗引发的血小板减少症,本综述了近年TPO及其受体c-Mpl系统对造血调控的研究进展,涉及TPO和c-Mpl的基因和蛋白分子结构。基因表达调控、可能经历的信号传导途径、TPO/c-Mpl系统主要的生理作用、TPO在血液循环中的代谢过程以及目前重组血小板生成素的临床研究现状等六个方面。深入理解TPO/c-Mpl系统的结构和作用。将加深人们对机体的造血调控和血液病的认识,并将有助于相关疾病的临床治疗。     

血小板生成素及其研究进展

血小板生成素(TPO)是最近被描述的一种新型细胞因子,相对分子质量在35×10³以上,是一种糖蛋白.人和鼠TPO成熟蛋白分别由332和335个氨基酸残基组成.TPO的受体与造血生长因子受体超家族成员c-Mpl相关.TPO不仅对巨核系祖细胞的增殖、分化具有明显的调控作用,而巨对血小板的生成同样具有促进作用.     

用酵母双杂合系统筛选与人血小板生成素受体c-Mpl相互作用的蛋白质

血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体c-Mpl介导.利用酵母双杂合系统(two-hybrid system)筛选与c-Mpl相互作用的蛋白质因子.首先将c-Mpl膜内部分cDNA克隆至pAS2双杂合载体中,重组质粒命名为pASMM;然后以pASMM为靶蛋白质粒,筛选了人胎盘cDNA文库.在1.5×106个转化子中筛选到7个阳性克隆.序列测定表明,分离到编码人波形纤维蛋白(vimentin)的第611 bp至C末端的cDNA顺序(包括3'非翻译区),从而发现波形纤维蛋白可与TPO受体相互作用,这提示细胞骨架蛋白在TPO的信号转导过程中可能起着重要的作用.     

血小板生成素研究进展

血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是近几年发现的一种造血生长因子,其功能是促进巨核细胞的发育成熟,调节血液中血小板的水平。由于它在临床上纠正较难对付的血小板减少症方面具有较好的应用前景,短短两年时间其开发研究已进入了Ⅰ/Ⅱ期临床试验,据称初步结果比较乐观;在理论研究方面,TPO基因的克隆大大丰富了人们对巨核细胞发育过程和调控机制的认识,出现了大量相关文献。本文根据最新文献,综述人们在有关TPO的表达调控、信号转导、生物活性、临床应用等方面的认识。     

TPO的分子生物学研究进展

本文综述了人TPO的基因结构及表达、TPO的结构与功能的关系、TPO与其受体相互作用及信号传导等方面的研究进展。TPO基因和蛋白均存在有多态性,可能与基因的剪接方式有关。N端结构域的氨基酸有很高的保守性,含有两个与TPO受体结合的位点,这两个位点同时作用于两个TPO受体,使受体形成二聚体,受体胞内区的酪氨酸或丝氨酸的磷酸化,激活胞膜内G蛋白信号系统,从而激活其后的一系列信号传导。两对二硫键Cys^7-Cys^151和Cys^29-Cys^85对保证N端功能域的形成起重要作用。TPO的C端结构域氨基酸变异较大,富含丝氨酸、苏氨酸和脯氨酸,C端的功能为：调节TPO特异活性;调控TPO的循环半衰期;促进TPO生物合成和分泌。     

巨核细胞生成调控相关细胞因子及其作用研究进展

造血干细胞分化生成巨核细胞是一个十分复杂的过程,包括造血干细胞动员及其向巨核系祖细胞分化,巨核系祖细胞增殖、分化生成未成熟巨核细胞,巨核细胞的成熟和血小板释放等过程。研究发现,造血干细胞动员及其向各系细胞分化的大部分过程都在一种称为"龛"的结构中进行,多种龛内信号分子参与了造血干细胞的动员和分化调控。该文对造血干细胞龛内参与造血干细胞动员和分化生成巨核细胞的几种重要细胞因子及其调控作用进行综述。     

