甲胎蛋白(AFP)对正常人淋巴细胞的作用

在胚胎期和某些疾病情况下大量合成 AFP究竟起什么生理功能,这是近年来 AFP 研究中比较引人注目的一个方向,也是 AFP研究中尚待介决的一个问题。我们试图以体外细胞免疫方法探讨 AFP 对正常人淋巴细胞的作用。材料方法1.血清处理:无菌收集混合脐带血清(含 AFP50微克/毫升),一份过滤灭菌保存     

甲胎蛋白在肝癌的诊断和治疗中的研究进展

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是致死率第3的恶性肿瘤,也是全球第5大常见癌症。肝癌在临床上的治疗手段非常有限,患者的总生存率也很低。因此,肝癌的早期诊断和治疗对于患者总生存率有着重要的影响。甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)是最早发现也是目前应用最广泛的肝癌标志物之一。目前,多项研究表明,作为一个特异性的癌基因,AFP在肝癌的发生、发展、诊断和治疗中有巨大的研究价值。文中简述了AFP在肝癌发生发展中的分子调控机制以及在肝癌细胞逃避免疫监视中的作用,着重阐述AFP作为重要的肝癌靶标分子在肝癌的临床诊断和治疗研究中的应用。     

小鼠甲胎蛋白基因的扩增及其mRNA相对含量的测定

甲胎蛋白(AFP)是一个癌胚性蛋白,已被广泛用于肝癌早期诊断。近几年的研究发现,血清中AFP水平的升高,主要是由于肝细胞中AFP的信使核糖核酸(mRNA_(AFP))的量增加,即是由于AFP基因转录水平升高,而不是mRNA_(AFP)翻译活性升高所致。在肝癌发病机理和肝癌治疗研究中,人们逐渐将注意力集中在AFP基因调控的研究上,试图从整体或离体试验中,找出影响AFP基因表达的有关因子或药物,并已取得了一定进展。在转录水平上研究AFP基因调控,首先要解决mRNA_(AFP)的定量测定技术,应用互补于mRNA_(AFP)的单链DNA(cDNA)作探针,通过液相杂交进行测定是目前应用最普遍,也是最准确的方法。     

乙型肝炎病毒驱动甲胎蛋白表达诱导肝细胞恶性转化的分子机制

肝癌细胞的恶性转化与感染乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）和丙型肝炎病毒密切相关．但是HBV没有直接诱导肝癌发生的生物学功能,HBV可通过其x蛋白（HBx）激活生长信号,促进癌基因的表达从而诱导肝细胞恶性转化．在肝细胞恶性转化过程的早期,甲胎蛋白（alpha fetoprotein, AFP）基因被激活,而AFP能激发PI3K/AKT信号传递,由于PI3K/AKT信号途径具有促进细胞恶性转化的作用,所以AFP的表达在HBV诱导肝细胞恶性转化过程发挥关键性作用．本文就HBV通过优先驱动AFP表达促进肝癌细胞增殖和自然重编程从而诱发肝癌的分子机制进行阐述,对认识AFP在HBV相关性肝癌发生过程中的作用以及预警肝癌发生有重要的科学意义．     

DAB致大鼠肝癌过程中免疫组化及免疫电镜研究

本文采用二甲氨基偶氮苯(DAB)诱发的大鼠肝癌模型,运用组织病理学、血清学、免疫组化及免疫电镜技术相结合的方法,对诱癌过程中各个不同时期肝脏的组织病理学变化及肝癌阳性标志物AFP的表达进行了动态观察。结果显示:早在血清AFP浓度上升和由卵圆细胞转变而来的小肝细胞表达AFP之前,肝小叶中就出现了散在的AFP阳性肝细胞,我们认为这种AFP阳性肝细胞可作为肝细胞癌前病变的早期征象之一。在AFP阳性的肝细胞内,AFP主要定位于核周间隙、粗面内质网和高尔基复合体。     

