一种改进的超薄聚丙烯酰胺等电聚焦电泳实验

目的:介绍一种自制、简易、高效的平板微型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳方法。方法:将载玻片黏合作为制胶模具,剪滤纸制成上样芯子进行等电聚焦电泳。结果:电泳条带清楚,样品容量大,电泳时间短,操作性强。结论:此方法简单、有效、实用,所需凝胶量少,节约成本,值得推广。     

刀豆球蛋白A亲和双向免疫电泳对人体α_1-抗胰蛋白酶分子变异体的研究

α_1-抗胰蛋白酶(AAT)是一种低分子量的血清糖蛋白,属于丝氨酸蛋白酶类的蛋白酶抑制剂。由于某些AAT遗传的分子变异体与肺退行性疾病、肝硬化、肝癌及其它炎症性疾病有关,因而受到人们的重视。现已发现AAT含有40多个等位基因,因而所表达的基因产物往往是抗原性一致而分子构型不同的各种蛋白质分子。Fagerhol等曾用酸性淀粉凝胶电     

利用等电聚焦电泳研究黄单胞菌分类

对黄单胞菌的4个种及29个致病变种的代表菌株进行了等电聚焦电泳研究,发现所测定的黄单胞菌种间、致病变种间蛋白质图谱差别很大。电泳结果经聚类分析表明,某些致病变种间的差别并不一定比种间的差别小,说明某些致病变种可以上升到种这一分类地位。引起细菌性黑颖病的黄单胞菌禾谷致病变种、小麦致病变种、大麦致病变种间差别很小,仅有6条蛋白质谱带的差别。因此这3个致病变种的分类地位需重新考虑,同时说明等电聚焦电泳对黄单胞菌种下分类具有一定指导意义。     

一种改良的醋酸纤维素膜血清蛋白等电聚焦电泳方法

目前在等电聚焦电泳技术中,应用最多的是聚丙烯酰胺凝胶平板薄层等电聚焦。该法具有分辨率高的优点,但需采用高纯度试剂,价格昂贵,而且超薄层制板(≤0.5mm)技术要求也较高,这些条件限制了它的推广应用。利用醋酸纤维素膜进行等电聚焦,则可弥补上述缺点。但众所周知,醋酸纤维素膜存在较强     

醋酸纤维素膜上的蛋白质等电聚焦电泳

等电聚焦电泳一般以聚丙烯酰胺作为支撑物。但凝胶配制麻烦,两性载体用量多,价格昂贵。利用醋酸纤维素膜进行等电聚焦电泳,则可能克服上述缺点。但是醋酸纤维素膜的强电渗作用,影响了等电聚焦。过去解决这一问题的方法,条件复杂,要求高,有些试剂国内无法得到。我们试用了甲基化方法来封闭醋酸纤维素膜上的解离基团,有效地消除了电渗作用,不需转移而直接进行了大鼠血浆凝血酶原的酶联免疫染色。     

薄层凝胶等电聚焦电泳的快速简便制胶方法

在薄层凝胶等电聚焦电泳技术中,制胶可谓是关键的一步。如果制胶失败,将造成时间上的浪费和经济上的损失(凝胶中所用的两性电解质载体——安福林的价格较昂贵)。如果制成的凝胶薄厚不匀或无支撑物,将会直接影响实验结果或给实验操作带来麻烦。我们针对这种情况,结合实验教学,摸索出一种快速、简便而效果较好的制胶方法。现简要介绍如下     

我国几种常见毒蛇蛇毒的凝胶等电聚焦电泳

本文报导了用凝胶聚焦电泳方法分离我国常见的蝮蛇、尖吻蝮、蝰蛇、金环蛇、银环蛇、眼镜蛇、眼镜王蛇七种毒蛇蛇毒,它们的电泳区带数分别为34、33、35、26、24、23、23。在操作过程中,凝胶中加入7M尿素,蛇毒样品量500微克,pH3.5—10两性载体(Ampholinc),是获得良好结果的关键。     

梅花鹿茸组织中性激素受体的等电聚焦电泳测定

茸角是雄性梅花鹿(Cervus nippon hortulorum)的第二性征,具有脱落和再生的特征。这种现象在哺乳动物纲中是绝无仅有的。 茸角虽为第二性征,但其生长发育与性激素的关系似乎存在矛盾现象。因此,威斯洛克(Wislocki)提出茸角生长发育不受睾酮控制,而是腺垂体分泌的某种激素所调节的假说。但这种假说迄今未被证实。     

一种简单、快速、微量聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳方法

Bio-Rad公司的微量聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳(ModelⅢ Mini IEF Cell),不需要使用电极缓冲液,聚焦电泳时间仅用1.5小时,效果甚佳,但要使用该公司专有的凝胶支持薄膜,难于推广应用,我们经过试验,建立了一种简单、快速的微量凝胶等电聚焦电泳方法,40min完成等电聚焦过程,采用快速染色、脱色和干燥,将电泳图谱制成透明的薄膜,整个过程可以     

