端粒结合蛋白与端粒长度调节

端粒结合蛋白与端粒长度调节郑晓飞王升启孙志贤（军事医学科学院放射医学研究所,北京１００８５０）关键词端粒端粒结合蛋白端粒是真核细胞染色体的末端序列,其功能是保持染色体的稳定性。端粒ＤＮＡ的长短和稳定性决定了细胞的寿命,并与细胞的癌变和衰老有关。端粒Ｄ...     

端粒结合蛋白与端粒长度调控

真核细胞端粒DNA序列的丢失与细胞的衰老及凋亡有关.端粒酶的激活可维持端粒长度并使细胞获得无限增殖的能力.端粒结合蛋白则可能通过调节端粒酶或其他相关因子的行为参与对端粒长度的调控.近年有关端粒结合蛋白的研究取得了突破性进展并在此基础上建立了端粒长度调控模型.     

荧光定量PCR测定端粒长度

目的应用实时荧光定量聚合酶链式反应（Q—PCR）方法测定端粒长度。方法选取9种人类细胞株,提取基因组DNA,采用Q—PCR方法测定相对T／S比率,DNA印迹法测定末端限制性片段（TRF）长度,进行二者之间的相关性分析。结果定量PCR测定端粒长度相对T／S比率为0．68±0．57,DNA印迹法测量平均TRF值为8．57±2．34,两种方法测定结果的相关性分析R2=0．7807（P〈0．01）。结论采用荧光定量PCR方法测量端粒长度具有重复性好、省时、简便、可靠的特点,可高通量处理大量样品。     

影响扬子鳄产蛋量的因素分析

1997～2006年对安徽省扬子鳄繁殖研究中心内的扬子鳄亲本、F1代和F2代繁殖鳄群体在冬眠环境条件、采食量、年龄等方面进行观察,对各代繁殖鳄的年产蛋数量进行统计。用SPSS11.0软件中的one-way ANOVA方法分析比较人工饲养鳄各代群体之间及人工饲养鳄与野生鳄群体之间年产蛋数量的变化关系,结果显示区域内扬子鳄所建造的洞穴数量和其所建造洞穴的质量决定着圈养鳄的冬眠质量,鳄的冬眠质量影响到鳄体内的性腺系统正常发育,最终影响扬子鳄次年能否参加产蛋;年采食量影响鳄的产蛋数量。通过第1、2、5年间产蛋量F值检验(F值=4.866,P=0.009<0.05),得出圈养条件下扬子鳄的产蛋数量是随着产龄的增加而呈增长的趋势。     

2龄前扬子鳄肠道的年龄结构变化

光镜下,用组织学和组织化学的方法对四个不同年龄段扬子鳄不同肠段进行了研究。扬子鳄肠道长度随年龄增大而增加,相对长度从初生至８月龄逐减,从８月龄至２龄增大。肠道各项组织学参数绝对值均年龄增长而增加,相对值从初生至５月龄变化很大,５月龄至２龄变化不明显。     

端粒长度调控及端粒与衰老和疾病的关系

端粒是线性染色体末端的DNA-蛋白质结构,可保护染色体末端免于降解和融合。由于大多数体细胞中存在末端复制问题和端粒酶缺乏的固有限制性,端粒DNA随着细胞每次分裂而缩短。短端粒或功能失调的端粒可诱导持续的DNA损伤反应,从而触发细胞复制性衰老。端粒长度主要通过端粒酶和端粒替代延长途经2种端粒机制维持。此外,端粒DNA还会被转录,生成含有端粒重复序列的RNA(telomeric repeat-containing RNA,TERRA),积极参与端粒维持和染色体末端保护。端粒长度是一种复杂的遗传特征,受遗传、疾病和环境因素的影响。流行病学数据显示,端粒长度与衰老、癌症、端粒生物学疾病及多种衰老相关疾病之间存在不同程度的关联。随着端粒长度检测方法的不断发展,血细胞端粒长度作为人类衰老生物标志物和衰老相关疾病的危险因素得到了广泛研究,具有作为生物标志物的潜力。     

定量荧光原位杂交测定端粒长度

目的:应用定量荧光原位杂交(Q-FISH)方法测定端粒长度。方法:选取4种端粒长度均一的标准细胞株采用Q-FISH的方法做出荧光亮度与端粒长度的标准曲线,从而得出实验细胞株的端粒长度,与DNA印迹法测定末端限制性片段(TRF)长度进行二者之间的相关性分析。结果:检测荧光强度的最佳线性曝光时间为400ms,相对于DNA印迹法,定量荧光原位杂交(Q-FISH)法所需标本量少,实验周期短,端粒长度结果与Southern杂交法具有很好的相关性。结论:采用定量荧光原位杂交方法测端粒长度具有重复性好、精确可靠的特点,适用于对珍贵标本的端粒改变进行分析。     

