乳汁中表达单抗的转基因山羊

Genzyme Transgenics Corp.(Framinghams,MA)证实可以在转基因山羊乳汁中产生复合单克隆抗体,该公司已与Bristol-Myers Squibb Co.(BMS)(Princeton.NJ)签约在其位于Massachusetts州的转基因山羊农场生产抗癌单抗BR96。 Genzyme Transgenics已证实可以在转基因山单乳汁中大量表达人抗凝血蛋白抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)。还证明了转基因小鼠可在其乳汁中产生单抗。但是在山羊乳汁中产生单抗则是此公司技术发展的一个里程碑。     

转基因山羊在其乳汁中表达单克隆抗体

Genzyme Transgenics Corp(Framingham,MA)已证实,转基因山羊可在乳汁中产生复合单克隆抗体(MAb);该公司与Bristol-Myers Squibb Co.(BMS) (Princeton,NJ)签定一项协议,使养育在马萨诸塞州农场的这些转基因山羊表达BMS的抗癌BR96 Mab。 Genzyme Transgenic公司已经证实,可以在山羊乳汁中高水平表达人抗-凝集蛋白抗-凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)。它还证明,如果按相同的遗传工程方法处理小鼠胚胎,转基因小鼠也可在其乳汁中产生     

抗凝血酶Ⅲ转基因山羊外源基因拷贝数及其蛋白表达量的测定

目的:检测抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)转基因山羊外源基因的拷贝数及ATⅢ蛋白的表达量,分析拷贝数与蛋白表达量的相关性。方法:用Primer 5.0软件设计外源基因ATⅢ及山羊管家基因GAPDH的引物,以倍比稀释的标准品进行实时荧光定量PCR,制作标准曲线,通过标准曲线计算外源基因拷贝数;通过酶显色底物法检测ATⅢ蛋白的含量。结果:依据ATⅢ和GAPDH基因标准曲线方程计算得到的山羊个体间外源基因的拷贝数相差很大,最少的为5,最多为25,且不同转基因山羊间ATⅢ表达水平的差别达10倍以上。结论:外源基因表达水平在受到拷贝数的影响外,也受到整合位点等其他因素的重要影响。     

转基因山羊

经过大约３年的时间,体细胞核移植技术从科学创新转入了扩繁生产医药的转基因动物的重要商品化阶段。Ｅｃｈｅｌａｒｄ及其同事描述了这一技术在山羊上的应用。利用转基因供体的胚胎细胞核成功地培育出了乳汁中分泌人抗凝血酶Ⅲ（ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎⅢ）的无性系山羊。转基因山羊@孙雷心     

人抗凝血酶Ⅲ转基因羊的外源基因漂移风险分析

目的:研究转基因羊发生基因漂移的可能性.方法:利用实时荧光定量PCR技术检测人抗凝血酶Ⅲ转基因羊及与其密切接触的野生型山羊、转乙肝表面抗原基因羊、转β-干扰素转基因羊、狗、鸡和鹅的血样中人抗凝血酶Ⅲ基因的含量.结果:人抗凝血酶Ⅲ转基因只在人抗凝血酶Ⅲ转基因羊血液中检测呈阳性.结论:人抗凝血酶Ⅲ基因没有在转基因羊和非转基因羊及其它动物间发生漂移,提示转基因羊对于环境是安全的.     

蒙古山羊和哈萨克山羊GOLA-DRB3基因的HaeⅢ酶切多态性分析

采用限制性内切核酸酶HaeⅢ对蒙古山羊和哈萨克山羊GOLA-DRB3基因外显子2的285bp扩增产物进行了PCR-RFLP多态性分析,共检测到17种基因型,由A、B、C、D、E、F和H等7个复等位基因控制;通过酶切图谱分析发现蒙古山羊和哈萨克山羊的GOLA-DRB3基因外显子2的154、168和220位碱基表现出多态性。并对基因型频率和等位基因频率进行了统计分析,结果表明,GOLA-DRB3基因的部分基因型频率和等位基因频率在两个群体之间差异显著（P＜0.10或P＜0.05）或极显著（P＜0.01）; χ2适合性检验结果表明,蒙古山羊和哈萨克山羊的GOLA-DRB3基因外显子2的HaeⅢ酶切位点均未达到Hardy-Weinberg平衡状态（P＜0.01）。 Abstract:The exon2 of GOLA-DRB3 gene was amplified and a uniform fragment of 285bp was obtained in Mongolian Goat and Kazakh Goat.The 285bp PCR product was digested with restriction endomuclease HaeⅢ and genetic polymorphism was investigated by PCR-RFLP.Seventeen kinds of genotypes were found in two populations,which were controlled by seven alleles.There are significant differences in some genotypic frequencies and gene frequencies between the two populations（P＜0.10,P＜0.05,P＜0.01）;The results of χ2 test showed that genotypes of GOLA-DRB3 gene in two populations did not fit with Hardy-Weinberg equilibrium（P＜0.01）.     