AFP-L3蛋白芯片的建立与应用

目的:建立一种可同时检测血清中甲胎蛋白(AFP)及甲胎蛋白异质体(AFP-L3)的蛋白芯片方法,为AFP-L3检测提供经济、便捷、省时、有效的新途径。方法:将鼠源AFP单克隆抗体和小扁豆凝集素点样固定在醛基玻片上,制备出AFP抗体和小扁豆凝集素蛋白芯片。利用抗原抗体特异性结合以及盐藻糖与小扁豆凝集素特异性结合的原理,用蛋白芯片方法检测血清样本中的AFP和AFP-L3。结果:肝癌血清39份,其中37份检测到AFP;26份肝癌血清中同时检测到AFP和AFP-L3,2份肝癌血清均未检测到AFP和AFP-L3。肝细胞癌组血清样本中AFP和AFP-L3水平明显高于健康对照组(P0.001),健康对照组与空白对照组统计学上无差异(P0.05)。结论:本研究成功地建立AFP和AFP-L3同时检测的蛋白芯片方法,与ELISA法和凝集素微量离心柱法相比,是一种切实可行,经济、便捷、省时、有效的方法。     

高尔基体蛋白73与肝癌诊断

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,血清甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)检查是目前肝癌诊断最常采用的手段,但血清AFP对肝癌诊断的灵敏度和特异性均不理想,因此,临床上迫切需要更理想的肝癌标志物。高尔基体蛋白73(Golgi protein 73,GP73)是一种II型高尔基体跨膜糖蛋白,与肝炎、肝硬化和肝癌等肝病的发生、发展密切相关,GP73对肝癌诊断的灵敏度和特异性为65%和90%,而核心岩藻糖化GP73对肝癌诊断的灵敏度和特异性则高达90%和100%。GP73有可能成为一种更理想的肝癌临床诊断标志物,而核心岩藻糖化的GP73在肝癌的早期诊断中可能具有更重要的意义。     

血清AFP、CEA与肝癌患者临床病理分期和预后的关系及其诊断价值分析

目的:探讨血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)与肝癌患者临床病理分期和预后的关系及其诊断价值。方法:选取2010年3月至2014年4月期间我院就诊的90例肝癌患者作为肝癌组,并选择同期在我院进行体检的90例健康体检者作为健康组。统计两组的血清AFP、CEA水平及阳性率,比较不同TNM分期肝癌患者的血清AFP和CEA水平。分析肝癌患者的5年无复发生存率以及血清AFP和CEA水平对肝癌的诊断价值。结果:与健康组相比,肝癌组血清AFP、CEA水平及阳性率明显升高(P0.05)。Ⅳ期血清AFP和CEA水平最高,其次Ⅲ期,Ⅱ期次之,Ⅰ期最低(P0.05)。血清AFP、CEA阳性患者5年无复发生存率明显低于血清AFP、CEA阴性患者(P0.05),血清AFP、CEA联合诊断具有较高的敏感性和特异性。结论:肝癌患者的血清AFP和CEA水平升高,并随TNM分期增加而上调。血清AFP阳性以及CEA阳性患者的5年无复发生存率明显下降,血清AFP联合血清CEA检测在肝癌诊断中具有一定的临床价值。     

甲胎蛋白携带药物靶向治疗肿瘤

甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)是一种在胎儿发育时期高表达的蛋白质,它又是一种穿梭蛋白质,能够将营养物质输送给胚胎细胞.相似的是,在肝癌等恶性肿瘤发展时期,肿瘤细胞也高表达AFP及其受体,它们通过AFP受体摄取AFP及其运载的物质.因此,可以将AFP与抗癌药物结合,选择性攻击肿瘤细胞.AFP与药物...     

血清miR-21 及AFP 在大鼠肝癌发生过程中的动态表达比较分析

目的:分析血清miR-21在肝癌发生过程中的表达水平并将其与传统肝癌血清标志物甲胎蛋白(AFP)比较,探索其成为肝癌早期诊断血清标志物的可能性。方法:二乙基亚硝胺(DENA)腹腔注射诱导建立大鼠肝癌模型,建模过程中收集造癌各个阶段的血清。Realtime-PCR检测血清miR-21的表达情况,ELISA法检测血清AFP水平。结果:与正常组及纤维化期大鼠相比,miR-21在肝硬化期、肝癌早期、肝癌晚期的大鼠血清均有不同程度上调(P<0.05),AFP在肝癌早、晚期的大鼠血清明显上调(P<0.05);与肝硬化期大鼠比较,肝癌早、晚期大鼠体内的miR-21表达显著上调(P<0.05),AFP在肝癌早期、肝癌晚期均显著上调(P<0.05)。结论:血清miR-21参与了肝癌发生的过程,对于肝癌发生的各个阶段均有很大的指示作用,可能作为肝癌预防和早期诊断的一个潜在标志物。     

