脊髓提取液对培养脊髓神经细胞中GABA能及DYN能神经元突起生长的影响

本文以体外培养的小鼠脊髓神经元为模型研究了人胚脊髓提取液对Ｅ１２－１５小鼠脊髓中ＧＡＢＡ能神经元和ＤＮＹ能神经元的突起生长的营养作用,结果发现人胚脊髓提取液在蛋白浓度为２５０μｇ／ｍｌ时对ＧＡＢＡ能神经元的突起生长无营养作用,但对ＤＮＹ能神经元的突起生长有显著的促进作用。提示了人胚脊髓提取液中有促进神经元突起生长的营养物质,且对特定胎龄的不同的神经元有不同的作用。     

大鼠大脑皮质神经元原代培养不同培养体系及纯化方法的比较研究

目的:比较两种大鼠大脑皮质神经元的培养及纯化方法不同组合的优劣,探讨科学可靠的神经元培养纯化方法。方法:采用DMEM/F12+血清的有血清培养体系和神经基础培养基(Neurobasal)+B27的无血清培养体系培养原代神经元。在接种3天后分别采用加入阿糖胞苷和5-氟脱氧尿嘧啶两种方法进行神经元的纯化。在1天、3天、7天采用形态学及7天时免疫荧光化学法鉴定神经元的纯度及生长状态。结果:1天、3天时,有血清培养体系和无血清体系中的神经元的形态结构和密度无明显差别,在分别加入阿糖胞苷和5-氟脱氧尿嘧啶后,7天时无血清体系中加阿糖胞苷组细胞密度明显低于其他三组细胞密度。通过免疫荧光化学法鉴定可见无血清体系中的神经元纯度明显高于有血清体系。结论:有血清体系的神经元纯度较差,阿糖胞苷和5-氟脱氧尿嘧啶不能显著抑制胶质细胞等杂细胞的生长。无血清培养体系加阿糖胞苷的神经元细胞受损较多,无血清培养体系加5-氟脱氧尿嘧啶纯化培养的大鼠大脑皮质神经元,纯度较高,细胞数量合适,是体外研究神经系统相关理论的良好模型。     

人脑神经元特异性烯醇化酶的纯化方法

采用改良的Grace层析方法,经一次DEAE-Sephadex A50柱层析即从人脑中纯化了神经元特异性烯醇化酶,比活力为92.1U/mg,纯化倍数为59.4.该酶纯化后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一蛋白质谱带.此外,还测定了其部分理化性质,其亚单位分子量为45000,等电点pI为4.7,氨基酸组成分析表明其为一种酸性蛋白质;对2-磷酸甘油酸的K_m值为5.6×10^-4mol/L.     

GDAF对原代培养脊髓神经元的影响

The effect of GDNF on long-term cultured spinal cord neurons was studied. GDNF could promote spinal cord neurons survival after 7 d or 14 d culture by MTT assay. The effect of GDNF on growth cones, neuron soma magnitude, neurite length and spines formulation of spinal cord neurons in cell culture was observed by phase microscopy, Nissl stain and NSE immunocytochemistry stain. The results indicated that GDNF had significant trophic effects on long-term cultured spinal cord neurons.     

缺血诱导体外培养海马神经元损伤机理的探讨

缺血性神经元损伤的机理是神经科学领域极为关注的问题。本实验用体外培养海马神经元建立缺血模型,通过检测神经元死亡率以及观察由缺血引起的神经细胞内生化代谢改变所致的神经元功能障碍,探讨缺血性神经元损伤的机理。结果发现缺血组、缺葡萄糖组神经元死亡率最高,且通过检测细胞膜表面磷脂酰丝氨酸的变化证实此二组神经元凋亡率也最高,进一步研究还发现缺血可引起神经元细胞骨架结构改变,使神经元功能遭到破坏,最终导致神经元不可逆损伤。     

胚胎神经细胞的培养方法与应用

体外胚胎神经细胞培养与在体神经细胞在神经发育生物学的研究中相辅相承，不断推动神经科学的发展。神经细胞原代培养涉及神经细胞的分离纯化、培养基的成分及观测方法等。本文对国内外近年来胚胎神经细胞的培养方法及应用进行了简单的综述。     

脊髓和脊神经节原代分离培养中GABA能神经元的形态观察

选用１２－１４天胚胎小鼠（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）,取脊髓及脊神经节原代培养。观察神经元的发育并用ＧＡＢＡ抗血清、ＰＡＰ方法显示ＧＡＢＡ能神经元。脊髓神经元呈各种形态大小,随着培养的进行它们的起和胞体不断生长;脊神经细胞有不同大小,其体积在培养中保持恒定。随着神经元的逐渐成熟,它们的核质比不断增大。ＧＡＢＡ免疫细胞化学阳性脊髓神经元大小不等,可分为两类：１．突起和胞体阳性,核不着色而核仁着色;２．只在突     

