小麦线粒体表面存在肌球蛋白

证明了小麦 (TriticumaestivumL .)线粒体上存在肌球蛋白。通过免疫印迹鉴定发现小麦线粒体蛋白重链与抗体进行交叉反应 ,其分子量略高于动物骨骼肌肌球蛋白的重链 ,经计算 ,该蛋白的分子量为 2 10kD。通过电镜观察到溶液中的F_肌动蛋白可以和NEM (N_ethylmaleimide)处理的线粒体结合 ,并发现F_肌动蛋白可以激活线粒体悬浮液的ATP酶活性 ,证明线粒体外膜的外表面存在肌球蛋白     

草鱼呼肠孤病毒新分离株(GCRV991)的病毒学特性分析

从湖南长沙分离到一株致病性强的草鱼呼肠孤病毒(GCRV991),该病毒能使草鱼CIK,肥头鲤FHM细胞产生明显的CPE,对水生动物BF2,EPC及哺乳动物BHK,VERO细胞株不敏感.中和实验显示,GCRV873抗体能有效地中和GCRV991病毒颗粒,形成抗原抗体免疫复合物.纯化的病毒核酸与蛋白经SDS-PAGE分离,分别呈现11条清晰的核酸带及5条主要与2条微量结构多肽图谱,其核酸蛋白分子量大小与GCRV873相近似.该毒株基因组总分子量为14.48×106kD,大小范围是0.55～2.61×106kD;5条主要与两条微量结构多肽分子量近似值分别为136kD、132kD、65kD、43kD、34kD及138kD、82kD.上述结果提示,新分离的GCRV991与GCRV873具有相似的抗原性.     

蜀柏毒蛾核型多角体病毒结构多肽及基因组酶切分析

对蜀柏毒蛾核型多角体病毒(Parocneria orienta Nuclear polyhedrovirus,简称PaorNPV)形态结构、结构多肽、限制性内切酶图谱等特性进行了研究.采用不连续系统垂直板SDS-PAGE分析了PaorNPV的多角体蛋白、病毒粒子结构多肽.应用5种限制性内切酶对PaorNPV基因组DNA进行了酶切分析.结果表明:经热处理的多角体蛋白仅有一条带,分子量为31.5 kD,不经热处理的多角体蛋白有三条带,分子量分别为31.5 kD、29.1 kD、28.6 kD;病毒粒子包含有25种结构多肽,分子量范围在17.6-114.6 kD之间.PaorNPV DNA经BamH I.EcoR I、HindⅢ、Pst I和Xho I酶切分别产生9、12、12、12和14条片段.基因组大小平均为124.6 kb.     

草鱼呼肠孤病毒新分离株（GCRV991）的病毒学特性分析

从湖南长沙分离到一株致病性强的草鱼呼肠孤病毒 (GCRV991) ,该病毒能使草鱼CIK ,肥头鲤FHM细胞产生明显的CPE ,对水生动物BF2 ,EPC及哺乳动物BHK ,VERO细胞株不敏感。中和实验显示 ,GCRV873 抗体能有效地中和GCRV991病毒颗粒 ,形成抗原抗体免疫复合物。纯化的病毒核酸与蛋白经SDS PAGE分离 ,分别呈现 11条清晰的核酸带及 5条主要与 2条微量结构多肽图谱 ,其核酸蛋白分子量大小与GCRV873 相近似。该毒株基因组总分子量为 14.48× 10 6kD ,大小范围是 0 .5 5～ 2 .6 1× 10 6kD ;5条主要与两条微量结构多肽分子量近似值分别为136kD、132kD、6 5kD、43kD、34kD及 138kD、82kD。上述结果提示 ,新分离的GCRV991与GCRV873 具有相似的抗原性     

三种鲟科鱼类和两种鲑科鱼类卵黄免疫球蛋白性质的比较

从施氏鲟(Acipenser schrencki)、小体鲟(Acipenser ruthenus)、西伯利亚鲟(Acipenser baeri)、哲罗鲑(Hucho taimen)和金鳟(Oncorhynchus mykiss)五种鱼类卵黄中分离、纯化Ig,并对其分子结构进行了初步研究。结果表明:五种鱼类卵中Ig的分子量分别为施氏鲟524kD、小体鲟468kD、西伯利亚鲟475kD、哲罗鲑为490kD,金鳟498kD,其Ig重链的相对分子量相同,约为97kD。轻链的相对分子量各不相同,施氏鲟为27kD,小体鲟28.5kD,西伯利亚鲟30kD,哲罗鲑28.5kD和金鳟16kD。其中西伯利亚鲟、施氏鲟和小体鲟Ig等电点约为5.85,哲罗鲑和金鳟的Ig等电点约为6.55,其蛋白质结构上具有一定的相似性,且均为糖蛋白     