血小板生成素功能区段基因的克隆与表达

血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是由巨核细胞产生的一种细胞因子,早期认为它在血小板生成晚期发挥作用。1994年TPOcDNA克隆成功,从而使得对血小板生成素的研究更加深入。TPO cDNA全长1774 bp,其中编码区为1059 bp,编码353个氨基酸,从其结构上看,它可以分为N端区和C端区两部分,其N端区与EPO同源性较高,称为EPO样结构区(EPO-like domain),而且仅此结构区即具有完整TPO分子的功能。TPO与EPO不但在     

血小板缺陷型动物血浆的制备

血小板减少症至今尚无特效约。肿瘤患者在接受放疗、化疗后往往由于血小板过低而中断治疗;骨髓患者也常常出现同样问题。巨核细胞的血小板生成受多方面因素的控制。其中血小板生成素(Thrombopoietm,TPO)是调节巨核细胞成熟,促进血小板生成的重要因子,是治疗血小板减少症的一种很好的潜在药。目前。国外重组TPO(rTPO)已进入临床试验阶段,国内未见报道。为配合rTPO的研究,特制备血小板缺陷型血浆。血小板最低值时。血浆TPO活性最高。文献已报道了用抗血小板抗体或用~(137)Csγ射线照射引起动物血小板减少的方法。我们采用~(60)Coγ射线照射引起动物血小板缺陷以刺激TPO的产生,进而制备有促进血小板增生活性的血浆即TPO。     

中国人血小板生成素cDNA的克隆及测序

调控血小板生成的血小板生成素(Thrombopoi-erin,TPO)基因序列最近被阐明,这为人们了解血小板的发育调节打开了缺口,同时也为临床治疗血小板贫血提供了一种极有潜力的候选蛋白因子。为了研究TPO的结构与功能的关系,探索其体外高效表达的途径,同比较不同人种TPO cDNA序列的多态性,我们参照文献发表的西方人TPO cDNA序列,用聚合酶     

IL－6受体结构与功能的研究进展

IL-6是一个多功能的细胞因子,其生物学作用在很大程度上受IL-6受体(IL-6R)结构和功能的影响.IL-6R由两条多肽链组成,即配体结合链gp80和信号传导链gp130.它们在结构和功能上既有分工又有合作.两种亚基组成的高亲和力IL-6R是介导细胞效应所必需的.IL-6Rα中的造血功能区属于造血因子受体超家族成员,它决定着结合IL-6的能力.然而gp130则是多种细胞因子共用的信号传递分子,其胞内段含有与酪氨酸激酶活化有关的保守成分.IL-6+IL-6R复合物通过诱导gp130的聚合来活化胞内的多种激酶分子和转录因子并最终导致有关基因的表达.     

人胚胎干细胞高效分化为巨核细胞模型的建立

人胚胎干细胞具有无限增殖潜能,且能够分化为包括巨核细胞在内的大多数的成熟血细胞。因此,为解决临床治疗血小板来源不足而建立一种由人胚胎干细胞高效分化获得成熟巨核细胞的分化模型具有重要应用前景。该文利用人胚胎干细胞与m AGM-S3基质细胞系共培养进行早期造血前体细胞的定向分化,并在分化第14 d获得大量"卵石样"造血前体细胞(CD43+细胞、CD45+细胞)。将"卵石样"造血前体细胞分离后,用无血清培养基分阶段添加SCF、TPO、IL-6、IL-3、FLt-3、IL-11等细胞因子进行巨核细胞定向诱导分化。结果显示,在分化的第3 d,CD41a+细胞比例可高达48.5%,CD42b+细胞比例可高达30.0%。对分化第6 d的细胞进行Wright-Giemsa染色,可见形态典型的巨核细胞。综上所述,该研究初步建立了一种人胚胎干细胞高效分化为巨核细胞的模型,为体外获得大量巨核细胞奠定了基础。     