羊Ⅲ型前胶原的分离纯化

目的：从山羊胎皮提纯羊Ⅲ型前胶原,以代替人Ⅲ型前胶原生产免疫试剂。方法;以山羊胎皮为原料,通过11．2％硫酸铵及10％氯化钠盐析和超速离心,DE32和DE52阴离子交换纤维素柱层析提取纯化得到羊Ⅲ型前胶原。结果：测得羊Ⅲ型前胶原分子量为468kDa。主要成分甘氨酸,羟脯氨酸和脯氨酸构成比分别为40．4％,11．7％和11．1％。与人羊Ⅲ型前胶原的交叉反应为65．89％。结论：提纯得到的羊Ⅲ型前胶原可以用于代替人Ⅲ型前胶原生产免疫检测试剂。     

Genzyme Transgenics公司用山羊奶生产药物

美国Genzyme Transgenics公司的研究人员在麻省乡村地区开发了168英亩土地及成群的健壮山羊,以此进行药物生产。据其所述,他们正在位于Charlton的农场中用转基因山羊生产至少2种治疗用蛋白及抗体。 该公司成功地繁殖出称为Grace的母山羊,并于近期为其庆贺生日。Grace是首次在实验室以外被繁殖出并发生遗传改变的动物。Genzyme公司寄希望于用Grace繁殖出在其乳汁中分泌单抗(Mab)BR96的山羊群。这种Mab是由Bristol-Moyers Squibb Co·开发,作用是将肿瘤治疗药物doxorubicin直接送至肿瘤部位。     

从1升山羊乳成功地分泌7克AT-Ⅲ

美国Genzyme Trangenies公司从1升重组山羊乳汁中以工业水平生产7克人抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)。该公司决定作为以动物工厂生产的第一种医药品开发AT-Ⅲ,并着手工业化。去年11月已向美国食品与药物管理局(FDA)申报。为进入临床试验与FDA商谈重组AT-Ⅲ的安全性评价法和GMP标准(优良制造规范)等。     

动物血清和单克隆抗体用于ELISA测定灭活脊灰疫苗的抗原量

<正>一、材料与方法 1.病毒和疫苗 病毒:用脊灰Ⅰ型Mahong株、Ⅱ型MEF株和Ⅲ型Saukette株的Hela细胞感染培养收获液,经氯化铯反复梯度离心提纯的D抗原制剂;及D抗原加热60℃2小时制成的C抗原制剂。由滴定法测量D抗原制剂的TcID_(50),Lowry法确定蛋白质含量。 疫苗:用CL疫苗(包括Salk和纯化D抗原型),RIV和IM疫苗;并以RIV的PU_((78)—(02))三价苗作为原价参考疫苗。 2.动物血清 兔抗脊灰I、Ⅱ、Ⅲ型病毒血清:系新西兰白兔用100μg纯化D抗原,2至多次超免(间隔1个月)疫制备的,其中和抗体效价≥1∶20000; 山羊抗脊灰病毒血清:系山羊感染I-Mahoney,Ⅱ-MEF及Ⅲ型-Lansing株后免疫制备的。     

山羊、绵羊MT-Ⅳ分子特性研究

金属硫蛋白(MTs)是一类低分子量、金属和半胱氨酸含量高的细胞质蛋白,哺乳动物的MTS包括MT-Ⅰ、MT-Ⅱ、MT-Ⅲ和MT-Ⅳ4种亚型,其中MT-Ⅳ只在磷状复层扁平上皮细胞中表达,相关研究报道较少.本研究根据GenBank已公布的动物MT-Ⅳ基因序列,设计出扩增山羊和绵羊MT-Ⅳ基因的特异性PCR引物MT-ⅣSP1和MT-ⅣSP2,利用RT-PCR的方法,分别从山羊和绵羊的瘤胃组织mRNA中,克隆出山羊和绵羊的MT-Ⅳ基因编码区序列(均为189bp),序列登录GenBank,获得序列号EF470251和EF624067.通过序列分析,表明山羊和绵羊两个物种MT-Ⅳ基因编码区全编码均为189 bp、编码62个氨基酸,其中绵羊的MT-Ⅳ含有20个半胱氨酸,而山羊第61位保守的半胱氨酸被色氨酸所代替.两个物种的MT-Ⅳ均不含芳香族氨基酸,含有MTs特有的C-X-C、C-X-X、C-C-C-X-C-C结构,无明显的跨膜结构域,无信号肽,是一种细胞质蛋白.二级结构分析表明两个物种的MT-Ⅳ二级结构大多数为无规则卷曲结构,分别在第7～9和第49～51氨基酸残基性存在折叠结构,不存在螺旋结构.三级结构预测结果表明两个物种MT-Ⅳ的三级结构由α和β两个结构域组成,其中β结构域相同,α结构域山羊少一个半胱氨酸残基,其结构与绵间存在明显差异,这一差异可能对山羊MT-Ⅳ的生理功能产生一定影响,有必要深入研究.     