多巴胺能神经元的体外培养及其纯度鉴定

目的通过建立体外培养的多巴胺能神经元模型,应用于帕金森病(PD)的病因和发病机制等基础研究.方法用孕14d的胎鼠中脑嘴侧被盖部组织进行分散细胞原代培养,并用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色法鉴定其纯度.结果本实验可观察细胞历时20～30d的生长过程,并观察到细胞生长的第7～11d是细胞生长最旺盛的时期,最适宜加入处理因素观察细胞变化.培养10d的神经细胞进行TH免疫组化染色,可见胞浆被染成棕黄色的细胞遍布视野,阳性率达90%.结论体外培养的神经细胞可保持结构和功能上的某些特点,提供了体内生长过程在体外重现的可能,可广泛应用于PD病因和发病机制的研究.     

大鼠表皮细胞的体外培养及纯化方法

根据表皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶敏感性、贴壁时间及要求不同的,采用胰蛋白酶消化法和反复贴壁法相结合,能有效清除成纤维细胞的混合生长,获得纯化的表皮细胞。本方法经济、简便、实用。     

嗅神经鞘细胞的培养纯化及体外生长特性

采用原代培养的方法,从2,5月成年大鼠的嗅球分离培养嗅神经鞘细胞（OECs),培养6天后,用阿糖胞苷（Ara-C)抑制,差速贴壁,Forskolin和BPE营养物质处理,根据P75蛋白免疫细胞化学染色和形态学特征分析了所得细胞的纯度,同时对不同培养时期的OECs 的形态进行观察和纯化后的活力测定。实验结果显示：（1）这种纯化方法简单,经济,快捷,所得的OECS纯度可达95％以上,并且随培养时间延长,细胞仍保持较高的纯度。（2）在培养早期2天到5天主要以巨噬细胞状,多极状,不规则状为主,培养中期7天到20天主要以扁平的双极,三极为主。晚期20天以后呈现双极,三极形态,其起上有许多细小的棘突。93）其中以培养早中期细胞的活力较好,培养20天以后,细胞活力较差,本研究为以OECs 作为移植材料对促进神经再生的研究获得丰富的细胞来源奠定了基础。     

脊髓内源性物质对脊髓神经元在体外存活的影响

神经元在体外的存活是衡量一种营养因子有无神经营养作用的重要指标之一。我们用人胚制备脊髓提取液,并用Centricon(Millipo-re)将粗提取液分成<10KD、10-30KD及>30KD三种组份,研究了粗提取液及这三种组份对体外培养中的脊髓神经元存活的影响,结果表明加粗提取液及<10KD的实验组比对照组活性要好,表现在线粒体中琥珀酸脱氢酶活性高(MTT法),神经元中NSE活性高(NSE-ELISA法)及细胞生长合成的总蛋白的量高等方面。但以<10KD组份对细胞的促活作用最强,与对照组相比有显著性差异。以上结果显示人胚脊髓中存在对脊髓神经元有促进存活的物质。     

脊髓提取液对培养脊髓神经细胞中GABA能及DYN能神经元突起生长的影响

本文以体外培养的小鼠脊髓神经元为模型研究了人胚脊髓提取液对E 12—15小鼠脊髓中GABA能神经元和DNY能神经元的突起生长的营养作用,结果发现人胚脊髓提取液在蛋白浓度为250μg/ml时对GABA能神经元的突起生长无营养作用,但对DNY能神经元的突起生长有显著的促进作用。提示了人胚脊髓提取液中有促进神经元突起生长的营养物质,且对特定胎龄的不同的神经元有不同的作用。     

豚鼠脊髓前角神经元线状溶酶体的电镜酶细胞化学研究

本研究采用电镜金属盐法──三偏磷酸酶（ＴＭＰａｓｅ）细胞化学方法探讨了豚鼠脊髓前角神经无线状溶酶体（ＮＬＹ）的存在及其酶细胞化学特点。ＴＭＰａｓｅ是港酶体的标志酶之一。本研究首次以偏磷酸钠代替三偏磷酸钠为ＴＭＰａｓｅ的底物,很好地显示了ＮＬＹ的结构。ＴＭＰａｓｅ反应产物虽高电子密度的黑色铅盐沉淀,不仅分布于圆形溶酶体,也可见于ＮＬＹ,同时,在高尔基复合体的部分板层也有酶活性分布,可能酶是经高尔基复合体加工后输送至溶酶体。ＮＬＹ在神经元胞体,突起及突触中均有分布,并且从胞体到神经终末均有ＮＬＹ和线粒体相贴现象,提示酶是由依赖于线粒体提供运动能量的ＮＬＹ从胞体输送到神经终末,这可能和ＮＬＹ参与神经递质的降解及神经元代谢物质的处理密切相关。     

