天蚕素A-马盖宁杂合肽对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生理代谢影响的研究

研究天蚕素A-马盖宁杂合肽作用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)后对细胞生理代谢的影响。利用全波长酶标仪测定杂合肽作用MRSA后对DNA、RNA、总蛋白、β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶的影响,利用溶氧电极测定杂合肽对细胞呼吸作用的影响,通过生物发光分析仪检测杂合肽作用细胞后ATP生产的变化。结果显示,杂合肽作用MRSA后对细胞DNA、RNA、总蛋白的合成能力均出现抑制作用。β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶的表达活性同样受到了明显的抑制。杂合肽作用细胞后呼吸作用明显下降,ATP生产能力受到抑制。杂合肽作用细胞后抑制了胞内部分生物大分子的合成能力、胞内酶的表达活性及细胞的能量代谢功能,通过胞内机制发挥了抑菌作用。     

大黄酸抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌机制

[背景]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是医院及社区常见的机会性致病菌,具有多重耐药性、高发病率和高死亡率的特点.MRSA感染已成为全球医学界的普遍难题之一.[目的]研究大黄酸对MRSA的抗菌机制.[方法]以二倍稀释法测定大黄酸...     

新型纳米银胶体溶液体外对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑制作用及机制

目的探讨新型纳米银胶体溶液体外对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抑制作用及机制。方法以MRSA为研究对象,采用涂布法检测新型纳米银胶体溶液的杀菌作用,同时分析体外不同作用时间、剂量及因素对新型纳米银胶体溶液杀菌效果的影响。采用比色法检测细菌呼吸链脱氢酶活性,采用透射电镜观察其对MRSA菌体形态的影响。结果 0.05μg/mL新型纳米银胶体溶液对MRSA具有明显杀菌作用(抑菌率97.0%)。5μg/mL新型纳米银胶体溶液对MRSA作用5、15、30、60 min时均有明显杀菌作用(抑菌率均≥98.0%)。血清白蛋白对新型纳米银胶体溶液体外杀菌效果影响显著。新型纳米银胶体溶液能有效抑制MRSA呼吸链脱氢酶活性,对MRSA菌体形态破坏明显。结论新型纳米银胶体溶液体外对MRSA具有高效、多靶位抑制作用,可作为抗耐药菌治疗的新途径。     

金黄色葡萄球菌对甲氧西林耐药的分子机制

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是医院内和社区感染的重要现菌,所致感染治疗困难,因此成为各国学者关注与研究的热点。本文就近几年国内外在ＭＲＳＡ耐药分子机制的研究中取得的成果,如ｍｅｃＡ基因以及其他与ＭＲＳＡ对甲西林抗性表达相关基因的定位,结构及功能等作一介绍。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子分型研究进展

近年来,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在全世界各地感染率和分离率不断提高,已成为目前院内感染的重要病原菌之一。运用有效、可靠、廉价的分子分型方法对分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的流行病学特征及来源,对制定控制院感及流行的措施非常重要的。本研究概述了各种分子分型方法的原理及比较,如SCCmec分型、脉冲场凝胶电泳分型、多位点序列分型、葡萄球菌A蛋白分型和毒力因子分型等。脉冲场凝胶电泳仍然是暴发流行中MRSA分子分型的金标准,而其他分型方法更适合用于检测菌株的变异和建立国际监测。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究