人类凝血第八因子转基因乳山羊的培育

台湾大学农学院研究人员应用显微注射技术 ,将含有牛α 乳白蛋白基因 (αlA)调节序列与人类凝血第八因子 (hFⅧ )基因构造性cDNA序列的αLA hFV Ⅲ转基因片段 ,注入小鼠和山羊的早期胚原核中 ,并将此二早期胚分别移植于受胚小鼠和受胚山羊的生殖道内 ,希望能获得转基因小鼠和转基因羔羊 ,还分别从其乳腺生产hFVⅢ的医药用蛋白质。开始试验移植 6 1 2只已完成αLA hFVⅢ基因注射的小鼠胚于 2 1只受胚母小鼠 ,结果 1 4只怀孕并产下79只小鼠。用PCR、Southernblot及slotblot分析结果 ,证实其中 1 7只 (1 0♀ /7♂ )系带有αlA hFVⅢ基…     

贵州四个山羊品种mtDNA多态性及起源分化

采用１５种限制性内切酶,研究贵州省４个山羊品种共９３只个体的线粒体ＤＮＡ多态性。其中ＢｏｍＨＩ、ＨｉｎｄⅢ和ＳａｌⅠ３种酶的酶切类型存在多态。共检测到１８种限制性态型,归结为３种ｍｔＤＮＡ单倍型。单倍型Ⅰ、Ⅱ在贵州山羊４个品种分布频率较高,分别为７７．４２％和２１．５０％,单倍型Ⅲ分布频率较低（１．０８％）;品种间亲缘关系聚类分析表明白山羊和黑山羊亲缘关系最近,其次为黔林羊,而与小香羊的亲缘关系最     

转基因克隆奶山羊大量生产重组人的抗凝血酶Ⅲ蛋白质(rhATⅢ)

利用转基因克隆奶山羊乳腺生物反应器大量生产重组人的抗凝血酶Ⅲ(rhATⅢ)蛋白质.其中包括:筛选出人的抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的cDNA序列;利用山羊的β-酪蛋白基因的启动区,终止信号和Enterokinase蛋白酶酶切DNA序列,构建在乳腺中特异表达rhATⅢ的表达栽体.同时在转基因载体的末端连接一个新酶素筛选基因(Neomycin).再以细胞转染、G418筛选和体细胞核移植(动物克隆)等过程,最后获得含有人的抗凝血酶Ⅲ基因的转基因克隆奶山羊.我们共获得了5个原代转基因公羊.第一只克隆羊在出生后78 d死亡,解剖表明:羊的肺部和肾脏等器官有异常.其它克隆公羊经过与崂山种母羊交配,得到转基因后代,其中两个原代转基因羊的后代母羊已成熟、所获得的奶经蛋白质电泳证明:转基因克隆羊后代奶中含有约60 kD大小的rhATⅢ糖蛋白;经Elisa检测表明:在奶中含有大量活性的rhATⅢ,在来源于两个不同克隆公羊的后代母羊奶中的rhATⅢ含量分别为0.4mg/L和3 g/L.此研究证明:转基因奶山羊可以大量地生产具有很高活性的rhATⅢ.用这种方法生产的rhATⅢ通过蛋白质提纯,制成注射针剂,将可用于人的抗凝血酶Ⅲ缺乏症的治疗、预防血栓和重大手术过程中的止血的作用等.     

河南地方山羊品种的遗传多样性

采用18个微卫星位点对河南省5个地方山羊品种（牛腿山羊、槐山羊、河南奶山羊、太行黑山羊和伏牛白山羊）的遗传多样性进行了评价.结果表明：18个微卫星位点在5个山羊品种均为高度多态;5个山羊品种的多态信息含量、群体杂合度、有效等位基因数值较高,说明其遗传多样性和各品种内的遗传变异比较丰富;聚类分析显示,牛腿山羊与太行黑山羊的关系较近,与河南奶山羊的关系较远.群体遗传分化系数和群体遗传距离表明,河南省地方山羊的变异主要存在于品种内,品种间的变异相对较小.结合5个山羊品种的实际生态地理分布,提出了避免近交,并有选择地进行品种间杂交的保种模式.     

