基质金属蛋白酶-2,-9在子宫腺肌病的表达

目的　探讨基质金属蛋白酶 2 , 9(MMP 2 , 9)在子宫腺肌病的表达及与发病机制的关系。方法　采用免疫组织化学SP法对 2 8例子宫腺肌病 (疾病组 )异位及原位内膜 ,35例子宫肌瘤 (对照组 )原位内膜中MMP 2 , 9的表达进行测定 ,应用图像分析系统分析MMP 2 , 9平均光密度值。结果　MMP 2 , 9于两组原位内膜中表达均呈月经周期依赖性 ,分泌期的表达强度高于增生期 (P <0 0 5 ) ;于疾病组异位内膜中表达无周期性显著差异 (P >0 0 5 )。疾病组内增生期异位内膜MMP 2 , 9的表达强度高于原位内膜 (P <0 0 5 )。疾病组整个月经周期中 ,MMP 2 , 9于原位及异位内膜的表达皆持续明显高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　研究显示子宫腺肌病原位和异位内膜MMP 2 , 9的过度表达可能与其发病机制有关     

MMP-2, -9, -14及其抑制剂TIMP-1, -2, -3在恒河猴周期黄体中的时空表达

用原位杂交和免疫组织化学方法研究了基质金属蛋白酶MMP-2, -9, -14及其组织抑制因子TIMP-1, -2, -3在恒河猴周期黄体发育不同阶段的协同表达. 结果显示: MMP-2 mRNA及其蛋白主要表达在早中期发育黄体的内皮细胞上, 在晚期黄体发生萎缩时则大量表达于黄体细胞; MMP-9, -14及其TIMP-1, -2, -3主要表达于黄体细胞; MMP-14 mRNA在早期和晚期黄体中高表达, MMP-9蛋白只在晚期黄体中高表达; TIMP-3蛋白在早、中、晚三期黄体中表达均较高, 但很明显晚期表达降低. 结果提示: MMP/TIMP系统参与灵长类黄体发育的调控, MMP-2, -14及其TIMP-1, -3可能参与黄体的形成和功能维持, 同时MMP-2, -9, -14及其TIMP-1, -2, -3在黄体萎缩期的协同表达, 提示它们可能在黄体发生萎缩时发挥作用.     

基质金属蛋白酶2、9和血管内皮生长因子在碱烧伤小鼠角膜组织中的表达

采取滤纸片放置法,用1mol／L的NaOH在小鼠角膜中央进行碱烧伤,建立动物模型。取烧伤前和烧伤后的小鼠角膜制备组织切片,用抗MMP2、抗MMP9和抗VEGF的抗体分别进行免疫组化染色,检测它们在碱烧伤前后的小鼠角膜组织中的蛋白表达情况;提取碱烧伤前和碱烧伤后不同时间点的小鼠角膜组织的总RNA并进行逆转录,以获得的逆转录产物作为模板,用特异的引物和探针进行实时定量PCR,分别检测MMP2、MMP9和VEGF在碱烧伤前后的小鼠角膜组织中转录水平的变化;提取碱烧伤前后小鼠角膜的蛋白组分,用明胶底物酶谱的方法检测其中MMP2和MMP9的活性变化。结果表明,浸透1mol／L的NaOH的滤纸小片,对小鼠角膜进行碱烧伤可以有效地诱导角膜新生血管形成,烧伤后3-4d就有明显的新生血管形成,至第8、9d左右开始退行。免疫组化结果显示,正常角膜中没有MMP9和VEGF表达,MMP2表达极低;碱烧伤后3种因子的表达均上升。实时定量PCR的结果显示MMP2在碱烧伤后表达升高,第3d达到最高随后下降;MMP9在正常角膜组织中没有表达,碱烧伤后第1d达到最高之后开始下降;VEGF在正常角膜中也没有表达,碱烧伤后第4d达到高峰之后开始下降。以上结果说明碱烧伤后的角膜组织中MMP2、MMP9和VEGF的表达均经历先上升后下降的变化,与角膜愈合及新生血管发育和退化过程相吻合。     