了解我院患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的分子流行病学特点,为临床抗感染治疗提供依据。收集2007年1月~2008年9月我院分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌共54株,采用PCR进行SCCmec基因分型、葡萄球菌A蛋白（SPA）分型,并检测杀白细胞毒素（PVL）基因,同时应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行同源性分析。54株MRSA菌株SCCmec基因分型为SCCmecⅡ型17株,SCCmecⅢ型33株,SCCmecⅣ型2株,SCCmecⅤ型2株;SPA基因分型将28株归属为t030,9株为t002,8株为t037,5株为t570,2株为t437,t163和t796各1株;PVL毒素检测只有2株SCCmecⅣ型菌株阳性;PFGE证实院内MRSA感染主要为2种克隆株传播,同时还有其他型别出现。本院MRSA流行传播的SCCmec基因型主要以Ⅲ型占优势,同时发现有携带PVL毒素的CA-MRSA分离株流行,应引起密切关注。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药及其检测方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起医院感染的多重耐药菌,其有效的治疗药物为万古霉素。近年已发现对万古霉素耐受的金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌一旦对万古霉素耐药,临床将面临无药可供选择的局面。由于其所造成治疗上的困难,对其耐药机制的深入研究和该菌准确、及时的检出对于寻找新的治疗靶位和防止其播散有着极其重要的意义。本文就mecA耐药决定子、调节基因、染色体上的辅助基因对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药表达的影响及其表型和基因检测方法作一综述。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测和分型方法研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (Methcillin - resistantStaphylococcus aureus,MRSA )引起的院内感染 (nosocomialinfection)已经成为全世界一个越来越严重的问题。要想尽快获得 MRSA的相关信息从而采取适当的控制感染的措施 ,就必须依靠快速、可靠的检测和分型方法。由于 MRSA对甲氧西林耐药性的不断变化 ,故虽然目前存在检测和分型方法很多 ,但仍很难提供一种最优方法。在这里 ,我们对多种方法进行了比较 ,以便大家能从中选出既准确又省时且适合自己实验室使用的检测的分型方法。1　检测方法1.1　完整结构水平1.1.1琼脂平皿 2倍稀释法…     

mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 应用mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA）。方法 临床分离的70株金黄色葡萄球菌,应用mecA基因PCR扩增法鉴定MRSA,并与苯唑西林纸片扩散法进行比较。结果 70株金黄色葡萄球菌用PCR扩增法和纸片扩散法有6株鉴定有差异,4株。mecA基因阳性而纸片扩散法鉴定为敏感,1株mecA基因阳性纸片扩散法鉴定为临界耐药,1株mecA基因阴性却表现为苯唑西林耐药,2种方法符合率为91．43％。结论 mecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定MRSA,特别是对隐匿型或低水平耐药菌株的检出有重要的价值。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因与消毒剂抗性的研究

摘要：目的 了解临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐消毒剂基因携带状况及其对消毒剂抗性水平。方法 采用聚合酶链反应（PCR）法和体外抗菌试验方法进行实验室检测。结果 10株临床分离的MRSA中,检出4株携带qacA/B基因,检出率为40.0%。含氯消毒剂对4株qacA/B基因阳性MRSA的MIC值均高于标准菌株。戊二醛消毒剂对2株MRSA基因阳性MRSA的MIC值和1株MRSA基因阳性MRSA的MBC值高于标准菌株,其他均与标准株相同。结论 临床分离的MRSA qacA/B基因阳性率较高,携带qacA/B基因阳性的MRSA对含氯消毒剂有产生抗性的趋势。     

Fluorescent amplified-fragment length polymorphism analysis of the MRSA epidemic

Genotypes and putative genetic relationships were characterised for epidemic methicillin-resistant Staphylococcus aureus (EMRSA) strains and isolates from England and Wales, using a high resolution DNA fingerprinting technique, fluorescent amplified-fragment length polymorphism (FAFLP). Each of the phage types of EMRSA had a distinct FAFLP profile. The technique revealed clusters of strains and isolates, and could distinguish isolates belonging to the same phage type. FAFLP provides a new approach to the epidemiological study and control of MRSA.     