山羊磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶生物信息学分析

旨在克隆山羊磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)基因cDNA全序列并进行序列分析.提取山羊睾丸中总RNA,利用RT-PCR和RACE技术,扩增山羊PHGPx基因cDNA序列并对其生物信息学进行分析.结果表明,山羊PHGPx基因cDNA序列全长844 bp,共编码199个氨基酸;山羊与牛、猪、人和小鼠的氨基酸序列同源性均大于90％;山羊PHGPx蛋白二级结构功能区域属谷胱甘肽过氧化物酶家族,预测23-24和28-29氨基酸位点有潜在的信号肽位点;UPGMA算法构建该物种间分子系统进化树,山羊与牛先聚为一类,再分别与猪、鼠、人、鸡聚类,最后与蜜蜂聚类,与物种动物学分类基本吻合.首次克隆了山羊PHGPx基因,具有GSH-Px家族典型特征,研究结果将为PHGPx基因表达分子调控研究提供一定的理论依据.     

苏格兰拉姆岛上野化山羊种群的取食生态学

2000年6～11月对苏格兰拉姆岛上野化山羊(Capra hircus)种群的取食生态学进行了研究.研究表明:山羊的觅食回合长度变化范围从1min到460 min不等,平均觅食回合长度是103.1±15.0 (SD)min,雌性动物的觅食回合长度较雄性的长(P=0.077).野化山羊单位时间的取食频率平均为46.3±0.6 口/min,取食频率随性别(P=0.023)和月份(P<0.001)而显著变化.雄性山羊在繁殖交配之前(6～7月)和之后(10～11月)的取食频率比繁殖交配期中(9～10月)的快(P<0.008),但雌性动物并没有这样的变化(P=0.327).雄性动物在繁殖交配期中的取食时间显著减少.雌、雄两性动物在取食频次和取食时间方面的这些差异可能导致该山羊种群在食物摄入量上的性别差异:雌性山羊的食物摄入量相对比较稳定,而雄性山羊的摄入量则变动很大.估计的食物摄入量随月份而下降(尽管9月份以后有一微小幅度的上升),这意味着拉姆岛上的山羊种群在食物匮乏而天气寒冷潮湿的冬季可能面临着能量收支不平衡的威胁.     

金堂黑山半GOLA-DRB3基因多态性与体尺性状相关性

宁夏大家生命科学院杨易,徐金瑞,西南民族大学生命科学学院郑玉才,王杰四位动物遗传育种工作者采用TaqⅠ、PstⅠ和HaeⅢ三种限制性内切酶对111号金堂黑山羊GOLA-DKB3基因第二外显子的遗传多态性进行检测,其结果表明：金堂山羊GOLA—DRB3;第二外显子多态性极丰富,且为多碱基突变,除241位点外.     

山羊基因组研究进展

山羊基因组是山羊品种资源保护和利用的研究依据,对培育和改良山羊品种具有重要意义。目前,随着山羊参考基因组的不断完善,在山羊起源、进化和适应性等方面的研究取得了诸多重要成果。本文详细综述了山羊基因组研究进展,主要包括山羊基因组结构、山羊基因组图谱(遗传图谱、物理图谱和比较图谱)、山羊高通量测序和山羊SNP芯片的开发及利用,以期为开展山羊基因组选择(genome selection, GS)奠定理论基础。     

奶牛农场氮素平衡研究进展

规模化、集约化奶牛农场载畜率很高,通常没有配备足够的土地消纳粪污和规范的粪污处理系统,以致氮素排放量超过单位面积土地的环境承载力.奶牛农场是农业源氮素主要排放源之一,国外学者很早就关注了奶牛农场氮素平衡问题.奶牛农场氮素流动和平衡是研究奶牛农场氮素循环和氮素管理的基础,也是环境法律法规政策制定的依据;而氮素盈余和氮素利用率是评价奶牛农场氮素流动和平衡时使用最广泛的指标.本文基于农场尺度简述了氮素平衡的概念和农场内氮素流动,比较了氮素盈余和氮素利用率的使用范围,分析了影响氮素平衡的因素,综述了减少奶牛农场氮素排放的有效策略,以期为中国奶牛农场氮素管理提供参考和借鉴.