金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1,-3)mRNA在小鼠胎盘中的表达

本实验利用原位杂交对小鼠妊娠不同时期胎盘中MMP－2,TIMP－2,－3mRNA的表达进行了研究。结果表明;MMP－2主要在具有很强的侵润能力的海绵滋养层细胞中表达,到妊娠13．5天时,MMP－2的表达明显降低,说明此时的滋养层细胞基本上失去侵润能力。TMIP－1和TMIP－3在滋养层细胞和蜕膜细胞中都有表达,这两种抑制因子的协同表达,一方面能够调控滋养层细胞侵入子宫内膜的深度,另一方面,滋养层细胞自身既表达MMP－2又表达TIMPs,可能对其自身有保护作用,使得MMP的水解功能局限于子宫蜕膜的特定区域。在妊娠10．5天,滋养层巨细胞同时表达TIMP－1,－3mRNA,这可能与其功能的转换是一致的;因为此时小鼠滋养层巨细胞体积最大,且不再增殖,同时其功能屯从侵入型向内分泌型转换。所以,MMPs和TIMPs在小鼠滋养层细胞和子宫蜕膜中的协同表达表明其在着床过程中可能发挥重要作用。     

基质金属蛋白酶-2在酵母系统中表达的初步研究

基质金属蛋白酶-2（明胶酶A）在肿瘤侵袭和转移中具有重要作用,为进一步研究其作用机制,在酵母系统中表达了金属蛋白酶-2通过PCR方法获得明胶酶A的表达序列,酶切和测序结果证明序列正确后,构建明胶酶A的表达载体pPIC9/GelA,电击法转化酵母得到阳性克隆.明胶酶谱分析说明表达产物具有明胶底物特异性,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,表达产物的分子质量为66 ku.     

基质金属蛋白酶(MMP)-2、-9和-14在恒河猴乳腺中的表达

基质金属蛋白酶(MMP)-2、-9和-14在恒河猴乳腺中的表达@纪少珲$中国科学院昆明动物研究所动物生殖生物学云南省重点实验室! 中国 昆明652223 @王雁玲$中国科学院动物研究所(北京)计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国北京100080 @王训立$中国福建计划生育研究非人灵长类实验中心! 中国福州350011 @柏素霞$中国科学院动物研究所(北京)计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国北京100080 @肖志洁$中国科学院动物研究所(北京)计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国北京100080 @秦力$中国科学院动物研究所(北京)…     

人基质金属蛋白酶-9在酵母Pichia pastoris中的表达

基质金属蛋白酶 - 9( MMP- 9)可促进恶性肿瘤的侵袭、转移 ,并在组织重建、胚胎发育以及伤口愈合等生理过程中发挥重要作用 .为研究这一蛋白的性质 ,并以之为靶标筛选抗肿瘤转移药物 ,在酵母 Pichia pastoris中实现了重组人 MMP- 9蛋白的高效、高活性、分泌表达 .首先用 PCR扩增了 MMP- 9基因编码区 (不含信号肽序列 ) ,经测序证实后 ,将其插入 p PIC9质粒中 ,构建表达载体 .用 Li C1 - PEG法转化酵母后 ,采用明胶 -酶谱法筛选获得 5株高效分泌表达 MMP- 9的克隆 ,经PCR证实 MMP- 9基因整合在阳性克隆的染色体中 .重组蛋白分子量为 93k D,表达量为 1 0 mg/L.重组蛋白可水解明胶及 型胶原 ,并可经有机汞 APMA诱导发生自剪切 ,转换成 85k D的激活形式 ,表明重组蛋白具有与天然人 MMP- 9蛋白相似的底物水解活性和自剪切激活特性 .     

人基质金属蛋白酶-2的表达、纯化和性质鉴定

PCR方法扩增人基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )不含信号肽的表达序列 ,酶切和测序鉴定正确后 ,构建酵母重组表达质粒pPIC9 MMP 2 ,电击法转化毕赤酵母 (Pichiapastoris)细胞得到阳性克隆 ,甲醇诱导获得含大量基质金属蛋白酶 2的培养上清 ,经SephacrylS 2 0 0纯化后 ,纯度达到电泳纯。明胶酶谱和SDS PAGE分析说明重组MMP 2能够降解明胶和IV型胶原 ,表明重组蛋白具有与天然MMP 2相似的底物特异性。糖基化分析和SDS PAGE表明 ,表达产物的分子量约为 5 0kD ,重组MMP 2的C 末段可能发生了降解。     

利用骨骼肌细胞高效表达人基质金属蛋白酶-9

为探讨利用培养的骨骼肌细胞表达人基质金属蛋白酶的可行性,利用PCR和DNA重组技术构建人mmp-9-myc-his/pcDNA3基因表达载体,转染成肌细胞QM-7,G418筛选阳性转染子.诱导细胞分化成肌管后,收集细胞培养上清.经Western印迹检测,表达产物分子量为93kD,与蛋白标准品对照推测表达量约10~15mg/L.利用Ni-NTA琼脂糖从1L培养上清中纯化到4~6mgMMP-9纯品,纯化效率约50%.经明胶酶谱检测,表达蛋白可以降解明胶.这些结果表明所表达的MMP-9具有生物活性,为以MMP-9为靶分子的特异拮抗剂和/或药物的筛选、MMP-9定量检测试剂盒的开发以及MMP-9的功能研究奠定了基础;以鹌鹑成肌细胞QM-7作为外源蛋白脊椎动物细胞表达体系具有表达量高、经济等优点,有可能进一步研究开发成为新的外源重组蛋白脊椎动物细胞表达体系.     