MRSA与VRE的快速检查方法的研究进展

MRSA与VRE在医院获得性感染中检出率的不断增加给临床治疗由此菌引起的感染性疾病带来了严峻的挑战,因此迅速隔离带菌者,防止院内感染的传播,提高治疗效果至关重要。本文旨在综述能直接从患者的送检原样本中检出MRSA和VRE的快速诊断试验的研究。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌皮肤脓肿小鼠感染模型的建立与评估

目的建立耐甲氧西林金黄葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）小鼠皮肤脓肿感染模型,观察脓肿形成动态变化及药物对脓肿愈合的影响。方法 45只SPF级裸鼠随机分为PBS对照组、感染组及给药组,用临床分离鉴定的ST-239型MRSA菌株皮下注射感染裸鼠,对脓肿的形成过程进行时相性观察,测定脓肿体积的变化,并通过H.E染色观察皮肤的组织病理学改变。结果 PBS处理组小鼠皮肤无脓肿形成,显微镜下皮肤各层结构清楚;感染组和给药组可见到典型的脓肿,临床症状的时相性过程明显,感染组小鼠皮肤真皮层的胶原纤维消失,可见大量炎性细胞浸润,给药组小鼠的脓肿体积在整个实验周期内低于感染组,且在第5天时与感染组相比有差异。结论成功建立MRSA小鼠皮肤脓肿感染模型,该模型的建立可为进一步研究来源于临床MRSA菌株的病原特性、发病机制、治疗方法等提供可靠的动物模型。     

MRSA气溶胶诱导烫伤SKH-1无毛小鼠皮肤感染合并肺炎模型

目的探讨烫伤条件下,建立MRSA气溶胶致SKH-1无毛小鼠皮肤感染合并肺炎模型的方法及其评价指标。方法 48只SKH-1无毛小鼠,随机分成PBS对照组,单纯感染组和烫伤合并感染组。合并感染组小鼠皮肤烫伤后,MRSA（ST-239）气溶胶呼吸道感染,采用体重、血常规、菌血症率、皮肤和脏器荷菌量、病理组织学变化和分子生物学等指标对模型进行综合评价。结果与其他两组相比,合并感染组小鼠第3天体重下降明显;白细胞数显著增多;菌血症率达100%;皮肤和肺荷菌量较高,分别达108CFU/g和106CFU/g;镜下观察皮肤和肺炎症病变明显;免疫组化结果显示皮肤组织内CD138呈阳性表达;multi-PCR测定感染组织内nuc和mecA基因均为阳性。结论 SKH-1无毛小鼠烫伤再辅以MRSA气雾攻击的方式,可成功建立能够模拟临床上烧烫伤患者继发MRSA肺炎的动物模型,此模型对于抗MRSA药物药效评价研究具有重要临床应用价值。     

253株金黄色葡萄球菌耐药现状分析

目的 了解医院金黄色葡萄球菌临床分布情况及其对常用抗菌药物的耐药率,为临床合理使用抗菌药物提供依据.方法 回顾分析医院2010年5月至2011年4月检出的金黄色葡萄球菌,采用VITEK-AMS全自动微生物分析仪进行菌种鉴定和药敏分析.结果 共检出金黄色葡萄球菌253株,菌株的主要来源为痰130株(51.4％)、血液39株(15.4％)、创面24株(9.5％);菌株主要科室分布前3位是神内科35株(13.8％)、ICU30( 11.8％)、脑外科26株(10.3％);其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA)为165株(65.2％),MRSA对多种抗菌药物耐药率＞70.0％,MSSA为88株(34.8％),对除青霉素、红霉素外的大多数抗菌药物敏感,未发现耐万古霉素菌株.结论 MRSA检出率高,耐药现状严重,应加强对金黄色葡萄球菌耐药性的监测,并根据药敏试验结果合理使用抗菌药物.     