体外培养的鸡胚神经元迁移的光镜和扫描电镜的研究

用鸡胚神经细胞为材料,建立神经细胞体外培养技术,相差显微镜观察到鸡胚神经元可以沿着神经胶质细胞纤维运动。扫描电子显微镜揭示体外培养神经元与胶质细胞的关系。     

脊神经节感觉神经特异蛋白的分离纯化和鉴定

为进一步研究感觉神经特异蛋白２９ＫＤ的结构和功能,我们以兔脊神经节及背根纤维为材料,通过制备匀浆,离子交换层析ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ,高压液相凝胶过滤层析分离纯化了感觉神经特异蛋白２９ＫＤ,薄层扫描鉴定纯度为８０％以上,用蛋白质印迹法鉴定了该蛋白,并进行了该蛋白的稳定性观察。为该蛋白作为鉴定感觉神经元及其纤维的标志物,和研究感觉神经元的再生与功能打下了基础     

不同生理状态时脑电时间序列的三神复杂度计算比较

为了研究不同生理状态下的脑电复杂度变化特点,本文依照１９９４年徐京华等人应用的算法,对４种状态（安静睁眼、清醒闭目、浅度睡眠、深度睡眠）下的三种脑电复杂度（ＫＣ、Ｃ１、２）的变化规律进行了比较分析,ＫＣ与Ｃ１的变化相一致。从安静睁眼到清醒闭目到浅睡到深度睡眠,ＫＣ与Ｃ１值均依次下降。Ｃ２值的变化则与它们相反,尤其在深睡期显著升高。实验结果提示,复杂度可做为脑电时间序列的研究指标。     

不同生理状态时脑电时间序列的三神复杂度计算比较

为了研究不同生理状态下的脑电复杂度变化特点,本文依照１９９４年徐京等人应用的算法,对４种状态（安静睁眼,清醒闭目,浅度睡眠,深度睡眠）下的三种脑电复杂度（Ｋｃ,Ｃ１,Ｃ２）的变化规律进行了比较分析,Ｋｃ与Ｃ１的变化相一致,从安静睁眼剂的清醒闭目到浅睡到深度睡眠,Ｋｃ与Ｃ１值均依次下降,Ｃ２值的变化则与它们相反,尤其在深睡期显著升高,实验结果提示,复杂度可做为脑电时间序列的研究指标。     

PURIFICATION AND COMPARISON OF 2'',3''-CYCLIC NUCLEOTIDE 3''-PHOSPHOHYDROLASES FROM BOVINE BRAIN AND SPINAL CORD

The membrane-bound enzyme 2′,3′-cyclic nucleotide 3′-phosphohydrolase has been purified from acetone powders of bovine white matter and spinal cord. Affinity chromatography on AMP-Sepharose has been used as the final step in the chromatographic purifications. The yield was about 3 mg of purified enzyme per 100 g of tissue in each instance. The enzymes from the two sources were indistinguishable by chromatography, gel electrophoresis, and amino acid analysis; the enzyme from spinal cord, however, has shown a specific activity of 225 units/mg compared to 342 units/mg for the enzyme from white matter. Both proteins had a molecular weight of 100,000 by gel filtration and 50,000 by sodium dodecyl sulfate-gel electrophoresis under reducing conditions. The properties of the enzyme, including amino acid composition determined on the purified soluble protein and on the protein purified by sodium dodecyl sulfate-gel electrophoresis, were those of a basic hydrophobic protein.     

脊髓培养神经元中微管相关蛋白-5的分布及可塑性

用新生 Wistar大鼠进行脊髓神经元培养 ,研究微管相关蛋白 - 5与其单克隆抗体结合后的分布情况。使用微管解聚药 nocodazole处理神经元 ,应用免疫组织化学染色来观察微管相关蛋白 - 5的改变。另一组神经元使用 nocodazole处理后再用 PMA处理 ,观察微管相关蛋白 - 5及神经元的改变。结果表明 ,微管相关蛋白 - 5在胞浆及突起中均有分布 ,并随着培养天数的递增而递减。使用 nocodazole后神经元中微管相关蛋白 - 5的分布及数量明显减少。PMA处理神经元后尽管使微管相关蛋白 - 5的正常结构被破坏 ,而神经元的伸展却不受影响