他克莫司对大鼠重症急性胰腺炎和其相关的肺损伤的保护作用

目的:观察他克莫司(Tacrolimus)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠的潜在治疗作用并探究其机制.方法:健康雌性SD大鼠90只,随机分为对照组、SAP模型组、SAP Tacrolimus治疗组(0.5、1.0、1.5mg/kg),逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠制备SAP模型.观察肺组织及胰腺组织的病理变化,检测各组大鼠血清TNF-α及MMP-9表达、支气管肺泡灌洗液(BALD蛋白含量、胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)活性.结果:SAP组胰腺、肺组织病理损伤随病情进展而逐渐加重,经tacrolimus治疗后缓解.SAP大鼠组血清TNF-α及MMP-9表达、肺灌洗液(BALF)蛋白含量及胰腺组织MPO活性较对照显著升高(P＜0.01),但是经tacrolimus治疗后升高幅度呈非浓度依赖性的明显降低(P＜0.01),各组大鼠存活率提高(P＜0.01).结论:Tacrolimus可有效降低SAP大鼠急性重症胰腺炎的严重程度,其机制可能包括减少肺脏的毛细血管渗透性,抑制由TNF-α,MMP-9以及中性粒细胞(PMN)所释放的MPO等炎症介质产生的炎症反应.     

Martentoxin对TNF-α引起脐静脉内皮细胞释放一氧化氮的影响

目的：研究东亚钳蝎毒素Martentoxin对脐静脉内皮细胞释放NO的影响。方法：人脐带经胶原酶消化分离后获得脐静脉内皮细胞,经抗血管性血友病8因子鉴定后,用TNF-α建立NO释放模型,观察Martentoxin对脐静脉内皮细胞释放NO的影响。结果：①经6,12,24h作用后,10μM、100μM Martentoxin能降低TNF-α引起的NO释放增加（P〈0．05）。②Martentoxin降低TNF-α引起的iNOS活性增强并对TNF—α引起的内皮源性一氧化氮合酶mRNA下调具有一定保护作用（P〈0．05）。结论：Martentoxin抑制TNF-α引起的脐静脉内皮细胞释放NO增加。     

补肾活血方中单体成分的体外炎性抑制作用研究

本文采用LC-MS技术进行定性分析,确定补肾活血方水提液中存在芍药苷、阿魏酸、白藜芦醇、蛇床子素及补骨脂素等单体化合物。利用酶联免疫法(ELISA)测定试药对模型细胞释放TNF-α、IL-6及NO的抑制作用。与空白组比较,模型组TNF-α、IL-6、NO含量明显升高(P0.0);与模型组比较,阿魏酸、白藜芦醇、补骨脂素及复方水提部位在100μg/m L,以及蛇床子素在20、100μg/m L均对TNF-α的释放具有显著的抑制(P0.01);阿魏酸及补骨脂素在100μg/m L,白藜芦醇及蛇床子素在20、100μg/m L均对IL-6水平具有显著的抑制(P0.01);芍药苷及复方水提部位在100μg/m L,阿魏酸、白藜芦醇、蛇床子素及补骨脂素在20、100μg/m L均对NO的释放具有显著抑制(P0.01)。结果表明单体对炎性因子的释放抑制作用总体上强于复方水提部位,提示补肾活血方的治疗骨关节炎活性可能是通过抑制炎症介质释放,降低TNF-α、IL-6、NO等含量发挥作用,这对验证复方药效活性,探究效应物质基础具有重要意义。     

胎脑提取液对衰老小鼠肝细胞酶活性影响的实验研究

目的：观察胎脑提取液对衰老小鼠肝细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)和酸性磷酸酶(ACP)活性的影响,探讨胎脑提取液的抗衰老作用。方法：选用健康昆明种小白鼠30只,随机分为3组;采用D-半乳糖制备亚急性衰老模型;酶组织化学染色观察各组小鼠肝细胞SDH和ACP的活性。结果：衰老模型组与正常对照组相比,小鼠肝细胞SDH活性明显降低,ACP活性明显升高;给药组与衰老模型组相比,小鼠肝细胞SDH活性明显升高,ACP活性明显降低。结论：胎脑提取液可以延缓肝细胞的衰老进程,具有一定的抗衰老作用。     