施氏鲟卵黄蛋白原及其相关蛋白的研究

采用凝胶柱层析、聚丙烯凝胶电泳、免疫印迹（Western blotting）和免疫扩散等方法对施氏鲟卵黄蛋白原（Vi-tellogenin,Vg）及其相关蛋白（Yolk protein,YP）进行了研究。结果表明,施氏鲟血清Vg是一种糖脂磷蛋白,其相对分子量为410kD,由分子量为205kD的两个同源亚基组成。Vg的3种相关蛋白YP1、YP2和YP3。其中YP1相对分子量为370kD,是一种糖脂磷蛋白,由相对分子量为97kD和33kD的两个亚基构成。YP2是一种相对分子量为144kD的磷脂蛋白,由相对分子量为94kD和45kD的2个亚基构成。YP3为相对分子量为66kD的磷蛋白,由相对分子量为30kD的同源亚基构成。     

丝瓜肌球蛋白的电子显微学研究

从丝瓜(Luffa cylindrica (L.) Roem.)卷须中纯化得到分子量为174kD的肌球蛋白,并对其进行了酶学与电子显微学的研究.这种肌球蛋白具有肌动蛋白激活的MgATPase活性,能够被抗动物肌肉的肌球蛋白的单克隆抗体识别.电子显微学研究表明:它有两个头部(大小和形状与动物肌肉的肌球蛋白相似)和一条相对较短的尾部.还对丝瓜卷须的肌动蛋白进行了观测,偶尔发现一些尾部有球状结构的肌球蛋白.该肌球蛋白的免疫特性和超微结构证明了它由2条重链组成,并与传统的肌球蛋白相似.然而,这种174 kD的肌球蛋白是否参与了丝瓜的接触卷曲有待于进一步研究.     

热刺激在植物体内的传递效应

以高粱(Sorghum bicolor)和大豆(U.S.Soybean)幼苗为材料研究了仅植物很部受到热刺激时,其未直接受到温度影响的叶组织细胞的反应。当13天龄的高粱幼苗根部经受45℃4小时热处理时,发现其未直接受到热刺激的叶细胞内合成了一些异常的蛋白质,估测的分子量分别为80kD、70kD、33kD和17kD。最明显的两条蛋白质谱带是70kD和17kD。6天龄的大豆幼苗,当其根部经受40℃3小时热处理时,在其叶细胞内也检测到两条较为明显的蛋白质谱带,其分子量分别为60kD和17kD。观测到的这些异常蛋白质命名为‘热应激效应蛋白’,并与热应激蛋白在分子量大小分布上进行了比较。另外,还报道了利用蛋白质合成抑制剂,亚胺环己酮(cyclohexlmide)探讨了热应激蛋白与植物热耐性方面的可能关联。     

蕲蛇蛇毒中一种新型自降解抗凝血酶AA-ACA-I的纯化和表征

利用嗜硫色谱和POROS HQ20离子交换色谱从蕲蛇蛇毒中纯化得到一种新型P-Ⅲ型蛇毒金属蛋白酶（snake venom metalloproteases SVMP) AA-ACA-I.该酶经SDS-PAGE测得分子量为 47.6 kD,含有链内二硫键,加DTT处理后,分子量为50.8 kD,中性糖含量为3.5%,具有出血毒性和抗凝血活性.在70℃和pH 9.0条件下保温60 min,该酶会自降解成分子量30 kD左右的新蛋白,降解得到的新蛋白抗凝血活性高于原蛋白     

抗苯丙氨酸羟化酶单克隆抗体的提纯和轻、重链的N端顺序

利用DEAE-52离子交换层析和FPLC的Mono Q离子交换柱,从鼠的腹水液中提纯抗苯丙氨酸羟化酶单克隆抗体,再利用FPLC的Superose 12凝胶柱分离它们的轻链和重链。经SDS-凝胶电泳,氨基酸组成分析和N端顺序测定,确定轻链的分子量约为24 kD,约含有215个残基,轻链的N端的顺序是:D-V-V-M-T-Q-T-P-L-S-L-P-V-S-L-G-D-Q-A-S-I-S-C-R-S-D?-Q-N(D)-,并确认该轻链为鼠KaPPa轻链Ⅱ型。重链的分子量约为52 kD,它的末端被焦谷氨酰封闭。     

