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乙型肝炎病毒(HBV)核心基因的变异及分析 总被引:1,自引:0,他引:1
对18份不同类型的乙型肝炎病毒感染者血清及4份肝癌组织,用套式PCR扩增PreC/C基因,结果15份标本可供进行核苷酸序列分析。12例血清标本在C区均出现点突变并导致氨基酸改变。1份肝癌患者的血清及癌组织与另1份癌组织中获得的C基因克隆有213-324个核苷酸缺失。 相似文献
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本文旨在探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心(core)蛋白在病毒复制和感染中的作用,采取基因置换的方法,用HCV1b型J4株的核心基因平行置换2a型J6JFH1株的核心区,构建了FL-J6JFH/J4core嵌合复制子。体外制备RNA转录体,以脂质体介导转染Huh7.5.1肝癌细胞。转染后第5天,用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测细胞内HCVRNA水平。第8天,以丙型肝炎患者血清为一抗,免疫荧光法(IFA)检测转染细胞内HCV蛋白表达。同时收集转染后第8天的细胞上清液,感染naveHuh7.5.1肝癌细胞,72h后IFA检测HCV蛋白表达。结果显示,FL-J6JFH/J4core转染组第5天细胞内RNA水平与野生型FL-J6JFH1接近,无显著差异(n=4,P0.05)。免疫荧光检测显示,FL-J6JFH/J4core转染细胞后第8天及其上清液感染的naveHuh7.5.1细胞的HCV阳性细胞数都低于野生型。本研究结果初步表明,HCV各株间核心基因的替换会影响HCV的蛋白翻译和感染性病毒颗粒的产生与释放。 相似文献
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慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是严重威胁人类生命健康的世界性公共卫生问题。基于现有抗HBV药物的治疗策略,仅能在极少部分患者中实现慢性乙肝的功能性治愈。发展更为有效的抗HBV药物,需要更加透彻全面地认识各个病毒组分和关键宿主因子在HBV感染和复制生命周期中发挥的功能和机制,并在此基础上发现鉴定新的治疗靶点。支持HBV体外感染和复制的细胞模型,是研究HBV生活史的重要工具,并在治疗新靶点的发现和候选药物功效评估等研究工作中发挥关键作用。本文对支持HBV感染和复制细胞模型的新近研究进展进行梳理分析,并对这些模型的应用特点和局限性、新近研究进展和未来发展方向进行系统阐述和讨论。 相似文献
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乙型肝炎病毒前S2抗原决定簇与乙型肝炎病毒核心抗原的基因融合与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
乙肝前S2(HBV PreS2)肽段由55个氨基酸组成,其N端肽段含Th和B细胞抗原决定簇。我们将化学合成的PreS2 epitope(120-145)基因不同位点进行融合,融合基因在大肠杆菌中获得表达,并对融合蛋白进行了纯化。经ELISA和Western-blot实验表明,融合蛋白具有PreS2和HBcAg两者的抗原性。此外,研究还表明,强启动子能使表达水平有一定的提高。 相似文献
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通过乙型肝炎病毒核心基因5''''端的修饰使核心抗原在大肠杆菌中高效表达 总被引:4,自引:0,他引:4
为了使乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)在大肠杆菌中获得高效表达,本文首次采用一种新方法对核心基因前区进行改造与修饰,即用限制性内切酶Taq I从核心基因内部5′端切开,去除核心基因起始信号ATG及ATG 5′端上游的全部前核心区(Precore),再化学合成一段既包含核心基因起始信号又具有多种功能的DNA片段。将两者拼接重组到表达载体pUC9上,转化受体菌,成功地获得高效表达HBcAg的菌株。用ELISA法检测,表达滴度为1:80000。表达产量占菌体总蛋白的16%。其菌体裂解液经免疫电镜观察,可见到成堆聚集的典型HBcAg颗粒。抗原单体分子量约为22000道尔顿,双体为44000。与目前国内外所普遍采用的方法比较,本文的方法有许多明显的优点,可用于其它基因改造。 相似文献
