改组猪IL-2和重组IL-6C基因增强猪口蹄疫疫苗的免疫应答

以离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒,包裹重组改组的猪IL-2基因表达质粒(VRIL2S)、重组IL-6和CpG(VPIL6C)质粒(CNP-VRIL2S-VPIL6C-CNP), 按0.5 mg/头肌肉注射壳聚糖包装质粒接种21日龄健康三元杂交猪,同时肌肉注射免疫灭活口蹄疫疫苗;在免疫后7、14、28、42和56 d,采血检测实验猪的免疫球蛋白、特异抗体和免疫细胞的动态变化.结果发现:接种后56 d,改组猪IL-2和重组IL-6C质粒接种猪血液中的特异性抗口蹄疫抗体、IgG、IgA和IgM含量均较对照空白疫苗免疫猪显著升高(P<0.05),其IL-2、IL-6水平和淋巴细胞、单核细胞的数量也相应较灭活疫苗对照组明显增加(P<0.05).这些证明猪IL-2和IL-6基因与CpG有良好的免疫协同增强效应,能有效地增强疫苗的特异体液和细胞免疫应答反应,可作为安全高效的新型免疫基因分子佐剂,促进猪对口蹄疫疫苗的免疫防御抗病力,抵御口蹄疫的感染.     

CpG ODN增强rHBsAg疫苗对小鼠免疫应答影响的研究

通过CpG寡核苷酸(CpG ODN)与重组HBsAg蛋白疫苗(rHBsAg)联合免疫C57BL/6BL/6小鼠,观察CpG ODN对小鼠免疫状况的影响。试验分对照、乙肝疫苗以及用乙肝疫苗加CpG三组,MTT法分别进行HBsAg特异性刺激淋巴细胞转化试验、HBsAg特异性刺激细胞毒性T细胞杀伤试验、自然杀伤细胞非特异性杀伤试验,以及ConA刺激淋巴细胞转化试验;ELISA测定HBsAb、INF-γ、IL-12和IL-4结果中,疫苗加CpG组抗原特异性转化试验指数为4.05±0.31;疫苗加CpG组抗原特异性CTL率为82.27±22.64,在统计学上差异显著(P<0.05);而HBsAb、INF-γ、IL-12的结果分别为51.85±14.41、802.25±104.25和373.62±66.58,与对照组及疫苗组比较,差异显著(P<0.05)。CpG ODN能作为一种新的免疫佐剂更好地增强重组乙肝表面抗原蛋白疫苗诱导小鼠产生高效的体液和细胞免疫应答。     

CpG基序重组质粒增强小鼠免疫和抗病力的效应

为研制安全高效免疫调节剂增强动物免疫抗病能力,本实验设计合成含11个CpG基序的寡聚核苷酸,重组构建含CpG的VR1012质粒(VR1C);制备壳聚糖纳米颗粒包裹重组质粒(CNP-VR1C),肌注接种3周龄昆明小鼠;接种后28天口服大肠杆菌攻毒观察小鼠天然免疫的变化和对强毒感染的抵抗力,Sandwich ELISA测定血清免疫球蛋白和白细胞介素含量。结果表明:CNP-VR1C能显著提高小鼠的天然免疫水平,增强对强毒感染的抵抗力,具有研制为高效安全分子免疫增强剂的应用潜力。     

佐剂CpG-ODN与重组HBsAg疫苗联合免疫乙型肝炎病毒转基因小鼠的免疫应答研究

目的 以CpG-ODN为佐剂与重组HBsAg(rHBsAg)疫苗合用,研究其对乙型肝炎病毒转基因(HBV Tg)小鼠模型的免疫应答效果.方法 40只HBV Tg小鼠随机分为4组,每组小鼠分别注射rHBsAg疫苗(单用rHBsAg组)、rHBsAg疫苗+CpG-ODN(试验组)、rIFNα-2b(IFN组)、生理盐水(对照组).经多次免疫HBV转基因小鼠,于免疫前、后不同时间采血,动态观察各组小鼠血清中HBsAg量、抗-HBs阳性率和HBV DNA的变化,检测肝组织中HBsAg的表达.检测免疫小鼠的外周血T淋巴细胞亚群和白细胞介素2(IL-2)、IL-12(p70)以及γ干扰素(IFN-γ)的含量,分别检测免疫小鼠的脾细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤功能并计算各组小鼠肝组织活性指数(HAI).结果 rHBsAg组和rHBsAg+CpG组在免疫小鼠后2周100%诱导抗-HBs;rHBsAg+CpG组能显著降低血清中的HBsAg量或使HBsAg转阴,rHBsAg+CpG组肝组织中HBsAg的表达量与血清中一样降低,并降低血清中HBV DNA的拷贝数.rHBsAg组的CD3+、CD4+、CD8+细胞在T细胞中所占百分比,IL-2、IL-12(p70)和IFN-γ的含量以及淋巴细胞特异性增殖和杀伤效应均明显高于对照组(P＜0.05).rHBsAg+CpG组与rHBsAg组比较,免疫小鼠产生更强的HBV特异性细胞应答(P＜0.05),且以Th1型细胞免疫应答为主.在rHBsAg+CpG组肝组织中出现大量淋巴细胞,肝脏的HAI在4个组中最高.结论 CpG-ODN作为佐剂可以增强重组HBsAg疫苗诱导HBV转基因小鼠产生抗病毒免疫应答,重组HBsAg疫苗辅以CpG ODN可作为免疫治疗慢性HBV感染的可行性途经.     