巨核细胞系统生成的调控

巨核系是髓系造血的一部分,来自造血干细胞的巨核祖细胞,经增殖分化成为成熟的巨核细胞,最后生成血小板。巨核集落刺激因子主要作用于巨核祖细胞,使其增殖分化,并在体外增加巨核集落生成率。血小板生成索是肾脏等器官产生的糖蛋白,其血中含量受血小板数反馈调节,它的主要作用是促进巨核细胞DNA 合成、胞浆成熟和血小板生成。     

无巨核细胞条件下促血小板生成素对骨髓基质细胞纤维形成的影响

目的：观察无巨核细胞存在的条件下促血小板生成素能否刺激骨髓基质细胞纤维形成。方法：用改良Dexter培养法进行体外不同浓度促血小板生成素（TPO）作用下的基质细胞培养,在培养过程中检测基质细胞相对增殖指数,纤维连接蛋白、层粘素和Ⅳ型胶原的表达,以及Ⅲ型前胶原蛋白的合成。结果：TPO可刺激基质细胞增殖,相对增殖指数随TPO浓度增加而增强,但不随作用时间延长而增强;纤维连接素、层粘素和Ⅳ型胶原在对照组与实验组均有阳性表达,但实验组强于对照组,但阳性强度不随培养时间的延长而增强;标记的Ⅲ型前胶原蛋白平均荧光强度实验组高于对照组,差异明显,但这种作用的强弱与TPO浓度相关性不强。结论：无巨核细胞存在的条件下,TPO可直接刺激骨髓基质细胞产生细胞外基质和胶原,促进其纤维形成。     

人EEN蛋白的结构预测和功能分析

采用基于神经网络的算法预测了我们自行克隆的新的白血病相关蛋白ＥＥＮ（ｅｘｔｒａ ｅｌｅｖｅｎｎｉｎｅｔｅｅｎ, ＥＥＮ）全长分子的二级结构,结果表明：ＥＥＮ 蛋白可能有三个结构域,Ｎ 端由三段α螺旋和短β折叠组成,中间为四段α螺旋组成的四螺旋结构,Ｃ端为ＳＨ３结构域,类似于在受体酪氨酸激酶信号传导途径中起重要作用的ＳＥＭ－５／ＧＲＢ２ Ｃ端ＳＨ３结构域;利用同源蛋白结构模拟的方法,模拟了ＥＥＮ ＳＨ３结构域的三维结构,结果表明：ＥＥＮ ＳＨ３结构域与ＳＥＭ－５／ＧＲＢ２ ＳＨ３结构域具有相近的结构,构成脯氨酸结合区的氨基酸非常保守．上述结果提示：ＥＥＮ 蛋白可能为新的信号蛋白,可能涉及新的信号传导途径或新的信号传导旁路,ＳＨ３结构域是其功能区域．     

S-亚硝基谷胱甘肽诱导脐带血CD34+细胞来源的巨核细胞产生血小板

为了探讨一氧化氮供体S-亚硝基谷胱甘肽（S—nitrosoglutathione,GSNO）对脐带血CD34^＋细胞分化来源的巨三核细胞产生血小板的可能作用,我们采用免疫磁珠法从8例健康产妇足月顺产的胎儿脐带血中分选CD34^＋细胞,并在含血小板生成素（thrombopoietin,TPO,50ng／ml）、白细胞介素-3（IL-3,10ng／ml）、干细胞因子（stem cell factor,SCF,50ng／ml）和重组人粒-巨噬细胞刺激因子（rHu GM—CSF,20ng／ml）的无血清培养基中培养14d。随后,用免疫磁珠法分选CD61^＋细胞。CD61^＋细胞在含有（实验组）和缺乏（对照组）GSNO（20mg／ml）的无血清培养基[含TPO（50ng／ml）、IL-3（10ng／ml）、SCF（50ng／ml）]中培养不同时间（30min、2h）。采用流式细胞仪检测培养体系中的血小板数;电子显微镜观察巨核细胞的形态学;倒置显微镜和流式细胞仪观察凝血酶诱导的血小板凝集;ELISA方法检测巨核细胞中cGMP的含量。结果显示,与对照组比较,实验组血小板数量明显增加（P〈0．05）;电子显微镜下可见巨核细胞有明显伪足形成和突出;凝血酶诱导后在倒置显微镜和流式细胞仪上均可观察到血小板凝集现象;GSNO作用后巨核细胞中的cGMP明显升高（P〈0．05）。这些结果提示,GSNO可以促进脐带血CD34^＋细胞来源的巨核细胞产生具有一定功能的血小板,其产生的机制可能部分与cGMP途径有关。     

