肌肉蛋白的免疫化学研究——Ⅱ.软骨鱼系原肌球蛋白免疫化学的若干有关数据

在前文中我们报导了软骨鱼系原肌球蛋白的若干免疫化学性质。根据琼脂电泳、免疫电泳和琼脂双扩散反应,检出用其他化学或物理化学方法所未能检出的不均一性,并根据电泳移动速度,在(?)和鯊原肌球蛋白中,找到“快速泳动”和“慢速泳动”两部分。这两     

动物肌球蛋白碱性轻链研究进展

肌球蛋白碱性轻链是肌球蛋白的组成成分之一,作为结构和调节蛋白在肌纤维的发生分化、肌肉运动和代谢等过程中发挥重要生理功能。简要综述肌球蛋白碱性轻链亚型的分析、碱性轻链基因的数量和分布、碱性轻链发育性表达等,为肌肉发育生物学研究提供参考。     

用免疫酶标技术对东方蝾螈胚胎肌肉原肌球蛋白生成时期和部位的观察

原肌球蛋白(Tropomyosin,以下简称TM)是肌肉的结构蛋白之一,它与肌钙蛋白配合,在调节肌肉收缩的过程中起着重要的作用。对于TM的化学结构、免疫学性质及其在肌肉收缩过程中的功能,已有不少研究。一些作者研究了离体培养的成肌细胞在分化时TM的生成和积累。但用免疫组织化学方法,研究TM在胚胎发育过程中的生成和定位方面的工作还不     

免疫化学和免疫电泳技术在硝酸还原酶和纤维素酶研究中的应用

应用免疫化学和免疫电泳技术研究蛋白质和酶的功能与结构,已为生物化学常用方法之一。本文介绍在硝酸还原酶(NR)和纤维素酶分离鉴定中使用免疫化学和免疫电泳技术的方法。     

鱼类肌球蛋白重链基因研究进展及展望

肌球蛋白是构成鱼类肌肉的主要蛋白之一。肌球蛋白由2条相对分子质量为220×10^3的重链和4条相对分子质量为16×10^3～20×10^3的轻链组成。以往对于肌球蛋白基因的研究大多数集中在高等脊椎动物,而有关鱼类的研究相对薄弱。对鱼类肌球蛋白和肌球蛋白重链基因结构、功能及其表达调节机制等研究进展做了综述分析;同时结合作者的研究实践,探讨了对名贵鱼类肌肉发生和肌球蛋白的进一步研究。     

蜜蜂飞翔肌收缩蛋白的电子显微镜鉴定

自五十年代肌丝滑行模型建立以来,关于脊椎动物骨胳肌的蛋白质成分,肌丝排列以及肌肉收缩时结构变化的研究取得了很大的进展。骨胳肌肌原纤维由粗、细肌丝有规律地排列所组成。对于肌肉收缩蛋白的选择性抽提,专一性抗体标记以及重组肌丝的研究,证实肌球蛋白存在于粗肌丝;肌动蛋白、原肌球蛋白和原宁蛋白存在于细肌丝(Huxley,A.F.,1957;Huxley,H.E;,1972)。昆虫间接飞翔肌的结构和生理特性有许多不同于脊椎动物骨胳肌的特点。蜜蜂飞翔肌肌原纤维虽然也包含有粗、细两     

周围神经43kD蛋白免疫化学研究

目的：制图周围神经43kD蛋白单克隆抗体,并检测该蛋白在正常及损伤坐骨神经中的表达,方法：实验用SDS－聚丙烯酰胺胺凝胶电泳系统,从周围神经中分离回收43kD蛋白作为抗原,免疫BALB／c小鼠,通过杂交瘤技术和点膜印迹法检测,获得分泌识别43kD蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以Westernblot方法检测单克隆抗体的特异性,并检测43kD蛋白在正常坐骨神经及损伤坐骨神经远侧端中的表达。结果：经检测获得了识别43kD蛋白的单克隆抗体,Westernblot显示在正常大鼠坐骨神经与损伤后2周的坐骨神经远侧端组织电泳图谱43kD处均出现特异的阳性反应条带,在损伤神经中43kD蛋白阳性反应产物着色较深。结论：43kD蛋白具有独特的免疫化学特性,在正常与损伤坐骨神经中的有表达,在损伤坐骨神经中表达更强。     