基质金属蛋白酶3、9在升主动脉瘤中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶3、9(MMP-3、MMP-9)在升主动脉瘤发病机制中的作用.方法将40只幼年Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,制备升主动脉缩窄鼠模型.于术后3-5个月取升主动脉,采用HE染色和免疫组化技术,观察升主动脉形态学变化及MMP-3、MMP-9的蛋白表达.结果升主动脉瘤中MMP-3、MMP-9表达强阳性.结论 MMP-3、MMP-9在升主动脉瘤成因中有可能有重要作用.     

基质金属蛋白酶-9 与脑出血的关系

基质金属蛋白酶(MMPs)是一族锌离子依赖性内肽酶,具有降解细胞外基质的作用,而后者是构成血管基底膜的主要成分。MMPs参与了伤口愈合、动脉硬化发生、肿瘤细胞扩散等过程。MMP-9是MMPs中的重要成员,与脑血管病关系密切,在脑出血的发生、发展过程中起到了重要的作用。因此,监测MMP-9表达水平的变化可能对脑出血的发生、发展及预后产生重要影响;而降低MMP-9表达水平,则可能成为治疗脑出血的新途径。     

组织基质金属蛋白酶抑制剂-2的表达纯化及活性鉴定

组织基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)抑制肿瘤迁移及侵袭。文中以人TIMP-2为研究对象,探索人TIMP-2蛋白的原核表达特征,并进行纯化及活性鉴定。以人肺癌A549细胞的总RNA反转录得到的cDNA为模板,克隆人TIMP-2基因,构建pET28a重组表达载体;经酶切检测和测序分析的重组表达载体pET28a-TIMP-2转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对表达条件进行优化。经镍亲和柱纯化后,用Westernblotting法鉴定融合蛋白His-TIMP-2,并用明胶酶谱法检测融合蛋白的活性。研究发现融合蛋白His-TIMP-2在E.coliBL21(DE3)中以包涵体的形式存在;在一定范围内,IPTG浓度对His-TIMP-2的表达量没有显著影响;而在该表达系统中,诱导温度和时间是关键参数,His-TIMP-2的表达量随诱导温度升高而增加;纯化并复性后的融合蛋白His-TIMP-2能有效抑制人肺癌A549细胞表达的基质金属蛋白酶的活性。具有活性的融合蛋白的获得为后续深入研究人TIMP-2的功...     

兔肝VX2肿瘤射频消融术后残癌中基质金属蛋白酶9表达

目的:探讨兔肝脏VX2肿瘤射频消融术(radio-frequency ablation,RFA)后残余肿瘤组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。方法:超声引导下将VX2肿瘤组织块接种于23只新西兰大白兔肝脏中,造模成功后随机分为5组,对照组(A组,n=3),不行RFA治疗;余20只为实验组行RFA治疗,在超声引导下射频针插入肿瘤偏心位置,展开电极致损毁范围最大为肿瘤总体积的2/3,人为造成残存肿瘤组织。根据治疗结束后不同时间点分为4组:0小时组(B组,n=5)、术后1周组(C组,n=5)、术后2周组(D组,n=5)、术后4周组(E组,n=5),行超声检查结束后处死大白兔,取肿瘤组织采取免疫组化法观察残存肿瘤组织中及未治疗肿瘤组中MMP-9的表达情况。结果:RFA术后0小时、1周、2周、4周残存肿瘤组织中MMP-9的表达均较对照组明显降低(P0.05)。结论:RFA治疗后残存肿瘤细胞中MMP-9水平表达减低。     

恒河猴细菌感染性子宫出血模型内膜组织基质金属蛋白酶1、9及其抑制剂的表达

目的　探讨基质金属蛋白酶 1、9在炎性子宫出血中的作用。方法　运用免疫组化链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶染色法 (SP)检测细菌感染性子宫出血恒河猴模型组子宫内膜组织中基质金属蛋白酶 1、9(MMP 1、MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)的表达 ,用正常恒河猴子宫内膜作对照。结果　模型组子宫内膜组织间质、腺上皮中MMP 1、9的表达明显高于正常对照组 ,而TIMP 1的表达与正常组水平相似。结论　基质金属蛋白酶 1、9的高度表达可能与炎症导致的异常子宫出血有关。