转化生长因子—β超家族成员的信号传导通路

转化生长因子-β超家族是在无脊椎动物和脊椎动物中高度保守的一类细胞因子,其家族成员参与调节细胞的增殖、凋亡、分化和发育等多种生命活动。具有丝氨酸／苏氨酸激酶活性的Ⅰ型受体和Ⅱ型受体共同介导了转化生长因子-β超家族成员的跨膜信号传导。新近克隆鉴定的Smad蛋白家族负责将信号由细胞膜传导到细胞核。Smad介导的信号传导通路同其他信号传导通路之间存在相互调节。转化生长因子-β超家族的信号传导通路异常与肿瘤的发生有密切关系。     

SDF-1/CXCR4在肿瘤信号转导中作用的分子机制

CXC趋化因子受体4(CXCR4)是最主要的趋化因子受体之一,在多种类型细胞中均有表达,包括淋巴细胞、造血干细胞、内皮细胞和肿瘤细胞。CXCR4与其配体——基质细胞衍生因子1(SDF-1)(也称CXCL12)结合,能介导多种与细胞趋化、细胞存活或增殖相关信号传导通路。CXCR4与SDF-1轴涉及肿瘤的恶性演进、血管生成、转移和存活。因此,阻断CXCR4与SDF-1轴及下游信号通路成为相关治疗的分子靶标。     

Arrestins家族：一类在G蛋白偶联受体的信号传导中起关键作用的蛋白质

对Arrestins家族的研究是当今生物学中信号传导研究领域的热点之一。Arrestins可以作用于G蛋白偶联受体，使受体与下游的G蛋白解偶联；并充当受体与笼形蛋白的接头，促进衣被蛋白介导的受体内吞；在受体内吞过程中，Arrestins、受体和c-Src激酶共同起始MAPK信号传导途径。本综述概括了近年来Arrestins研究的最新进展，包括其分类、主要蛋白功能结构域、基因定位和在G蛋白偶联受体信号传导中的地位与作用。     

Ras蛋白与信号传导

Ｒａｓ介导的信号传导途径是近几年研究热点之一,这是因为许多细胞受体介导的信号通路和Ｒａｓ途径相关。Ｒａｓ蛋白广泛存在生物界,在信号传导途径中起着极为重要的开关作用。ＰＴＫ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫＫ和ＭＡＰＫ通过复杂的蛋白与蛋白之间的相互作用以及蛋白质磷酸化,将外界信号传入细胞中从而对细胞生长产生影响。本文对Ｒａｓ介导的信号传导途径的最新研究近展进行综述。     

Notch信号通路与血液系统和白血病形成

Notch基因编码着一类进化上高度保守的跨膜受体蛋白家族,其信号通路是由Notch受体、Notch配体、CSL DNA结合蛋白组成。该信号通路能够调节淋巴细胞的发育和分化过程,介导心血管系统的形成,参与肿瘤的发生和发展。近年来有研究表明,Notch信号通路在造血作用及白血病的发生过程中起关键作用。本文综述了Notch信号通路在淋巴细胞及造血干细胞的发育和分化中的作用,进一步探讨了其对造血作用和白血病发生发展的调节,以期能够对临床造血疾病的治疗提供帮助。