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为研究丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白抑制乙型肝炎病毒 (HBV)表达的分子机理 ,从HCV和HBV共感染中国病人血清中分离了 5个含HCV 5′非编码区 ( 5′NCR)和核心区 (CR)cDNA序列的克隆 .序列比较和系统发育分析显示 :从共感染病例中分离的HCV序列与其它已发表的从单独HCV感染病例中分离的序列没有显著差异 .共转染实验证实采用从其中 1例共感染病人中分离的核心蛋白cDNA基因所表达的核心蛋白 ,可抑制HBV表面抗原 (HBsAg)和HBVe抗原 (HBeAg)的表达 ,缺失突变分析说明HCV核心蛋白的C端疏水区对这种抑制作用是必需的 ,报道基因产物分析进一步说明了HBVC启动子和增强子Ⅱ是HCV核心蛋白的效应靶序列之一 ,而HCV核心蛋白在肝细胞和非肝细胞中均对HBV和其他细胞和病毒的基因的转录起负调节作用 .因此 ,认为HCV核心蛋白是一种多功能的负调节因子 ,与HCV和HBV以及HCV与细胞之间的相互作用密切相关 相似文献
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乙型肝炎病毒核心抗原及e抗原均为乙型肝炎病毒核衣壳的重要组成部分。自从发现病毒核心颗粒中存在着e抗原之后,它们之间的关系一直是人们研究的课题。有些报道认为,e抗原是核心抗原的组成成份。有人通过实验发现核心抗原和e抗原的氨基酸序列极其 相似文献
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将含有乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)的基因片段用核酸外切酶BAL-31消化,加EeoR Ⅰ接头,插入载体pUR222的多克隆接头的EcoR Ⅰ位点,转化受体菌Ecoli K12 BMH 71-18,取3个产生HBcAg水平不一的克隆株重组子作DNA顺序分析,用Sal Ⅰ从接头当中靠近Pst Ⅰ位点一端将重组DNA切开,用(α-~(?)P)dCTP和DNA聚合酶Ⅰ klenow片段,标记3'末端,并将粘性末端补平,再用pst Ⅰ从靠近此位点(~(?)P)标记的3'末端切掉四个核苷酸,使只保留一个标记末端,采用Maxam和Gilbert的方法化学降解,由互补链3'端阅读DNA顺序,发现HBcAg表达水平与mRNA的起始密码前保留发卡结构的长短有很大关系。 相似文献
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对29例肝炎,1例尸检肝组织和血清中乙型肝炎病毒的DNA(HBV DNA)进行了研究,发现HBsAg( )/HBeAg( )患者中,有9/17(52.94%)血清HBV DNA阳性;HBsAg( )/抗-HBe( )患者中,2/6(33.33%)也为阳性。从30例肝组织中提取DNA经琼脂糖电泳,Southern吸印转移及分子杂交试验结果表明,27例HBV DNA阳性,全部有游离型HBV DNA。27例中有5例经用标记pBR322探针杂交排除非特异杂交带后,在高分子量区有HBV DNA特异的杂交带,提示有HBV DNA整合。 相似文献
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乙型肝炎病毒核心启动子及其上游顺序对其基因表达的调控 总被引:15,自引:0,他引:15
构建了线性化的,基本核心启动子开始并有不同长度Cp上游顺序的,含完整转录单元的HBV基因组克隆,以研究Cp及其上游顺序对HBV基因表达的调控及对HBV子代DNA复制的影响。发现从基本核心启动子Cp开始的HBV轨录单元能够有效地起始3.5kb mRNA转录。Cp上游ENⅡ顺序对子代DNA复制有极强的刺激作用,而ENⅡ更上游顺序地ENⅡ的刺激作用又有所抑制,证明Cp的转录受其上游顺序的正负双重调控。 相似文献
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