中国人红细胞PGM(PGM位点1)多态性的等电聚焦电泳研究

用等电聚焦电泳技术对北京地区180人进行红细胞葡萄糖磷酸变位酶(PGM_1)遗传表型的分析鉴定。共检测出九个PGM_1亚型,可能由于检测样本数还不够多,目前尚未检测到PGM_1 2-亚型。根据测定结果,观察了我国人群中PGM_1亚型的分布情况,并计算出决定PGM_1亚型的四个等位基因频率为:PGM~(1+)_10617,PGM~(1-)_1 0.100,PGM~(2+)_1 0.236,PGM~(2-)_10.047。采用等电聚焦电泳可将PGM_1的个体识别能力(DP值)由用普通淀粉胶电泳分型的0.558提高到0.742。结果与世界上其他国家和地区人群相似,PGM_1在我国人群中同样是一个个体识别能力很高的多态性酶类。     

单克隆抗体的等电聚焦

本文采用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦和Phast-system仪等电聚焦测定12份HBsAg McAb IgG的等电点,并对两种方法测定的误差和优缺点进行了讨论。     

目前最高分辨率的电泳──固相pH梯度等电聚焦

固相pH梯度等电聚焦是国际上80年代的新型电泳技术.利用一系列具有弱酸和弱碱性质的丙烯酰胺衍生物滴定时,在滴定终点附近形成的pH梯度并参与丙烯酰胺的共价聚合,从而形成固定的不随环境电场等条件变化的pH梯度,该方法具有比传统载体两性电解质等电聚焦更高的分辨率、更大的上样量.可用于分析和制备相近pI的蛋白质,多肽等.     

全柱成像毛细管等电聚焦电泳测定艾塞那肽等电点

目的:采用新一代全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术(CIEF-WCID)测定艾塞那肽等电点。方法:采用互补性金属氧化物半导体成像技术对样品等电聚焦过程进行实时记录,根据适宜的marker计算得到艾塞那肽的等电点,并对方法的准确度与重复性进行考察。结果:测得艾塞那肽等电点为5.46,与凝胶电泳结果基本一致,相对标准偏差为0.11%。CIEF-WCID方法快速准确,相对误差小于2.5%,重复性良好。结论:CIEF-WCID作为一种新的技术手段可用于艾塞那肽等电点的分析,方法快速、准确、重复性好,可为多肽的质量控制提供一种可靠的分析方法。     

种子蛋白质超薄等电聚焦电泳鉴定杂交水稻种子纯度的准确性初探

分别用超薄等电聚焦电泳技术和田间小区种植技术鉴定杂交水稻64SxEP431 F1种子纯度和比较两者吻合程度的结果表明这两种方法鉴定的纯度完全吻合.显示超薄等电聚焦电泳技术可用于鉴定杂交水稻种子纯度.     

不同年龄,性别的眼镜蛇毒等电聚焦电泳及氨基酸分析

观察对不同年龄,不同性别的眼镜蛇毒分离和鉴定效果。方法等电聚焦电泳和氨基酸分析法。结果幼龄雄性眼镜蛇毒区带数远比成年者多,其氨基酸组成亦有不同。结论幼龄蛇与成年蛇蛇毒所含蛋白质种类和含量有所不同。     

一种蛋白质等电聚焦银染色方法

等电聚焦是蛋白质分析的一种常用方法。在实际工作中,常因一些生物材料蛋白含量太低,常规的考马斯亮蓝染色不能显示区带,给研究工作带来困难。人们曾考虑聚焦后用超敏感的硝酸银染色法克服之,但因聚焦后凝胶上含有Ampholine而往往不能得到满意的结果。我们经过一段时间的摸索,染色获得成功。现简介如下。 一、固定与浸泡     

超薄层等电聚焦电泳对白血病小鼠胸腺和脾淋巴细胞脱氢酶同工酶的分析

用高分辨力的等电聚焦技术分析615和L615小鼠胸腺及脾淋巴细胞 LDH 同工酶,表明两种小鼠胸腺淋巴细胞同工酶酶谱相同,具有相同等电点的条带含量无显著性差异;而两种小鼠脾淋巴细胞同工酶酶谱不同,某些具有相同等电点的同工酶带含量有显著或极显著性差异。     

一种简便的薄层等电聚焦分析电泳装置

薄层等电聚焦分析电泳是近年来发展起来的一种高分辨率的蛋白质分析技术。等电聚焦是利用两性载体电解质,在外加电场的作用下,形成稳定的pH梯度,使得蛋白质、酶及多肽按其各自不同的等电点聚焦在相应的pH位置上,以便达到分离的目的。薄层等电聚焦分析电泳可以在一块薄层胶片上分析多个样品,操作方便、分辨率高,所以被人们广泛地采用。本文介绍一种简便的薄层等电聚焦分析电泳装置,它适用于我们现有的一般实验室条件,勿需进口成套贵重设备,同样能得到满意的分析结果。 1.电泳装置的配备我们自制了简易的电极架(图1)。上架用     

普通烟草和黄花烟草及体细胞杂种过氧化物酶同工酶等电聚焦电泳

日本学者长尾照义(1978)用原生质体融合获得普通烟草与黄花烟草的体细胞杂种植株。1980年陈家玉等在国内首先获得普通烟草(Copus Yeusuku No.4)和黄花烟草(Yellow Flower)的体细胞杂种植株。之后,中国农科院烟草所(1981)也得到相同的结果。陈家玉等(1983)对上述杂种进行了形态学、细胞学和同工酶的分析并取得一定的结果。Dlineee等(1975)分析比较了用等电聚焦技术分离的过氧