百里香酚联合苯唑西林对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物被膜的影响

【背景】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)能以生物被膜的状态存在,从而产生多重耐药性和持续性感染。【目的】通过研究百里香酚和苯唑西林单用和联用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物被膜的形成抑制和清除作用,探究联合用药对MRSA生物被膜的影响,为临床联合应用抗MRSA药物提供理论依据。【方法】采用微量肉汤稀释法测定苯唑西林对MRSA标准菌株USA300的最低抑菌浓度;采用结晶紫染色法和菌落计数法评估百里香酚和苯唑西林单用和联用对USA300生物被膜形成抑制和清除作用。【结果】百里香酚和苯唑西林在亚抑菌浓度下对USA300生物被膜的形成具有一定的抑制作用。在较高浓度下,百里香酚对其24 h和72 h形成的生物被膜有良好的清除作用,而苯唑西林无清除作用。两药联用对生物被膜的抑制和清除作用进一步增强,在较低浓度下有较好的抑制和清除效果。【结论】百里香酚和苯唑西林联合用药与单独用药相比,对USA300的生物被膜的抑制和清除作用增强,两药联合有协同抗菌作用。     

Cloning and sequencing of the gene, fmtC, which affects oxacillin resistance in methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Two Tn551 insertional mutants with reduced methicillin resistance were isolated from methicillin-resistant Staphylococcus aureus KSA8. These two mutants showed increased susceptibility to beta-lactam antibiotics and bacitracin, but not to fosfomycin and vancomycin. Tn551 in these mutants was inserted into the same gene, termed fmtC. The fmtC gene has an open reading frame of 840 amino acid residues with an estimated molecular mass of 96.9 kDa. The N-terminal half of the deduced FmtC protein is very hydrophobic, implying that this protein is a membrane-associated protein.     

金黄色葡萄球菌所致肺部感染的耐药特点及其Panton—Valentine杀白细胞素基因的携带状况分析

目的分析金黄色葡萄球菌所致肺部感染的耐药性特点及其Panton—Valentine杀白细胞素基因的携带状况。方法回顾性调查了温州医学院第一附属医院2005年1月至2006年1月医院感染的金黄色葡萄球菌所致肺部感染患者132例,对其体外药敏试验进行分析;并利用多重PCR检测其PVL基因,应用多位点基因序列分型（multilocus sequence typing,MLST）技术对PVL基因阳性的菌株进行序列分型。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）的SCCmec基因分型采用多重聚合酶链反应。结果致肺部感染的132株金黄色葡萄球菌的耐药现象较为严重,仅对万古霉素、呋喃妥因及复方新诺明等药物的敏感率较高;其中经多重PCR筛选出10株携带PVL基因的金葡菌,全部为MRSA菌株,3株为ST239-SCCⅢ,2株为ST398-SCCmecⅢ,2株为ST398-SCCmecⅣ,ST25-SCCmecⅢ、ST59-SCCmecⅠ和ST88-SCCmecⅢ各1株。结论肺部感染的金黄色葡萄球菌对多种抗生素耐药,呈多重耐药性;其携带PVL基因占一定比例。     

Identification of a fmtA-like gene that has similarity to other PBPs and beta-lactamases in Staphylococcus aureus

We identified a gene from Staphylococcus aureus, flp (fmtA-like protein), encoding a protein of 489 amino acid residues with a molecular mass of 56.4 kDa. The deduced amino acid sequence shows similarity to previously characterized penicillin binding proteins (PBPs) and FmtA of S. aureus (one of the factors which affect methicillin resistance). FLP protein has three motifs, which are conserved in PBPs and beta-lactamases, suggesting that it might be associated with cell wall synthesis. Recombinant FLP protein, however, lacks penicillin binding activity, and the inactivation of flp in two methicillin-resistant S. aureus strains did not cause a reduction in the methicillin resistance.     

A new gel tube method for the direct detection, identification and susceptibility testing of bacteria in clinical samples

We recently developed a simple new method which is designed to separate and concentrate bacteria from a sample by centrifugation in a gel system. Bacterial enzyme activity is then detected inside the gel without further manipulation using a colorimetric or fluorogenic substrate. The method provides a rapid, direct means of detecting bacteria in clinical samples, dispensing with the 24-h period normally required to isolate colonies on agar. Various applications of the method are described below, e.g. screening of negative urine samples, identification of Escherichia coli in urine samples, identification of Staphylococcus aureus in blood culture broths and detection of oxacillin-resistant S. aureus in blood culture broths. The advantages of the gel system and other applications are discussed.