血管内皮生长因子蛋白在大鼠睾丸和附睾的表达和定位研究

为探讨血管内皮生长因子(VEGF)在雄性生殖系精子发生发育和成熟过程中的调控作用,应用免疫组化、Periodic acid-Schiff(PAS)染色及蛋白质免疫印迹技术,检测VEGF蛋白在成年大鼠睾丸和附睾的表达和定位情况。Western-blots显示,在大鼠睾丸和附睾内均有VEGF蛋白(约45kD)的表达;免疫组化显示,睾丸内VEGF见于圆形和长形精子细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞,免疫阳性产物位于细胞质内。精子细胞的VEGF表达伴随精子细胞顶体发育的全过程,精子残余体呈强阳性。附睾内VEGF表达于附睾管上皮,且有区域和细胞特异性。附睾起始段的所有上皮主细胞内都有VEGF阳性颗粒;头、体、尾各段的VEGF阳性细胞多数与含PAS阳性颗粒的细胞重合,证明为亮细胞;近端附睾的管腔内可见精子头部呈VEGF阳性染色。睾丸、附睾间质血管内皮为VEGF阴性。上述结果表明,VEGF蛋白可由生殖细胞和附睾管上皮细胞直接产生,它可能以自分泌和/或旁分泌的形式共同作用于睾丸和附睾的生殖细胞和血管内皮,直接或间接影响精子的发生、发育和成熟过程,特别是精子顶体的形成过程,并可能与精子在附睾内的成熟有关。     

乙酰胆碱及其拮抗剂对人SK-N-SH细胞增殖及mAchR1表达的影响

用CCK-8比色法和流式细胞术,检测乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）及拮抗剂阿托品（atropine,Atro）对SK-N-SH细胞增殖活性和周期分布的调节作用;进一步用荧光定量PCR、免疫印迹和流式细胞间接免疫荧光技术,分析SK-N-SH细胞毒蕈碱受体亚型Ⅰ型（mAchR1）和c-fos的表达差异。结果表明,1mmol／L Ach对SK-N-SH细胞有明显促增殖作用,而1mmoL／L Atro阻滞细胞从S期向G2／M期移行;1mmol／L Ach与1mmol／L Atro均反馈调节mAchR1的蛋白水平。但mAchR1 mRNA的表达不受影响;1mmol／L Ach显著上调c-fos mRNA和Fos蛋白的表达,但这种作用可被Atro逆转。提示胆碱类受体参与配基对肿瘤细胞的促增殖作用。     

重组人pLXSN-CD80逆转录病毒载体的构建及在CHO和PA317细胞中的表达

CD80是表达于抗原提呈细胞表面的分化抗原,它提供T细胞活化的协同刺激信号,并在抗肿瘤免疫应答中起着重要作用。我们在克隆了CD80全长。cDNA的基础上,将其与逆转录病毒pLXSN表达载体连接,构建成表达质粒,并用磷酸钙沉淀法将其转染PA317和CHO细胞,经G_(418)筛选获得抗G_(418)的PA317和CHO细胞克隆。以RIA,FACs和Westernblot检测CD80分子在PA317和CHO细胞上的表达、分布和分子量,结果显示,pLXSN-CD80转染的CHO细胞可表达较高丰度的CD80分子,其表观分子量为40kD。pLXSN-CD80转染的PA317和CHO细胞经5个月连续传代培养,无论存在G_(418)的选择压力与否,仍然持续表达CD80分子,表明我们构建的pLXSN-CD80表达载体具有应用于试验性治疗的潜能。     

纽带蛋白及其与微丝和膜结合的研究

 用落球粘度计测量低剪切粘度的方法研究了纽带蛋白-肌动蛋白的相互作用。与以前关于纽带蛋白可使肌动蛋白粘度降低并推测它抑制微丝间相互作用的报道不同,10—50μg/ml的纽带蛋白引起肌动蛋白细丝溶液粘度略有增加。电镜观察表明,由于纽带蛋白的作用,肌动蛋白丝聚集成束。 远紫外圆二色谱显示,在pH7.0下,220和207nm处呈双负峰,190nm处有一正峰。按三波长法计算,其α螺旋和β折叠含量分别占41％和22％。研究了pH,磷脂和去垢剂对其构象的影响。疏水性结合的和水溶性的纽带蛋白相比,存在少量构象差别。联系这一蛋白处在细胞骨架与质膜相联系的特殊位置,推测在体内,纽带蛋白与脂结合后也可能发生类似的构象变化。     