Aβ_(1~15)疫苗预防Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的研究

探讨Aβ亚单位疫苗接种后对Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的预防作用.32只5月龄Tg2576小鼠随机分成4组:对照组(只接种佐剂),Aβ42组(接种Aβ42疫苗),Aβ1~15组(接种Aβ1~15疫苗)和Aβ36~42组(接种Aβ36~42疫苗),每组8只.3组接种疫苗小鼠的血清抗Aβ42抗体滴度比对照组显著增高;脑组织匀浆内也可检测到少量抗体.Morris水迷宫实验结果显示Aβ42组、Aβ1~15组和Aβ36~42组与对照组小鼠的行为学有明显改善.取各组2只小鼠的脾细胞培养,经ConA或各自抗原刺激后,3组疫苗免疫后小鼠脾细胞增殖显著高于对照组;Aβ42组,IL-4和IL-10相对较高,而IL-2和INF-γ相对较低;Aβ1~15组中IL-4和IL-10较高;Aβ36~42组IL-2和INF-γ较高.免疫组织化学法显示对照组小鼠脑皮质与海马部位有大量老年斑,而Aβ42组和Aβ1~15组脑内无老年斑出现,Aβ36~42组小鼠脑内有少量老年斑.实验证明Aβ1~15亚单位疫苗可防止Tg2576小鼠认知行为的退化,阻止Tg2576小鼠脑内Aβ沉积和老年斑的形成.     

利用小鼠模型评价含有5‘—GTCGTT—3’特征序列的人CpG寡脱氧核苷酸的免疫刺激活性

为了寻找合适的动物模型来评价人CpG寡脱氧核苷酸（CpG－ODN）的活性,研究了CpG2006等含有5‘－GTCGTT－3‘特征序列的人CpG－ODN对小鼠的免疫刺激活性。在体外它们能够促进小鼠脾淋巴细胞转化,促进B细胞分泌IgM ,但不能诱生高水平的IFN－γ。研究了CpG2006等序列在体内作为疫苗佐剂对HBsAg免疫效果的影响,发现：（1）人CpG－ODN能够明显提高抗－HBs抗体水平,并逆转Al(OH)3对T 卤类免疫应答的抑制;(2)初免时以CpG2006为佐剂可以使免疫应答“销定”在Thl类免疫应答,而加强免疫时以CpG2006为佐剂可以在一定程度上逆转初免时Al（OH）3诱生的Th2类免疫应答;（3）CpG2006联合Al(OH)3作为佐剂的单剂量疫苗的免疫效果强于两剂量以Al(OH)3为佐剂的常规疫苗,上述结果表明：小鼠可以作为动物模型用于含有5‘－GTCGTT－3‘特征序列的人CpG－ODN免疫效果的研究。     

Aβ1-15疫苗预防Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的研究

探讨Aβ亚单位疫苗接种后对Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的预防作用．32只5月龄Tg2576小鼠随机分成4组：对照组（只接种佐剂）,Aβ42组（接种Aβ42疫苗）,Aβ1-15小组（接种Aβ1-15疫苗）和Aβ36-42组（接种Aβ36-42疫苗）,每组8只,3组接种疫苗小鼠的血清抗Aβ42抗体滴度比对照组显著增高;脑组织匀浆内也可检测到少量抗体．Morris水迷宫实验结果显示Aβ42组、Aβ1-15小组和Aβ36-42组与对照组小鼠的行为学有明显改善．取各组2只小鼠的脾细胞培养,经Con A或各自抗原刺激后,3组疫苗免疫后小鼠脾细胞增殖显著高于对照组;Aβ42组,IL-4和IL-10相对较高,而IL-2和INF-γ相对较低;Aβ1-15小组中IL-4和IL-10较高;Aβ36-42组IL-2和INF-γ较高．免疫组织化学法显示对照组小鼠脑皮质与海马部位有大量老年斑,而Aβ42组和Aβ1-15组脑内无老年斑出现,Aβ36-42组小鼠脑内有少量老年斑．实验证明Aβ1-15亚单位疫苗可防止Tg2576小鼠认知行为的退化,阻止Tg2576小鼠脑内Aβ沉积和老年斑的形成．     