番茄果实中焦磷酸:D-果糖-6-磷酸 1-磷酸转移酶的两种酶型的分离纯化及其特性

用快速蛋白液相层析仪(FPLC)Mono Q柱(HR5/5)分离纯化成熟绿番茄果实中PFP的两种分子酶型及其特性。一种酶型为Q_1,是含两个β-亚基(60kD)的二聚体,比活为5μmol min~(-1) mg~(-1);另一种为Q_2,由四个α-亚基(66kD)和四个β-亚基(60kD)组成八聚体,比活为70.5μmol/min~(-1)·mg~(-1)。Q_1的分子量是120kD,Q_2的分子量介于500kD和530kD之间。用纯化的Q_2制备的抗血清专一地与Q_2起沉淀反应。PFP酶液贮存后,其Q_1/Q_2蛋白量比值增加明显,表明部分Q_2转化为Q_1。Q_1具有催化活力表明PFP的活性中心位于β-亚基。α-亚基可能借增强PFP酶对F2,6P_2的亲和力以提高酶的比活而起调节功能,但是Q_1的活力依赖于F2,6P_2的激活,表明β-亚基处也可能存在F_2,_6P_2的调节位点。Q_2含紧密结合的F2,6P_2分子,并表现出对F2,6P2_的不敏感性,基于此种现象,有必要重新认识PFP对F2,6P_2敏感性的内在实质。     

草菇低温诱导蛋白分离纯化及其部分性质的测定*

采用硫酸铵分级沉淀和制备电泳分离技术,从低温处理过的草菇菌丝中分离纯化得到三种低温诱导蛋白,分别命名为CspDZG1 ,CspDZG2 ,CspDZG3。IEF测定了等电点,分别为3.7,4.4,4.4。SDS-PAGE结果表明,CspDZG1 ,CspDZG2由一条多肽组成,分子量分别为56kD,54.5kD;CspDZG3由两个亚基组成,分子量分别为54.5 kD,68 kD。经S. aureus V8蛋白酶酶解后,测定了N端氨基酸序列。     

白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白的分离纯化及其结构和性质的比较

1.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白在分离纯化上的差异。2.用SDS-PAGE测定分子量,白鲢鱼血清转铁蛋白有两个组份,分子量分别为77kD和70kD;黄鳝血清转铁蛋白为单一组份,分子量为68.1 kD。3.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白都含糖,但都不与ConA-Sepharose柱结合。4.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白氨基酸组成的测定和比较。5.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白用胰蛋白酶在相同条件下进行酶解,白鲢鱼能得到分子量在37kD左右的二个片段,而黄鳝则几乎不能被胰蛋白酶酶解。6.白鲢鱼血清转铁蛋白在404.5nm处有一特异吸收峰,而黄鳝则在407.5nm处。     

海洋红藻和蓝藻中的别藻蓝蛋白结构特征的比较

红毛菜、坛紫菜和条斑紫菜三种海洋红藻中的别藻蓝蛋白的特征吸收光谱(λ_(max)650 nm),荧光发射光谱(F_(max)662nm)、等电点(pI 4.42)、聚集态(分子量:134 kD)及其亚基分子量(α17kD,β18.5kD)均相同;结合它们各自吸收光谱的二阶导数光谱、圆二色谱和氨基酸残基组成等,与蓝藻--螺旋藻中的别藻蓝蛋白进行了比较。研究结果表明:四种来源不同的别藻蓝蛋白结构具有同一性,都是由α和β两个亚基组成的(αβ)_3结构。     

应乐果甜蛋白及其基因工程

应乐果甜蛋白（monellin)是一种分子量为10.7kD的超甜蛋白。由A,B两条链组成,其中A链44个氨基酸,B链50个氨基酸。分子内有5个反向平行的β折叠链和一个α螺旋。实验表明,Asp^B7可能是应乐果甜蛋白的甜味活性中心。此外,Cys^41,Ca^2 等对应乐果甜蛋白的甜味也会产生影响。研究人员把应乐果甜蛋白的单链类似物相断转入大肠杆菌,土豆,莴苣和酵母中,得到了具甜味,稳定性和耐受力强的表达产物。     