大鼠肝和肝癌DNA及其限制性酶切图谱分析

大鼠肝和肝癌BERH-2 DNA的EcoR Ⅰ,BamH Ⅰ,HindⅢ和Pst Ⅰ,以及EcoR Ⅰ分别与BamH Ⅰ或HindⅢ或Pst Ⅰ组合双酶合切的电泳图谱间无明显差异;双向凝胶电泳重复顺序图谱也近似。在一定实验条件下,大鼠肝癌BERH-2 DNA在凝胶电泳上,除去显示EB荧光主带外,还有呈现阶梯大小的片段。最小片段为270bp,两电泳相邻片段间的长度差约为160bp,并且能与标记的核RNA起杂交反应。对实验结果进行了讨论。     

凹叶厚朴大、小孢子发生和雌、雄配子体发育的研究

凹叶厚朴花药四囊型,腺质绒毡层有1-2层细胞,小孢子形成时胞质分裂方式为修饰性同时型,小孢子四分体排列方式为左右对称型．成熟花粉粒为二细胞型。四分体和小孢子在发生时有不规则变形。子房单心皮,心皮腹面壁上着生2个胚珠,胚珠倒生型,厚珠心,双珠被;孢原细胞一个,并且自表皮下第2层细胞处分化。胚囊发育为单孢蓼型。凹叶厚朴的胚胎学特征与木兰科其它植物的胚胎学特征基本相同,属于较原始的被子植物胚胎类型。在凹叶厚朴大、小孢子发生和雌、雄配子体发育过程中存在部分败育现象。本文初步探讨了凹叶厚朴濒危的生殖生物学原因。     

凹叶厚朴大、小孢子发生和雌、雄配子体发育的研究

凹叶厚朴花药四囊型,腺质绒毡层有1-2层细胞,小孢子形成时胞质分裂方式为修饰性同时型．小孢子四分体排列方式为左右对称型,成熟花粉粒为二细胞型。四分体和小孢子在发生时有不规则变形。子房单心皮。心皮腹面壁上着生2个胚珠,胚珠倒生型,厚珠心,双珠被;抱原细胞一个,并且自表皮下第2层细胞处分化。胚囊发育为单孢蓼型。凹叶厚朴的胚胎学特征与木兰科其它植物的胚胎学特征基本相同,属于较原始的被子植物胚胎类型。在凹叶厚朴大、小孢子发生和雌、雄配子体发育过程中存在部分败育现象。本文初步探讨了凹叶厚朴濒危的生殖生物学原因。     

曲霉及其有性型散囊菌的新分类群和新记录种

在收集和分离我国曲霉工作中,发现一个国内新纪录和三个新分类群:1.埃及曲霉,国内新记录。2.合阳曲霉新种,与爪甲曲霉相近,但颜色和具刺不育菌丝有所不同。3.温特曲霉烟色变种,与原变种的主要区别在于颜色为蓝灰色并具异常膨大的梗基。4.瘤突散囊菌新种,其子囊孢子的纹饰独特,凸面具粗疏瘤状突起。     

人体肝癌细胞和HeLa细胞中等纤维的比较研究

本文用兔抗角蛋白抗体、豚鼠抗波形纤维蛋白抗体和抗角蛋白单抗AE1的间接免疫荧光抗体法比较了两个人体肝癌细胞系(BEL-7402和BEL-7404)和HeLa细胞中等纤维的分布式样,同时用SDS-PAGE法分析了上述细胞的中等纤维抽提物的多肽组成。结果表明:三种上皮细胞均含有两套不同类型的中等纤维系统:角蛋白纤维和波形纤维。但是,人体肝癌细胞和HeLa细胞的中等纤维分布式样和角蛋白多肽组成均有明显的差别。其中最明显的差别是HeLa细胞具有丰富的桥粒-张力纤维复合物和分子量为40 kd的角蛋白多肽,而在两个人体肝癌细胞系中看不到。     

鹿科动物的染色体组型及其进化

染色体是遗传物质的主要携带者。在动植物进化过程中,染色体在数量和结构上的变化,无疑对物种形成起重要的作用。染色体的变化往往引起基因的重新排列和遗传物质的增加或丢失。染色体在结构和数量上的差异还往往造成两个本来很相近的群体间的生殖隔离而形成新种。染色体组型和染色体的带型都代表着种的特性,它为不同动物在分类研究和确定其在进化过程中的位置提供了一个新的和重要的标准。可是,染色体的结构既是稳定的,同时又是可变的。染色体组型的改变是以染色体组的结构特点为基础