扬子鳄的营养成份初步分析

对扬子鳄肌肉、脂肪及血粉有关营养成份作了较全面分析检测。结果表明鳄肌肉和血粉中粗蛋白含量高,且含氨基酸种类齐全和多种必需微量元素,其营养丰富,生物学价值高;鳄贮脂中不饱和脂肪酸占总脂肪酸的７１４％,富含多种高级不饱和脂肪酸,其营养价值高于其他兽类油,具有保健作用。     

端粒长度及端粒酶活性与儿童先天性心脏病发病机制的相关性研究

目的:探讨不同年龄儿童外周血白细胞端粒长度及端粒酶活性与儿童先心病发病机制的相关性.方法:采用实时荧光定量PCR检测先天性心脏病2个年龄组及健康受试者外周血白细胞的端粒长度及hTERT mRNA(端粒酶催化亚基).比较相同年龄的先天性心脏病与健康受试者外周血白细胞的端粒长度及hTERT mRNA差异,并比较不同年龄组间外周血白细胞的端粒长度及hTERT mRNA差异.结果:先天性心脏组3-6岁组的受检者及健康受试者3-6岁组平均外周血白细胞端粒(1.63± 0.61)长于先天性心脏组7-10岁组的受检者及健康受试者7-10岁组(1.36± 0.46)(t=1 1.37,P＜0.05);各组均无端粒酶表达.结论:外周血白细胞的端粒长度随着年龄的增长而缩短.端粒酶活性与先天性心脏病发病并无直接相关性.     

人细胞端粒DNA复制与长度维持

端粒位于染色体末端,由短的串联重复DNA片段及其结合蛋白组成。端粒在维持基因组稳定性及染色体结构完整性方面发挥着重要作用。端粒DNA由富含G/C的序列构成,包括双链区及G含量高的3'悬垂单链区(G-overhang,G-tail)。端粒DNA能够形成G四联体(G-quadruplex)和T环(T-loop)等高级结构。许多与DNA损伤修复相关的蛋白质参与端粒DNA的复制与端粒结构的维持,并相对于基因组的其他区域,端粒的DNA复制较为特别,从广义上讲,端粒DNA的复制可以包括双链复制(telomere replication),端粒酶复制延伸(telomerase extension)和C链补齐(C-rich fill-in)。端粒双链复制引起的端粒长度缩短是导致人体细胞衰老的重要原因,而端粒酶复制延伸及C链补齐是干细胞及肿瘤细胞维持其端粒长度及持续分裂能力的主要途径。端粒复制及其结构功能研究是生物医学领域的一个重要热点,阐释端粒复制的机理将为疾病预防及治疗等提供新的思路。     

硅对PCR过程的抑制作用研究

探讨不同氧化程度的硅材料对PCR扩增的抑制作用及其机理。将不同氧化程度的硅纳米颗粒加入PCR反应液中,使其与Taq酶、模板等充分接触,通过离心将硅纳米颗粒沉降在管壁上,取出上清或保留硅纳米颗粒上机扩增,扩增产物采用凝胶电泳法检测。结果表明,随着硅材料表面面积与PCR反应液体积之比的增大,核酸扩增效率将明显下降,并且在所研究的范围内,氧化程度高的硅材料对PCR过程抑制作用更强;通过对抑制作用机理进行初步的实验研究,表明硅材料对PCR反应液中的Taq酶的吸附是导致抑制现象产生的主要原因,而对模板的吸附影响较小;并且,反应管内是否保留硅材料对核酸扩增影响较小,硅材料没有明显的直接化学抑制作用。     

用甲酰胺提高多聚酶链式反应的特异性、灵敏度和效率的研究

在多聚酶链式反应体系中加入甲酰胺可以有效地抑制非特异性扩增,提高特异性扩增,并使反应的灵敏度提高一个数量级。     

相关序列扩增多态性(SRAP)标记及其应用研究进展

SRAP是一项基于PCR技术的分子标记技术,利用其独特的引物设计对基因组的开放阅读框(ORFs)进行特异扩增,利用个体以及物种的内含子、启动子和间隔序列的不同,产生基于内含子和外显子的SRAP多态性。阐述了SRAP的原理和流程,详细论述了SRAP标记目前在植物遗传多样性、作物品种鉴定、遗传图谱构建等方面的研究进展及应用前景。     

PCR在慢性宫颈炎HSV感染研究中的应用

ＰＣＲ在慢性宫颈炎ＨＳＶ感染研究中的应用蔡红,姚,季晓辉,周瑶玺（南京医科大学微生物学教研室,南京２１００２９）关键词多聚酶链反应,单纯疱疹病毒,宫颈炎单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）被认为与宫颈癌有关。目前生殖道ＨＳＶ感染日渐升高,日益引起人们的重视。由于药...