褪黑素的抗胃癌效应及其对TNF-α、NO表达的调节作用

目的 探讨褪黑素(melatonin, MLT)在体内外对胃癌细胞增殖活性的影响及其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)表达的调节作用。方法 构建不同浓度褪黑素干预皮下荷胃癌小鼠模型。测量各组小鼠肿瘤质量、体积;胸腺、脾脏指数;HE染色观察肿瘤组织形态;分离各组小鼠腹水巨噬细胞并计数分析。ELISA和比色法检测外周血清及腹水巨噬细胞培养液TNF-α、NO表达水平。不同浓度褪黑素干预小鼠胃癌细胞(MFC)。CCK-8检测各组MFC细胞的增殖活力;ELISA和比色法检测各组细胞培养上清TNF-α、NO表达水平。结果 褪黑素干预后小鼠肿瘤质量、体积均显著下降,脾和胸腺指数无明显变化;相比对照组,褪黑素组外周血清和腹水巨噬细胞培养液TNF-α、NO表达水平均明显升高。褪黑素干预后MFC细胞增殖活力明显下降,呈剂量依赖性;同时,褪黑素组相比对照组MFC细胞上清NO表达降低,TNF-α表达升高。结论 褪黑素体内外均能抑制胃癌细胞增殖活性,该作用与TNF-α表达上调、NO表达水平改变有关;也与体内巨噬细胞分泌TNF-α、NO水平增强有关。     

Martentoxin 对TNF-α 引起脐静脉内皮细胞释放一氧化氮的影响

目的:研究东亚钳蝎毒素Martentoxin对脐静脉内皮细胞释放NO的影响。方法:人脐带经胶原酶消化分离后获得脐静脉内皮细胞,经抗血管性血友病8因子鉴定后,用TNF-α建立NO释放模型,观察Martentoxin对脐静脉内皮细胞释放NO的影响。结果:①经6,12,24h作用后,10μM、100μM Martentoxin能降低TNF-α引起的NO释放增加(P<0.05)。②Martentoxin降低TNF-α引起的iNOS活性增强并对TNF-α引起的内皮源性一氧化氮合酶mRNA下调具有一定保护作用(P<0.05)。结论:Martentoxin抑制TNF-α引起的脐静脉内皮细胞释放NO增加。     

神经肽CRH对原代大鼠皮层小胶质细胞NO、TNF-α和IL-6释放的影响

目的:探讨神经肽促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)参与调节原代大鼠皮层小胶质细胞的激活。方法:取原代大鼠皮层细胞,体外培养10 d,纯化24 h后得小胶质细胞,采用ELISA和NO测试盒检测小胶质细胞激活后促炎症介质一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的释放。结果:10-15mol/L CRH明显促进原代大鼠小胶质细胞的促炎症介质NO,TNF-α和IL-6的释放。CRHR1特异性拮抗剂CP154,526可以阻断CRH诱导的小胶质细胞促炎症反应。结论:神经肽CRH通过CRHR1调节原代大鼠小胶质细胞的促炎症反应,CRH联合细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)可以增强LPS诱导的小胶质细胞NO,TNF-α和IL-6的释放。     

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶对凋亡内皮细胞Bcl-2表达、Caspase-3及MAPK活性的影响

花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢产生的内皮来源超极化因子(EDHF)[表氧化二十烷烯酸(EETs)]对内皮细胞具有保护作用。研究了转染细胞色素P450表氧化酶基因CYPBM3·F87V、CYP2C11OR及CYP2J2产生内源性EETs,通过检测内皮细胞中Bcl-2表达、caspase-3的活性及MAPK磷酸化水平探讨内源性EDHF的内皮细胞保护效应及其抗TNF-α诱导内皮细胞凋亡的作用机制。原代培养的牛主动脉血管内皮细胞转染CYP450表氧化酶基因24h后,加入TNF-α作用一定时间诱导内皮细胞凋亡,用Western印迹方法检测Bcl-2的表达,MAPK磷酸化水平,同时测定caspase-3的活性。结果显示转染表氧化酶基因能抑制TNF-α诱导的时间依赖性Bcl-2下调,抑制Caspase-3的激活。TNF-α使细胞内磷酸化MAPK水平呈时间依赖性减低,转染表氧化酶基因后细胞内的磷酸化MAPK水平较对照组升高。因此,转染表氧化酶基因CYPBM3·F87V、CYP2C11OR以及CYP2J2使内皮细胞产生内源性EETs(EDHF)通过激活MAPK(ERK1/2)途径,抑制抗凋亡基因Bcl-2的降解,抑制caspase-3的激活,从而抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡,因而具有内皮保护效应。     

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶对凋亡内皮细胞Bc1-2表达、Caspase-3及MAPK活性的影响