黑皮扁豆凝集素提纯及部分性质研究

采用NaCl抽提、硫酸铵分部沉淀和2步离子交换法从黑皮扁豆中纯化得到一种甘露糖专一凝集素(DPL)。在非变性电泳中纯化的DPL只有一条蛋白带,在还原及非还原条件下的SDS-PAGE中呈现两条蛋白带,其分子量分别为36．8kD和39．8kD;利用FPLC经Sephacryl S-300凝胶过滤测得其表观分子量为155kD,表明DPL由2个α亚基和2个β亚基组成,无二硫键。DPL的等电点为pH6．18,含1．6％糖,为酸性糖蛋白。DPL的热稳定性和pH稳定性,与已报道的甘露糖/葡萄糖专一的豆科凝集素相似。     

丝瓜肌球蛋白的电子显微学研究

从丝瓜 (Luffacylindrica (L .)Roem .)卷须中纯化得到分子量为 174kD的肌球蛋白 ,并对其进行了酶学与电子显微学的研究。这种肌球蛋白具有肌动蛋白激活的MgATPase活性 ,能够被抗动物肌肉的肌球蛋白的单克隆抗体识别。电子显微学研究表明 :它有两个头部 (大小和形状与动物肌肉的肌球蛋白相似 )和一条相对较短的尾部。还对丝瓜卷须的肌动蛋白进行了观测 ,偶尔发现一些尾部有球状结构的肌球蛋白。该肌球蛋白的免疫特性和超微结构证明了它由 2条重链组成 ,并与传统的肌球蛋白相似。然而 ,这种 174kD的肌球蛋白是否参与了丝瓜的接触卷曲有待于进一步研究。     

草菇低温诱导蛋白分离纯化及其部分性质的测定

采用硫酸铵分级沉淀和制备电泳分离技术,从低温处理过的草菇菌丝中分离纯化得到三种低温诱导蛋白,分别命名为CspDZG1,CspDZG2,CspDZG3。IEF测定了等电点,分别为3．7,4．4,4．4。SDS-PAGE结果表明,CspDZG1,CspDZG2由一条多肽组成,分子量分别为56kD,54．5kD;CspDZG3由两个亚基组成,分子量分别为54．5kD,68kD。经S.aureus V8蛋白酶酶解后,测定了N端氨基酸序列。     

小麦低分子量麦谷蛋白亚基与面团流变学特性关系的研究

采用十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离方法,以牛血清蛋白(67kD)和卵清蛋白(43kD)为分子量标记,对甘肃河西灌区近几年选育的17个小麦品系以及大面积栽培的2个春小麦品种的低分子量麦谷蛋白亚基组成以及不同亚基对面团流变学特性(面团韧性P、延伸性L、面团筋力W)的影响进行分析。19个试验材料中共标记出从35．2～60．5kD的LMW-GS共32条谱带;通过单因素方差分析(ANOVA)和逐步回归分析确定出对面团流变学特性P、L、W值影响显著的7个LMW-GS,分子量由高到低为：52．7kD、52kD、49．3kD、46．7kD、44．8kD、44．2kD、35．2kD。其中35．2kD和46．7kD亚基能显著地增加面团P值,44．8kD亚基能显著地降低面团P值;44．2kD和49．3kD亚基显著增加面团L值,52．7kD亚基降低面团L值;44．8kD、52．7kD亚基能显著降低面团的W值,52．0kD和46．7kD亚基能显著提高面团W值。     

嗜水产气单胞菌诱导的草鱼免疫球蛋白分析

取草鱼经嗜水产气单胞菌疫苗免疫,获免疫血清分两组,一组样品经饮和硫酸铵分级沉淀,秀析和电泳分析,另一组经Sephadex G-200柱层析分离及电泳分析,各分离样品经特异性集活性测定,发现沉淀分离组样品中抗体凝集活性最强的主要为35％饱和硫酸铵沉淀的组分,而柱层析分离组样品的凝集抗体主要集中在第一个洗脱蜂里。在电泳图谱中,各免疫组均比对照组增加了一条大分子B带,分子量为309kD左右,后者经变性电泳分离表现为两条区带,相对分子量分别为52kD和26KD。因而推测它们是单体IgG解离的重链和经链,而聚集在B带的是IgG的聚合形式IgM。