原肌球蛋白和副肌球蛋白晶体的电子显微镜观察

(一)自猪胃、猪膀胱平滑肌、鵝肫、鴨肫平滑肌、河蟹横紋肌和河蚌閉壳肌及斧足肌制备出原肌球蛋白的針状晶体,自河蚌的两种肌肉制备出副肌球蛋白的針状晶体,分別在电子显微鏡下观察其横紋結构与細节。(二)各种原肌球蛋白的針状晶体与河蚌的副肌球蛋白晶体相类,一般都不是具有三維規律性的真正晶体,而是具有横紋結构和整齐外形的纤維聚集物——类晶体。(三)各种原肌球蛋白类晶体的横紋周期,大都属于n×200A(n=1,2,…)数系,周期或为400A、或为200A。其具有400A周期的,有时伴有200A的細节。这些共同的特征与免原肌球蛋白真正晶体的三維网状周期相同。(四)鴨肫和鹅肫原肌球蛋白的类晶体中,除了400A,200A的横紋外,还出現800A(n=4)的周期,显示其分子长度可能至少不低于800A。(五)河蚌斧足肌和閉壳肌副肌球蛋白的类晶体,同海蚌一样,都具有周期約700A的横紋結构。条件适宜时,还可以在每一周期之間观察到4条横紋,細节間距为140A。(六)河蚌閉壳肌原肌球蛋白的类晶体中,也有接近800A的周期。(七)在高盐条件下所获得的河蚌斧足肌和閉壳肌原肌球蛋白的类晶体,与上述一般低盐条件下的类晶体不同,細节間距与副肌球蛋白的相同,为140A,而非200A。(八)根据电子显微鏡下观察到的类晶体横紋周期和細节間距,可以初步推論:一般而言,原肌球蛋白和副肌球蛋白是两类而非一类的蛋白貭。但在两种蛋白貭共存的同一肌肉,如河蚌閉壳肌或斧足肌之中,它們之間还可能存在着一定的亲属关系。     

锯缘青蟹主要过敏原的纯化与鉴定

以锯缘青蟹为研究对象,从免疫鉴定、分离纯化、抗体制备和免疫学分析等方面对其主要过敏原进行研究。首先利用过敏者血清的免疫印迹法,确定锯缘青蟹的主要过敏原为分子量约38kD的蛋白。然后通过制备丙酮粉、等电点沉淀、硫酸铵沉淀及加热处理对分子量为38kD的主要过敏蛋白进行了高度纯化。该蛋白的pI约为4.5,与虾的原肌球蛋白Pena1性质相近,证实了锯缘青蟹的主要过敏原为原肌球蛋白。通过免疫新西兰大白兔,制备了原肌球蛋白的抗血清,采用Protein A Sepharose亲和层析柱对动物抗体进行了纯化。该抗血清效价高,经4×105倍稀释后仍能与抗原进行反应。该抗体与甲壳类动物及软体动物的原肌球蛋白具有较强的免疫交叉反应,可用于食品过敏原检测。       

人与小鼠染色体的免疫化学的差异

自从1972年Dev等〔13报告了荧光标记的 抗一腺嘿吟的抗体结合至用热与甲酸胺变性过 的人的中期染色体以后,用抗一腺嘿吟与抗一胞 吻咤的抗体进行研究已日趋广泛［[2,31。其结果 提示人们,利用抗核普酸血清的免疫学技术可 获得很多关于染色体结构的知识并可能找到一 种新的免疫化学的染色体分带。本文就是应用 一种新的ABC (Avidin-Biotin-peroxidase-Complex) 免疫化学的方法〔4,51,用抗一胸腺嚓淀脱氧核昔 抗血清标记人与小鼠的染色体,观察二者的区 别,从而提供一种新方法,即能在杂交瘤细胞中 区分人与小鼠的染色体。     

洋葱鳞茎中肌球蛋白和肌动蛋白的免疫化学鉴定

制备了粘菌肌动蛋白抗血清和鸡骨骼肌肌球蛋白抗血清。用这两种抗血清,经对流免疫电泳,火箭电泳及酶联免疫吸附分析,证明了高等植物洋葱鳞茎中肌球蛋白和肌动蛋白的存在。     

鲢鱼骨骼肌肌球蛋白重链基因的cDNA克隆与表达

肌球蛋白分子含有2个约200kD的重链亚基和4个约20kD的轻链亚基,重链亚基由球状的头部(S1)和α-双螺旋的杆部(Rod)组成1。在鱼类肌肉蛋白质的组成中,肌球蛋白约占肌原纤维蛋白的50%以上,并且其基因在生物进化过程中的变异性很大,以致肌原纤维蛋白性质的变化主要是由肌球蛋白的变化引起的2。       

生物素亲合素的免疫化学

生物素-亲合素系统的免疫化学及与之相关的技术,已逐渐完善,其应用日益广泛。它几乎同当代所有的标记物质相结合,形成了八十年代敏感特异的标记技术。同时,国外早已有齐全的试剂出售,国内也开始有几种试剂盒提供。当前,这一技术已成为医学和生物学等基础学科中,较有发展前景的技术之一。     