花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢产生的内皮来源超极化因子(EDHF)[表氧化二十烷烯酸(EETs)]对内皮细胞具有保护作用.研究了转染细胞色素P450表氧化酶基因CYPBM3·F87V、CYP2C110R及CYP2J2产生内源性EETs,通过检测内皮细胞中Bc1-2表达、caspase-3的活性及MAPK磷酸化水平探讨内源性EDHF的内皮细胞保护效应及其抗TNF-α诱导内皮细胞凋亡的作用机制.原代培养的牛主动脉血管内皮细胞转染CYP450表氧化酶基因24h后,加入TNF-α作用一定时间诱导内皮细胞凋亡,用Western印迹方法检测Bcl-2的表达,MAPK磷酸化水平,同时测定caspase-3的活性.结果显示转染表氧化酶基因能抑制TNF-α诱导的时间依赖性Bcl-2下调,抑制Caspase-3的激活.TNF-α使细胞内磷酸化MAPK水平呈时间依赖性减低,转染表氧化酶基因后细胞内的磷酸化MAPK水平较对照组升高.因此,转染表氧化酶基因CYPBM3·F87V、CYP2C11OR以及CYP2J2使内皮细胞产生内源性EETs(EDHF)通过激活MAPK(ERK1/2)途径,抑制抗凋亡基因Bcl-2的降解,抑制caspase-3的激活,从而抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡,因而具有内皮保护效应.     

细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞(bovine aortic endothelial cells, BAECs)凋亡的影响.方法在原代培养的BAECs中,分别转染构建在腺相关病毒载体内的细胞色素P450表氧化酶基因2J2,2C11,F87V两周后,用肿瘤坏死因子(TNF-α)(10ng/ml)和放线菌素D(ActD)(5ng/ml)诱导内皮细胞凋亡,通过细胞形态学和流式细胞计数观察其凋亡变化,同时采用Western blot分析检测Bcl-2和P38和丝裂原激动蛋白激酶ERK的表达水平.结果与对照相比,转染细胞色素P450表氧化酶基因后BAECs 凋亡细胞数减少,Bcl-2表达增加, P38表达减低, ERK的磷酸化水平增加.结论细胞色素P450表氧化酶能明显的抑制肿瘤坏死因子诱导的BAECs凋亡,并可能通过上调Bcl-2、下调P38的表达水平和通过增加ERK的磷酸化水平发挥抗凋亡作用.     

补肾活血方中单体成分的体外炎性抑制作用研究北大核心CSCD

本文采用LC-MS技术进行定性分析,确定补肾活血方水提液中存在芍药苷、阿魏酸、白藜芦醇、蛇床子素及补骨脂素等单体化合物。利用酶联免疫法(ELISA)测定试药对模型细胞释放TNF-α、IL-6及NO的抑制作用。与空白组比较,模型组TNF-α、IL-6、NO含量明显升高(P<0.0);与模型组比较,阿魏酸、白藜芦醇、补骨脂素及复方水提部位在100μg/m L,以及蛇床子素在20、100μg/m L均对TNF-α的释放具有显著的抑制(P<0.01);阿魏酸及补骨脂素在100μg/m L,白藜芦醇及蛇床子素在20、100μg/m L均对IL-6水平具有显著的抑制(P<0.01);芍药苷及复方水提部位在100μg/m L,阿魏酸、白藜芦醇、蛇床子素及补骨脂素在20、100μg/m L均对NO的释放具有显著抑制(P<0.01)。结果表明单体对炎性因子的释放抑制作用总体上强于复方水提部位,提示补肾活血方的治疗骨关节炎活性可能是通过抑制炎症介质释放,降低TNF-α、IL-6、NO等含量发挥作用,这对验证复方药效活性,探究效应物质基础具有重要意义。     

丹参酮ⅡA磺酸钠联合辛伐他汀治疗冠心病心绞痛的疗效及对血液流变学和血清TNF-α、CRP、ET-1、NO水平的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)联合辛伐他汀(SV)治疗冠心病心绞痛(CHD-AP)的临床效果及对患者血液流变学和血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)、内皮素(ET)-1、一氧化氮(NO)水平的影响。方法:选取我院2016年4月～2017年4月收治的210例CHD-AP患者,采取随机数字表法均分为两组。对照组予以SV治疗,观察组在此基础上加用STS治疗。记录比较两组的临床疗效,治疗前后血液流变学状态、血清TNF-α、CRP、ET-1、NO水平的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗1个月后,观察组总有效率达91.4%,较对照组显著升高(78.1%,P0.01)。两组治疗1个月后血浆黏度(PV)、全血黏度(WBV)、血小板黏附率(PAd T)值及血清TNF-α、CRP、ET-1水平较治疗前均显著降低(P0.01),且观察组以上指标下降更显著(P0.01)。与治疗前对比,两组治疗1个月后血清NO水平均显著上升(P0.01);且观察组治疗后血清NO水平较对照组同期显著更高(P0.01)。与对照组(2.9%)对比,观察组不良反应率为1.9%,差异无统计学意义(P0.05)。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠联合辛伐他汀治疗冠心病心绞痛更能有效缓解患者临床症状,疗效显著且安全可靠,可能与其显著改善患者血液流变学状态和血清中TNF-α、CRP、ET-1、NO水平有关。     