CpG ODN B对鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫增强效应

目的:探究CpG ODN作为疫苗佐剂对鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫效果。方法:将CpG ODN B/P这2种类型的免疫佐剂分别与鸡新城疫重组杆状病毒载体疫苗BV-BXY-F混合后,以鼻腔免疫方式进行鸡体免疫,并进行攻毒保护实验,通过对鸡体的临床症状观察,以及检测免疫保护率、中和抗体水平、淋巴细胞增殖活性、细胞因子含量,分析各CpG ODN对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响。结果:BV-BXY-F+CpG ODN B免疫组鸡在免疫后42 d中和抗体效价最高,免疫保护率100%,中和抗体效价,sIgA、IgG、IgA、IFN-γ、IL-2、IL-4、CD4+T细胞、CD8+T细胞含量较BV-BXY-F+CpG ODN P组分别提高了32.08%、8.44%、13.56%、23.71%、50.20%、132.97%、39.76%、38.43%、25.99%,且差异显著(P0.05),与单独免疫组BV-BXY-F相比分别提高了13.71%、89.39%、10.41%、21.26%、159.17%、52.71%、237.84%、80.51%、75.57%。结论:CpG ODN B对增强鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫增强效果最好。     

CpG寡核苷酸联合热固化瘤苗对肝癌细胞Hca-F荷瘤小鼠的免疫治疗研究

目的探讨CpG寡核苷酸(ODN)联合热固化瘤苗的抗肿瘤作用。方法剥取肿瘤．称重并计算抑瘤率;MTT法测免疫小鼠CTL、Mψ和CTL细胞的体外杀伤活性;ELISA法测免疫小鼠血清中IL-10、IL-12水平。结果联合使用CpG ODN和热固化瘤苗可以诱导荷瘤小鼠的抑瘤作用,其抑瘤率与单独使用瘤苗或CpG ODN比较差异有显著性;联合使用CpG ODN和热固化瘤苗可以提高荷瘤小鼠NK、Mψ和CTL细胞的体外杀伤活性,与单独使用瘤苗组相比较,差异具有显著性,但与单独使用CpG ODN组相比较,NK、Mψ细胞的体外杀伤活性差异无显著性;联合使用CpG ODN和热固化瘤苗可以提高荷瘤小鼠血清中IL-12水平并降低血清中IL-10水平,与二者单独使用组比较差异都具有显著性。结论联合使用CpG ODN和热固化瘤苗能显著提高机体的免疫功能,尤其是特异性细胞免疫功能。     

Ⅱ类MHC在接种流感疫苗后诱导保护性免疫应答中的作用

<正>MHCⅡ类缺陷(MHC-II KO;Aβ-/-)小鼠用于评价MHC-II类分子在接种疫苗后诱导保护性免疫应答中的作用。接种流感A/PR8病毒样颗粒(VLP)疫苗后,完全不同于CD4 T细胞缺陷小鼠,在MHCⅡ类分子缺陷小鼠体内外均未检测到疫苗特异性免疫球蛋白Ig G抗体。缺乏MHCⅡ类分子并没有明显影响血清中诱导产生特异性Ig M抗体。用     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Principles of organization and evolution of systems of regulation of functions

Evolution of living organisms is closely connected with evolution of structure of the system of regulations and its mechanisms. The functional ground of regulations is chemical signalization. As early as in unicellular organisms there is a set of signal mechanisms providing their life activity and orientation in space and time. Subsequent evolution of ways of chemical signalization followed the way of development of delivery pathways of chemical signal and development of mechanisms of its regulation. The mechanism of chemical regulation of the signal interaction is discussed by the example of the specialized system of transduction of signal from neuron to neuron, of effect of hormone on the epithelial cell and modulation of this effect. These mechanisms are considered as the most important ways of the fine and precise adaptation of chemical signalization underlying functioning of physiological systems and organs of the living organism