草鱼和鲢鱼肌球蛋白Ca2+-ATPase热力学活化参数的季节变化

肌球蛋白构成了鱼肌肉肌原纤维蛋白的50%以上,它的性质主要决定了肌原纤维蛋白的性质,进而影响了鱼肌肉蛋白质的加工适性.本文对来自春季(4月份)、夏季(8月份)、秋季(11月份)和冬季(1月份)的草鱼(Ctenopharyngodon idellus Valenciennes)和鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix Valenciennes)骨骼肌肌球蛋白进行提取和纯化,通过测定不同季节的两种淡水鱼肌球蛋白Ca2 -ATPase的热力学活化参数,从化学反应的热力学理论上证明了淡水鱼肌球蛋白的热稳定性与季节温度变化之间的关系.研究结果表明,草鱼和鲢鱼肌球蛋白Ca2 -ATPase的热力学活化参数活化能Ea、活化焓ΔH 和活化熵ΔS 伴随栖息环境温度的上升而增大,而活化自由能ΔG 的变化幅度很小,证明了肌球蛋白的热稳定性夏季鱼明显优于冬季鱼,而春季鱼和秋季鱼分别与夏季鱼和冬季鱼的相似.另一方面,ΔH 与ΔS 之间显示了良好的线性相关,证明了淡水鱼能够通过其肌肉蛋白质反应的活化焓与活化熵之间的互补效应,以应对自然界季节环境温度的变化.     

丝瓜肌球蛋白的电子显微学研究

从丝瓜 (Luffacylindrica (L .)Roem .)卷须中纯化得到分子量为 174kD的肌球蛋白 ,并对其进行了酶学与电子显微学的研究。这种肌球蛋白具有肌动蛋白激活的MgATPase活性 ,能够被抗动物肌肉的肌球蛋白的单克隆抗体识别。电子显微学研究表明 :它有两个头部 (大小和形状与动物肌肉的肌球蛋白相似 )和一条相对较短的尾部。还对丝瓜卷须的肌动蛋白进行了观测 ,偶尔发现一些尾部有球状结构的肌球蛋白。该肌球蛋白的免疫特性和超微结构证明了它由 2条重链组成 ,并与传统的肌球蛋白相似。然而 ,这种 174kD的肌球蛋白是否参与了丝瓜的接触卷曲有待于进一步研究。     

肌肉收缩Hill特性式的理论研究

从肌球蛋白工作循环的机械化学偶联模型出发,利用化学动力学方法和生物化学热力学原理,结合肌球蛋白单分子实验结果,从能量转化的观点给出了肌肉收缩的Hill特性式,加深了对Hill特性式及肌肉收缩过程中能量转化的理解,在整合肌球蛋白单分子性质与肌肉收缩宏观性质的信息方面做了尝试。     

对虾原肌球蛋白晶体和纤维的电子显微鏡观察

(1)利用锇酸、磷钨酸染色,复型和超薄切片等技术在电子显微镜下观察了对虾原肌球蛋白长纺锤形晶体的横纹结构。对虾原肌球蛋白在溶解度上与副肌球蛋白接近。(2)对虾原肌球蛋白晶体的横纹周期约400A,与一般的原肌球蛋白相同;而其横纹细节的间距为140A,却与副肌球蛋白相类。因此,对虾原肌球蛋白一如河蚌闭壳肌或斧足肌原肌球蛋白,构成两类蛋白质之同的“中间”类型。(3)在无盐的水溶液中,对虾原肌球蛋白聚合所形成的亚显微纤维,也具有横纹结构,其同距也是140A。(4)讨论了原肌球蛋白,副肌球蛋白和轻酶解肌球蛋白晶体横纹结构的特征与相同之处以及它们与分子结构可能有的内在联系。     

植物细胞内的胞质川流

近二十年来,对真核细胞所表现的各种运动已做了深入的研究,累积了相当数量的知识。非肌肉细胞的运动,目前按照收缩蛋白对,即肌动蛋白——肌球蛋白以及微管蛋白——待宁蛋白来划分。变形虫运动、胞质川流、组织细胞的运动、胞质分裂等属于第一种。纤毛和鞭毛运动、轴杆(axostyles)的弯曲等属于第二种。     

肌球蛋白工作循环的一个新模型

分析总结关于分子马达肌球蛋白的最新研究结果,给出一个新的肌球蛋白工作循环的机械化学偶联模型.从新模型出发,用一组化学动力学方程描述肌肉中大量肌球蛋白的集体工作行为.利用动力学方程的非平衡定态解,并结合Pate和Cooke的实验结果得到了力作为变量的肌肉态方程.理论结果同热力学原理一致,与传统的肌肉收缩理论有一定区别.根据肌肉的特殊结构,对肌肉态方程做了进一步讨论.     

平滑肌收缩调节的信号转导

平滑肌细胞内信号转导主要有肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）途径。前者通过肌浆内Ｃａ＾２＋浓度升高,激活钙调蛋白（ＣａＭ）依赖性ＭＬＣＫ,催化肌球蛋白轻链丝氨酸（Ｓｅｒ）－１９磷酸化,肌球蛋白ＡＴＰ酶活性增加,肌丝滑行,肌肉收缩。肌浆内Ｃａ＾２＋浓度的恢复使ＭＬＣＫ失活,肌球蛋白轻链磷酸酶（ＭＬＣＰ）使肌球蛋白脱磷酸化,肌肉舒张。近来有证据表明ＰＫＣ信号转导途径通过影响细肌丝相关蛋