细胞色素P450 2B4的结构及其催化反应

细胞色素P450是广泛存在于动物、植物和微生物中的含亚铁血红素单加氧酶,参与致癌作用和药物代谢、类固醇激素合成、脂溶性维生素代谢、多不饱和脂肪酸转换为生物活性分子等生理过程。P450能够催化完成伯、仲碳氢键羟基化、烯烃和芳烃环氧化、碳碳键耦合和断裂、α羟基化(去烷基化和杂原子氧化)、还原、1,2-迁移(卤素、氢和苯)等有机反应。本文综述了P450 2B4的结构与功能,讨论了细胞色素P450 2B4的活性中心和底物识别位点、与底物反应和产物释放的机理,以及P450在有机合成中的应用。     

多索茶碱注射液对急性支气管哮喘患者血清IL-18，IL-33及TNF-α水平的影响

目的:探究多索茶碱注射液对支气管哮喘急性发作的治疗效果及对血清白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-33(IL-33)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:100例支气管哮喘急性发作患者参照抽签法分作对照组与实验组,对照组采用氨茶碱治疗,实验组采用多索茶碱注射液治疗,观察两组疗效,喘息缓解时间、哮鸣音缓解时间、咳嗽缓解时间,IL-18、IL-33、TNF-α,内皮素(ET)、一氧化碳(NO),NK细胞、CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+,最大呼气流量(PEF),用力肺活量(FVC),安全性。结果:实验组总有效率高于对照组(P0.05)。实验组喘息缓解时间、哮鸣音缓解时间、咳嗽缓解时间优于对照组(P0.05)。治疗后,两组IL-18、IL-33、TNF-α、ET、CD8+均降低,实验组低于对照组,两组NO、NK细胞、CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+、PEF、FVC均上升,实验组高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。实验组不良反应率低于对照组(P0.05)。结论:多索茶碱注射液对支气管哮喘急性发作的临床效果肯定,降低血清IL-18、IL-33、TNF-α水平,同时能够利于血管内皮功能、肺功能、免疫功能的改善。     

利用杆状病毒Bac-to-Bac系统在Sf9细胞中表达真菌细胞色素P450nor

利用BactoBac杆状病毒载体表达系统将真菌细胞色素P450nor基因克隆至转移载体pFastBac1中, 得到重组质粒pFastBacP450nor, 再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中发生转座作用, 得到含P450nor基因的重组穿梭载体rBacmid pAcP450nor。分离提取重组Bacmid DNA, 并转染培养的昆虫细胞Sf9, 得到重组病毒rAcp450nor。经酶切和PCR 鉴定, 细胞色素P450nor基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下, SDSPAGE分析证明：表达蛋白的分子量为43kD左右。Western blotting分析结果表明：有一条特定的杂交带存在, 且分子量相同（约43kD）。进一步证明了含有真菌细胞色素P450nor基因的重组表达载体和重组病毒构建成功,并在昆虫细胞Sf9中实现了高效表达, 经MTT法测定表达的细胞色素P450nor具有还原NO的生物学活性。     

桑白皮中sanggenon B对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的影响

采用硅胶柱层析等方法从桑白皮中分离出抗炎活性化合物,通过波谱分析进行化合物结构鉴定。体外培养RAW264.7细胞,构建脂多糖(LPS)诱导炎症模型,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞活性,利用Griess法和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测炎症因子一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的释放量,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot技术分别测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)mRNA和蛋白的表达水平。结果显示:桑白皮乙醇提取物(MRE)能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的分泌水平,且呈现量效关系。对桑白皮进行分离,得到1种抗炎活性化合物,经波谱数据分析,确定其为已知的Diels-Alder加合物桑根酮B(sanggenon B)。抗炎活性表明,sanggenon B显著下调了炎症因子NO、TNF-α、IL-6的合成,并抑制了RAW264.7细胞中i NOS、COX-2 mRNA和蛋白的表达水平。研究表明,从桑白皮中分离出的sanggenon B具有一定的抗炎作用,其抗炎机制可能与调控炎症因子的合成,降低i NOS、COX-2表达有关。     

TNF-α对骨形成蛋白-2诱导的小鼠C2C12细胞向成骨细胞分化的影响及可能机制

目的:研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对骨形成蛋白-2(BMP-2)诱导的小鼠成肌C2C12细胞向成骨细胞分化的影响并探讨相关的作用机制。方法:分别以TNF-α(5 ng/mL)和BMP-2(100 ng/mL)单独或联合处理小鼠成肌C2C12细胞,检测细胞中碱性磷酸酶(AKP)的活性;采用BMP-2 100 ng/mL联合不同浓度TNF-α(0、2、5、8、10 ng/mL)或TNF-α5 ng/mL联合不同浓度BMP-2(0、100、200、300 ng/mL)处理细胞,检测细胞中AKP的活性。蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中Smad1和NF-κB磷酸化的水平。结果:与对照组相比,BMP-2(100 ng/mL)能显著增加C2C12细胞中AKP活性(P0.05),但TNF-α(5 ng/mL)可显著抑制C2C12细胞中AKP活性(P0.05)。C2C12细胞中AKP活性随着TNF-α浓度的增加显著降低(P0.05),但随着BMP-2浓度的增加而显著升高(P0.05)。与对照组相比,TNF-α能显著降低C2C12细胞中磷酸化Smad1的水平,且显著升高炎症相关因子NF-κB磷酸化水平,但加入BMP-2对NF-κB无显著影响。结论:TNF-α能抑制BMP-2诱导的C2C12细胞向成骨细胞分化,且具有一定的剂量效应,其作用机制可能与调控炎症相关因子NF-κB活性干预BMP2-Smad1信号通路有关。     

肝硬化患者内毒素、T N F -α和N O 水平与 高动力循环状态的相关性研究

目的：观察肝硬化患者血流动力学变化情况及血浆内毒素（LPS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和NO的水平并探讨之间相关关系。方法：试验检测血浆内毒素,双抗体夹心ELISA检测TNF-α,NO2^-／NO3^-测定采用硝酸还原法。并对CO、MAP、SVRI行同步观察。结果：健康组与肝硬化患者比较。失代偿组高动力循环状态特征明显。失代偿组、代偿组、健康组LPS、TNF-α、NO依次明显升高（P〈0．01）。血浆LPS与TNF-α和N0之间呈直线正相关。血浆NO水平与CO呈显著性正相关;与MAP、SVRI呈显著性负相关。结论：肝硬化患者血浆LPS、TNF-α、NO生成增多,NO在肝硬化血液动力学紊乱中起重要作用。     

余甘子不同溶剂提取物抗炎活性的研究

本试验旨在筛选出余甘子不同溶剂提取物的最佳抗炎活性部位。试验以水、乙醇、乙酸乙酯和石油醚为提取溶剂得到余甘子不同溶剂提取物(水提取物分成三个组分:水(1)组分分子量小于6000;水(2)组分分子量在6000到10000之间;水(3)组分分子量大于10000),采用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型;以NO分泌量和细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)释放量为指标,筛选出余甘子不同溶剂提取物最佳抗炎活性部位。余甘子不同溶剂提取物在浓度25~400μg/m L之间对细胞无明显细胞毒性(P0.05)。与模型组相比,水(1)、水(2)和乙醇提取物能显著抑制LPS诱导巨噬细胞分泌NO(P0.05)。在细胞因子实验中,乙醇提取物极显著抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌IL-1β和TNF-α(P0.01);乙酸乙酯提取物抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌IL-6的效果最佳。综合评价得出余甘子乙醇提取物作为筛选出的最佳抗炎活性部位,其极显著抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌NO和细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6),可以作为后续分离鉴定抗炎活性物质单体的活性部位。     

胎脑提取液对衰老小鼠海马神经元酶活性影响的实验研究

目的 观察胎脑提取液对衰老小鼠海马神经元酸性磷酸酶（ACP）和琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的影响,探讨胎脑提取液的抗衰老作用。方法 选用健康昆明种小白鼠30只,随机分为3组;采用D-半乳糖制备亚急性衰老模型;酶组织化学方法结合显微图像分析。观察各组小鼠海马神经元ACP和SDH的活性。结果 衰老模型组与正常对照组相比,小鼠海马神经元ACP活性明显升高,SDH活性明显降低;给药组与衰老模型组相比,小鼠海马神经元ACP活性明显降低。SDH活性明显升高。结论 胎脑提取液可以延缓海马神经元的衰老进程,具有一定的抗衰老作用。